黃連上清片與黃連上清丸中黃芩苷、梔子苷、歐前胡素等量性對比研究

曹恒濤申斌（安陽市食品藥品檢驗所，河南 安陽 455000；安陽市婦幼保健院）

黃連上清片與黃連上清丸中黃芩苷、梔子苷、歐前胡素等量性對比研究

曹恒濤1申斌2
（1安陽市食品藥品檢驗所，河南 安陽 455000；2安陽市婦幼保健院）

目的：比較黃連上清片、黃連上清丸的質量等量性。方法：通過測定樣品中梔子苷、黃芩苷和歐前胡素的含量，比較片劑與丸劑中3種成分的含量差異。結果：黃連上清片3種成分的含量為4.15，1.056，0.072 mg/劑次；水丸為9.17，2.75，0.049 mg/劑次；蜜丸為5.49，3.79，0.026 mg/劑次。這3種成分之和分別為5.28，11.97，9.31 mg/劑次。結論：黃連上清丸與黃連上清片這3種成分的含量之間存在明顯的不同，黃連上清片與黃連上清丸這3種成分之和也存在明顯的差異，黃連上清片與黃連上清丸的質量不等量。

黃連上清片；黃連上清丸；梔子苷；黃芩苷；歐前胡素；對比研究

黃連上清丸與黃連上清片為臨床常用中成藥，均收載于《中國藥典》2010年版［1]。兩者處方相同，功效用法相同，唯劑型不同。兩者因處方相同，同樣的服用量時，其所含有效成分的含量也應相近方能保證功效相近。《中國藥典》2010年版（一部）中規定了鹽酸小檗堿的含量而對其他成分含量未進行測定。方中梔子功偏上焦，清熱瀉火，去肺胃實熱，黃芩清熱燥濕，瀉火解毒，二者皆為君藥；白芷解表散寒，祛風止痛，為臣藥，其有效成分歐前胡素為其香豆素類代表成分。本文擬通過測定三者中的有效成分：梔子苷、黃芩苷和歐前胡素的含量，比較黃連上清丸與黃連上清片中3種成分含量差異，從而確定其功效是否一致，以達到改良處方或生產工藝，保證用藥有效的目的。

1儀器與材料

1.1實驗儀器

Waters e2695高效液相色譜儀（美國waters公司），MSA225-000-DU型電子天平（德國賽多利斯公司）。

1.2試劑與樣品

梔子苷（批號：110749-201115，99.7%），歐前胡素（批號：110827-201109），黃芩苷（批號：110715-201117，91.7%），均為中國食品藥品檢定研究院提供。乙腈（色譜純，J.T.Baker公司）。超純水為Molecular純水機制備。黃連上清片、黃連上清丸購于市場。

2方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：WatersSymmetry C18柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈，水；檢測器：waters 2998 PDA檢測器，240 nm處檢測梔子苷，300 nm處檢測黃芩苷及歐前胡素；流速：1.0 mL/min；柱溫：25℃。流動相梯度如表1。對照品圖譜、樣品圖譜和陰性樣品圖譜見圖1。

表1　　流動相梯度

圖1　黃連上清片高效液相色譜圖

2.2對照品溶液的制備

精密稱取梔子苷、黃芩苷和歐前胡素，加甲醇配制成濃度分別為0.127 9 mg/mL及83.117，4.011 μg/mL的對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取黃連上清片10片（水丸10 g），糖衣片除去糖衣，研細，精密稱取2 g（水丸精密稱取4 g）；或取重量差異項下大蜜丸，剪碎，精密稱取4 g，加硅藻土4 g，研細。置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質量，超聲提取30 min，放冷，用甲醇補足減失的質量，濾過，即得。

2.4陰性對照樣品的制備

按處方制備缺黃芩、梔子、白芷的陰性對照樣品，照“2.3”項下方法制得陰性樣品溶液。

2.5線性關系的考察

取“2.2”中對照品溶液按“2.1”色譜條件分別進樣 1，2，5，10，20，30和 40 μL并測定峰面積。以峰面積（Y，A）和進樣量（X，μg）做標準曲線。結果表明，梔子苷在0.128～2.558 μg范圍內線性關系良好，回歸方程為：

Y=1 221 760.2X+30 384.2（r=0.999 6）；

黃芩苷在 0.083～ 3.325 μg范圍內線性關系良好，回歸方程為：

Y=3 450 113.5X-31 148.7（r=0.999 9）；

歐前胡素在0.004 01～ 0.160 44 μg范圍內線性關系良好，回歸方程為：

Y=4 711 175.81X-2 340.98（r=0.999 9）。

2.6精密度試驗

取供試品溶液，連續進樣6次，測定各成分的峰面積。結果梔子苷RSD為0.66%；黃芩苷RSD 為1.51%；歐前胡素RSD為1.15%。

2.7穩定性試驗

取同一樣品溶液，分別在0，2，5，12，24 h測定含量。梔子苷RSD為0.66%，黃芩苷RSD為1.51%，歐前胡素RSD為1.15%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.8重復性試驗

同一樣品按“2.3”方法制備供試品溶液6份，按上述色譜條件測定。結果梔子苷含量的RSD為4.1%，黃芩苷含量的RSD為2.25%，歐前胡素含量的RSD為2.03%。

2.9加樣回收率測定

取樣品片劑30片，糖衣片除去糖衣，研細，精密稱取0.45 g 6份。分別精密加入歐前胡素0.026 74 mg，黃芩苷0.415 584 mg，梔子苷1.023 2mg，稱定質量，超聲提取30 min，放冷，用甲醇補足減失的質量，濾過，進樣，計算加樣回收率。結果見表2。

2.10樣品測定

取樣品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，依法測定，并轉換為每次服用量的含量（mg/劑次）。結果見表3。

3討論

3.1因梔子苷在 300 nm處無紫外吸收而黃芩苷和歐前胡素在240 nm無紫外吸收，因此采用PDA檢測器檢測，并在不同的波長處進行測定并計算含量。

3.2大蜜丸因含蜂蜜而不能粉碎，且甲醇超聲或加熱回流并不能使大蜜丸在溶液中徹底分散。在大蜜丸中加入不等量的硅藻土研細后依法檢測，發現不等量硅藻土并不會影響3種成分的含量。因此本文采用大蜜丸加硅藻土適量研細后再提取的方法來改進提取效率。

3.3中藥復方制劑質量的不均一性仍然是影響其質量的首要問題，質量的不均一也是使得中藥復方制劑的藥效物質基礎無法確切說明的重要原因之一［2]。劉睿［3]對中藥注射劑的研究也指出，各個生產步驟的工藝條件不同，批間操作一致性差，導致中藥注射劑質量難以保證均一穩定。為減少因工藝差異引起的誤差，選用水丸作為比較。本文測定的3批水丸樣品的梔子苷含量相差近4倍，黃芩苷相差近3倍，歐前胡素相差近8倍。分析這種差異可能的原因是原料藥材的質量有差別，或者未按處方量投料。而11批樣品中有兩批蜜丸未檢出歐前胡素，應當是投料時未投白芷，這與張少君等［4]的研究結論是一致的。因此要保證藥品質量或者功效的均一性，原料藥材的均一性和生產工藝的均一性缺一不可。

表2　　黃連上清片加樣回收率測定結果

表3　樣品含量測定結果　（mg/劑次）

3.4黃連上清丸、黃連上清片其處方、用法與功效相同，一次服用量時其有效成分含量應相當。對于藥材的處理會使藥材中的有效成分有所損失，因此依據生產工藝推測，有效成分的含量為水丸＞蜜丸 ＞ 片劑，而實驗結果分別為 11.97，9.31，5.28 mg/劑次，證明了這一推論。

3.5黃連上清片的一次服用量的3個成分的總計為5.28 mg/劑次，而水丸為11.97 mg/劑次，蜜丸為9.31 mg/劑次，黃連上清片的3種待測成分與丸劑相應成分相差近2倍，說明兩者的質量不等量，進而功效相差懸殊。因此欲使黃連上清片達到與黃連上清丸相同的功效，應當修改黃連上清片的服用量、處方或者生產工藝，使有效成分與黃連上清丸相當，才能保證用藥的有效。

［1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：1067-1068.

［2]唐顯虹.不同廠家黃連上清片特征指紋圖譜比較［J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（24）：67-71.

［3]劉睿.中藥注射劑質量控制的研究進展［J].中國執業藥師，2013，10（3）：37-42.

［4]張少君，車燕妮，蘇秀娟，等.高效液相色譜法構建黃連上清丸指紋圖譜［J].中國科技信息，2013，（19）：32-35.

Compartive Study on Quality Equivalence of Geniposide，Baicalin and Imperatorin in Huanglianshangqing Tablets and Huanglianshangqing Pills

Cao Hengtao1，Shen Bin2（1 Anyang City Institute of Food and Drug Control，Henan Anyang 455000，China；2 Anyang Maternal and Child Health Care Hospital）

Objective：To compare the quality equivalence of huanglianshangqing tablets and huanglianshangqing pills.Methods：The contents of geniposide，baicalin and imperatorin in huanglianshangqing tablets and pills were determined and compared.Results：The contents ofgeniposide，baicalin and imperatorin in huanglianshangqing tablets were 4.15，1.056 and 0.072 mg/dose while those in water pills were 9.17，2.75 and 0.049 mg/dose，those in honeyed pills were 5.49，3.79 and 0.026 mg/dose，and the sums of the three components were 5.28，11.97 and 9.31 mg/dose，respectively.Conclusion：The contents and sums of three components were significantly different in huanglianshangqing tablets and pills，indicating that the qualities of the tablets and pills were non-equivalent. KEY WORDSHuanglianshangqing Tablets；Huanglianshangqing Pills；Geniposide；Baicalin；Imperatorin；Comparative Study

10.3969/j.issn.1672-5433.2016.05.005

曹恒濤，男，碩士，主管中藥師。研究方向：藥物分析。通訊作者E-mail：aycht@163.com

2016-02-05）