尿L-FABP與LAP對(duì)2型糖尿病腎病早期診斷的意義①

王瑾堃，劉中柱，劉艷姝，史為伍，王　振

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003)

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尿L-FABP與LAP對(duì)2型糖尿病腎病早期診斷的意義①

王瑾堃，劉中柱，劉艷姝，史為伍，王振

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003)

摘要:目的:探討測(cè)定尿肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(liver fatty acid binding proteins,L-FABP)和亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase，LAP)在糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)早期診斷的意義及對(duì)比性研究。方法:收集正常組、單純2型糖尿病組、早期2型糖尿病腎病組、臨床2型糖尿病腎病組各30例，通過(guò)ELISA檢測(cè)各組尿L-FABP、尿LAP的濃度，并觀察其與尿蛋白排泄率(urinary albumin excretion rates,UAER)相關(guān)性，比較兩個(gè)腎小管標(biāo)記物在DN早期診斷的價(jià)值。結(jié)果:隨著DN腎臟損害程度的加重，尿L-FABP和尿LAP水平逐漸增高(P<0.05)；尿L-FABP與UAER呈正相關(guān)(r=0.64，P <0.01 )；尿LAP與UAER呈正相關(guān)(r=0.31，P <0.01 )。結(jié)論:尿L-FABP與尿LAP水平可反映DN早期腎臟損傷，尿L-FABP與尿LAP相比可較好的作為早期DN診斷指標(biāo)，為指導(dǎo)臨床DN早期診斷提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞:肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白;亮氨酸氨基肽酶;尿蛋白排泄率;糖尿病腎病

糖尿病(diabetes mellitus，DM)，是臨床上一種常見(jiàn)的內(nèi)分泌代謝疾病，其中30%～40%的2型糖尿病將出現(xiàn)腎臟受累，即糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)，它是糖尿病中常見(jiàn)的慢性微血管并發(fā)癥之一，在西方國(guó)家，DN是終末期腎臟病(end stage renal disease，ESRD)的首位病因，也是我國(guó)繼慢性腎小球腎炎后的第二位病因。有關(guān)于DN的發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尚未完全明確，目前公認(rèn)的是由胰島素分泌或(和)作用缺陷，最終導(dǎo)致長(zhǎng)期高血糖是DN發(fā)生的始動(dòng)因素，同時(shí)眾多細(xì)胞因子激活、炎癥介質(zhì)釋放、遺傳因素的參與也在DN發(fā)病中發(fā)揮重要作用。在DN中對(duì)占腎臟體積90%的腎小管間質(zhì)病變研究甚少，事實(shí)上，國(guó)外有報(bào)道，在DN早期也會(huì)伴有腎小管損害[1]，DN早期病理特征之一是腎臟的肥大，在很大程度上與腎小管上皮細(xì)胞肥大有關(guān)，早期發(fā)生的這些結(jié)構(gòu)變化正是啟動(dòng)和加劇腎小管間質(zhì)纖維化進(jìn)展的一個(gè)關(guān)鍵因素，相關(guān)研究還表明腎小管間質(zhì)病變的嚴(yán)重程度將直接影響DN的預(yù)后。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，腎小管病變的標(biāo)記物有兩類，一類為低分子蛋白，另一類是腎小管上皮細(xì)胞的各種酶(統(tǒng)稱為尿酶)。此次研究中的肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(liver fatty acid binding proteins,L-FABP)和亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase，LAP)分別是上述兩類的標(biāo)記物的其中之一，故此本研究觀察DN不同時(shí)期二者的變化情況，對(duì)比探討其在DN早期的預(yù)警作用及臨床意義。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象

選取2014-12～2015-12佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院收治2型糖尿病患者30例、早期2型糖尿病腎病30例、臨床2型糖尿病腎病30例，和同期本院體檢者30例作為正常對(duì)照粗。本研究設(shè)計(jì)得到生物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2分組

正常對(duì)照組：同期本院體檢者。

單純2型糖尿病組：參照1999年WHO提出的糖尿病診斷及鑒別診斷標(biāo)準(zhǔn):(1)空腹血糖(FPG)≥7.0mmol/L。空腹的定義是至少8h未攝入熱量;或(2)OGTT試驗(yàn)中2h血糖≥11.1mmol/L。試驗(yàn)應(yīng)按照世界衛(wèi)生組織(WHO)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，用含75g無(wú)水葡萄糖溶于水中作為糖負(fù)荷;或(3)有高血糖的癥狀或高血糖危象，隨機(jī)血糖≥11. 1mmol/L。如無(wú)高血糖癥狀，標(biāo)準(zhǔn)1～2應(yīng)該再次檢測(cè)證實(shí)。

早期2型糖尿病腎病：均符合世界衛(wèi)生組組1999年對(duì)2型糖尿病腎病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，UAER30～300mg/24 h。臨床2型糖尿病腎病：均符合世界衛(wèi)生組組1999年對(duì)2型糖尿病腎病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，UAER>300 mg/24 h。因24h UAER受尿量收集準(zhǔn)確與否、被檢查對(duì)象活動(dòng)狀態(tài)、取標(biāo)本標(biāo)準(zhǔn)與否等諸多因素影響，近年以檢測(cè)清晨第一次尿或隨意一次尿液中蛋白或白蛋白與肌酐比值(Urinary albumin to creatinine ratio,ACR)代替24h UAER[2]。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)

糖尿病病程較短，一般少于5年；短期內(nèi)腎功能迅速惡化；不伴視網(wǎng)膜病變；突然出現(xiàn)水腫和大量蛋白尿而腎功能正常；顯著腎小管功能減退；依從性較差的患者。

1.4相關(guān)指標(biāo)收集及檢測(cè)

1.4.1樣品收集

受試者非高熱量飲食一天，女性(非月經(jīng)期)晨起清洗外陰后留取中段尿5mL，男性晨起留取中段尿5mL，用一次性潔凈塑料尿杯留取尿液，并同時(shí)抽取靜脈血5mL,1500r/min離心5min清液存于-80℃冰箱保存，集中使用前避免反復(fù)凍融。其他所需血液及尿液標(biāo)本當(dāng)日檢測(cè)。

1.4.2收集臨床資料

收集所有研究對(duì)象的相關(guān)臨床資料，包括基本資料(年齡、性別、體重指數(shù)等)，臨床檢查資料(空腹血糖、糖化血紅蛋白、胰島功能、尿微量白蛋白、尿肌酐等)。

1.4.3尿L-FABP和尿LAP檢測(cè)

將待檢測(cè)尿液標(biāo)本從-80℃冰箱取出，并在室溫下解凍，將尿L-FABP和尿LAP試劑盒從4℃冰箱取出，在室溫下至少?gòu)?fù)溫半小時(shí)，通過(guò)ELISA檢測(cè)二者OD值，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1各組間一般資料相關(guān)指標(biāo)比較

結(jié)果顯示：本實(shí)驗(yàn)納入健康患者30例作為正常對(duì)照組，90例2型糖尿病病例，各組間性別、年齡、體重指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

2.2各組間病程、空腹血糖、糖化血紅蛋白指標(biāo)比較

結(jié)果顯示：早期2型DN組及 臨床2型DN組病程較DM對(duì)照組長(zhǎng)(P<0.05)；早期2型DN組及臨床2型DN組之間差異不顯著(P>0.05)；糖尿病各組中空腹血糖、糖化血紅蛋白均明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05)，糖尿病各組間差異不顯著(P>0.05)。

2.3各組尿L-FABP、LAP、ACR水平情況的檢測(cè)

結(jié)果顯示：?jiǎn)渭?型DM組、早期2型DN組、臨床2型DN組患者中，尿L-FABP、LAP水平、ACR水平均明顯高于健康體檢者(P<0.05)；并且，隨著糖尿病腎病病情的加重，尿L-FABP、LAP、ACR水平逐漸升高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　各組尿L-FABP、LAP、ACR水平情況

注：*與正常對(duì)照組相比較P<0.05；△與單純DM組相比較P<0.05；#與早期DN組相比較P<0.05。

2.4相關(guān)性分析

尿L-FABP與UAER呈正相關(guān)(r=0.64，P<0.01 )；尿LAP與UAER呈正相關(guān)(r=0.31，P<0.01)。

3討論

目前，DM的高發(fā)病率已成為一個(gè)全球性的健康問(wèn)題，其中，DN是DM患者常見(jiàn)并發(fā)癥之一。目前，我們?cè)谂R床上通過(guò)腎臟組織活檢來(lái)明確DN診斷仍然不能被絕大部分患者所接受，那么我們就需要在血、尿樣本中積極尋找相關(guān)生物學(xué)標(biāo)記物，以便能夠早期的、無(wú)創(chuàng)傷性地確認(rèn)腎損傷的存在并動(dòng)態(tài)地觀察其變的進(jìn)程。熟知的mALB雖然可以作為經(jīng)典的腎小球損傷生物學(xué)標(biāo)記物來(lái)判斷用于早期DN診斷[3]，但是，其對(duì)于早期腎損傷的定位和程度，它并不具備敏感性，只是在腎小球?yàn)V過(guò)功能明顯減退之后才會(huì)出現(xiàn)蛋白尿，并且其受。近年來(lái)，許多相關(guān)研究表明，在DN早期階段腎小球、腎小管損傷是同時(shí)出現(xiàn)的，而且腎小管損傷的程度決定著腎纖維化的進(jìn)展，因此，全面深入從腎小管相關(guān)標(biāo)記物研究入手，可以更有助于對(duì)DN早期診斷。

腎小管標(biāo)記物分為兩類，一類是為低分子蛋白，尿L-FABP作為其中一種分子蛋白，在脂類代謝相關(guān)疾病中參與脂肪酸的代謝調(diào)節(jié)，可作為高甘油三酯血癥、脂肪肝和消化道腫瘤等疾病的早期檢測(cè)及輔助診斷的一個(gè)重要指標(biāo)。一些研究還表明，在急性腎損傷時(shí)，尿L-FABP表達(dá)水平也明顯增高[4]，而與DN十分相關(guān)的病理生理功能就是它可以作為一種內(nèi)源性抗氧化劑解毒物質(zhì)，在DN早期，長(zhǎng)期高血糖可引發(fā)微小血管結(jié)構(gòu)的破壞，同時(shí)慢性高血糖造成許多種蛋白質(zhì)發(fā)生糖基化反應(yīng)，導(dǎo)致糖基化產(chǎn)物大量堆積，最終加重腎小管間質(zhì)缺氧，而L-FABP很可能作為一種有效的內(nèi)源性抗氧化劑在缺氧性疾病中發(fā)揮重要作用，所以當(dāng)腎小管缺氧時(shí)可以上調(diào)腎臟L-FABP基因的表達(dá)水平, 并可增加源自近端小管的尿L-FABP的水平，故此，其有助于DN早期的發(fā)現(xiàn)，并可反映DN損害程度[5]。另一類是腎小管上皮細(xì)胞的各種酶(統(tǒng)稱為尿酶)，作為另一類監(jiān)測(cè)腎小管早期損傷的標(biāo)記物，在相關(guān)文獻(xiàn)上報(bào)道過(guò)的尿酶有很多種類，其中應(yīng)用較多的為N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和丙氨酸氨基肽酶(AAP)。目前對(duì)LAP的臨床應(yīng)用主要局限在肝膽系統(tǒng)疾病上，但測(cè)定尿中LAP用于腎臟損害的診斷，國(guó)內(nèi)僅見(jiàn)個(gè)別報(bào)道，研究表明其主要位于腎小管上皮細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，在病理情況下，由于各種原因?qū)е履I實(shí)質(zhì)尤其是腎小管受損時(shí)，可引起大量LAP通過(guò)尿液排出，常在亞臨床期就可出現(xiàn)尿酶排泄增多[6]，故此可早期反映腎損害的性質(zhì)和程度。因此，測(cè)定尿中LAP，可以初步探討尿LAP對(duì)DN早期診斷臨床意義及應(yīng)用價(jià)值。

生活方式改善、有效控制血糖是DM和DN治療及基礎(chǔ)，但是若能做到早期發(fā)現(xiàn)DN，對(duì)延緩其進(jìn)展是至關(guān)重要的，本實(shí)驗(yàn)將對(duì)DN的側(cè)重點(diǎn)放在研究腎小管方面，檢測(cè)二者方法簡(jiǎn)單，靈敏度較高，尿液收集簡(jiǎn)便、無(wú)創(chuàng)、快速等優(yōu)點(diǎn)，有望成為DN早期發(fā)現(xiàn)的理想生物標(biāo)記物。

參考文獻(xiàn):

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基金項(xiàng)目：①佳木斯大學(xué)研究生科技創(chuàng)新項(xiàng)目，編號(hào)：LM2015-044。

作者簡(jiǎn)介：王瑾堃(1988～)女，黑龍江伊春人，在讀碩士研究生。 通訊作者：劉中柱(1964～)男，黑龍江嫩江人，學(xué)士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:liuzhongzhu75@163.com。

中圖分類號(hào)：R587.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1008-0104(2016)04-0138-02

(收稿日期：2016-02-02)