TAG-72、GRP94在乳腺癌中的表達①

王　新，廉奇鑫，周　昱，韓麗麗

(佳木斯大學附屬第一醫院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154003)

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TAG-72、GRP94在乳腺癌中的表達①

王新，廉奇鑫，周昱，韓麗麗

(佳木斯大學附屬第一醫院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154003)

摘要：目的：通過檢測人體乳腺癌組織中TAG-72、GRP94的表達情況，分析TAG-72、GRP94在乳腺癌組織中的表達特點，并探討它們之間的相互關系。方法：應用免疫組化方法檢測90例正常乳腺組織、乳腺癌組織中TAG-72、GRP94的表達，同時收集患者的臨床病理資料進行相關的統計分析。結果：①GRP94在乳腺癌及正常乳腺組織中的陽性表達率分別為78.89%、21.11%，在正常的乳腺組織中表達相比較乳腺癌組織明顯下降，比較后差異具有統計學意義(P<0.05)。GRP94在乳腺癌組織中且無淋巴結轉移組中的陽性表達率為63.33%，在乳腺癌組織中且有淋巴結轉移組的陽性表達率為93.33%，GRP94的蛋白表達與乳腺癌的淋巴結轉移有明顯相關性(P<0.05)。②TAG-72在乳腺癌組織中與正常乳腺組織中陽性表達分別為30.00%、94.44%。在正常乳腺組織相較于乳腺癌組織明顯升高，比較后差異具有統計學意義(P<0.05)。結論:①GRP94在乳腺癌組織的陽性表達率明顯比正常的乳腺組織中的陽性率高，TAG-72蛋白在正常的乳腺的組織中的陽性表達率比在乳腺癌組織中顯著高，故GRP94在乳腺癌中呈高表達，TAG-72在乳腺癌中呈現低表達，與乳腺癌的發生、發展之間有密切關系。②GRP94、TAG-72之間存在負相關性，可能在促進乳腺癌的發生、發展過程中存在著相互的聯系。

關鍵詞：乳腺癌；TAG-72；GRP94；免疫組織化學

乳腺癌(breast cancer)是全世界范圍內女性一種非常常見的惡性腫瘤[1]。全球每年大概有150萬人被確診為乳腺癌，每年死于乳腺癌將近50萬人。乳腺癌的發病率以每年3%的速度逐年遞增，且患者的發病年齡越來越年輕化。乳腺癌的發病率在歐美等的發達國家中屬于最高，據報道美國國家新進發生的乳腺癌在2007年一年之內就有178480例，在所有新發惡性腫瘤患者中乳腺癌新發例數占26%，乳腺癌的死亡率已經排在女性惡性腫瘤死因的首位；亞洲地區乳癌的發病率相對于歐美地區來說是比較低的，但是根據乳腺癌的流行病學研究，近些年亞洲地區乳腺癌的發病率也在逐年增加。在我國，乳腺癌占全身惡性腫瘤的7%～10%，有部分大城市報告結果稱，乳腺癌到今日已經升為女性首位惡性腫瘤。多學科(遺傳學、分子遺傳學、流行病學、化學致癌動物模型等)研究證明，惡性腫瘤的發生及進展過程是多種因素在長時間作用下形成的]。研究表明，細胞信號傳導反常是眾多致病因素中與腫瘤的發生進展有著必不可少的關系，信號轉導通路上蛋白表達的不正常表現在促生長因子的作用下輕而易舉的被細胞合成，從而導致細胞發生增殖失控以及腫瘤的發生。近些年，隨著分子生物學的快速發展，對于惡性腫瘤的發生、發展以及治療也進一步深入。

本課題研究通過免疫組化方法測驗90例乳腺癌、90例癌旁正常組織中TAG-72、GRP94兩因子的表達情況，并探索其臨床意義和TAG-72、GRP94在乳腺中是否有關系。

1資料與方法

1.1標本來源

在佳木斯大學附屬第一醫院病理科提取2013-05～2015-07乳腺癌石蠟包塊：分別為90例乳腺癌組織及癌旁正常乳腺組織。術前均未行放、化療及生物靶向治療等治療方案，每例樣品的選取都做到有肉眼可見的淋巴結、手術切緣都未有癌浸潤的正常乳腺組織及癌灶取材。在選取的90例乳癌患者中無淋巴結轉移的患者標本有60例，有淋巴結轉移的患者標本有30例。患者均為女性，年齡30～68歲，中位年齡49歲。全部術后的病理標本均經佳木斯大學病理科有經驗的醫師證實為浸潤性的導管癌，淋巴結有無轉移也均經病理證實。所選取的所有標本均先浸泡于10%福爾馬林液中并給予固定，然后行石蠟包埋制片，后應用HE染色和免疫組化檢測。腫瘤的大小技計數以最大截面剖開腫瘤后的最長橫徑。TNM分期以2015年新的分期系統(美國癌癥聯合會 AJCC和國際抗癌聯盟 UICC制定)為標準進行。所有患者的臨床資料(患者年齡、一般情況及既往疾病史等、腫瘤的大小、淋巴結浸潤情況、疾病臨床分期及脈管浸潤情況)均完整并由本院病案室提供。

1.2主要試劑

TAG-72兔抗單克隆抗體GRP94兔抗單克隆抗體都由北京博奧森生物技術有限公司產品生產，通用Elivision法試劑盒以及DAB顯色試劑都是從北京中衫金橋生物技術有限公司買入。

1.3免疫組化

通過免疫組化方法(Elivision法)探索TAG-72、GRP94在乳腺癌及正常癌旁組織中的表達情況。

1.4結果判定

TAG-72蛋白主要位于細胞質，部分位于細胞膜，陽性者可見細胞質染色呈棕黃色顆粒，在腫瘤組織中呈彌漫或片狀分布。運用二級的計分法進行結果判定: 染色數量的計數(每高倍視野下5個以上陽性細胞比例計數)：<5%為0分； 5%～25%為1分；26%～50%為2分；>50%為3分。染色強度分類: 鏡下見淡黃色計為1分；鏡下見染色黃色或深黃色為2分；褐色或者是棕褐色為3分。最后將兩者所得計數相乘大于1 分者為陽性。GRP94蛋白主要表達于細胞質，免疫組化結果可見細胞膜與細胞質分別呈猩紅色和暗紫色。以高倍鏡( 400×)觀察5個視野，每個視野觀察100個細胞。染色強度分級為: 陰性(-):細胞不顯色或顯色<25%；弱陽性(+):25%～50% 細胞顯色；中度陽性():51%～ 75% 細胞顯色，著色較深；強陽性():>75%細胞顯色，著色深。弱陽性、中度和強陽性均記為陽性。所有免疫組化結果由兩位高年資病理醫師雙盲閱片，對于不一致的判定結果，經討論后得出一致結果。

1.5統計學方法

2結果

2.1GRP94在正常乳腺組織、乳腺癌組織中的表達

經觀察GRP94在正常乳腺組織及乳腺癌組織中的陽性染色位于細胞質內， GRP94分別在正常乳腺組織以及乳腺癌組織中陽性表達見表1。從結果中可以看到GRP94在正常乳腺組織中的陽性率為21.11%(19/90)，在癌組織中表達的陽性率為78.89%(71/90)，GRP94蛋白在乳腺癌組織中的表達相較于正常乳腺組織中的表達明顯升高，兩者的差異具有統計學意義(P<0.05)。

表1　GRP94在正常乳腺組織、乳腺癌組織的表達

2.2TAG-72在正常乳腺組織、乳腺癌組織中的表達

TAG-72在正常乳腺組織以及乳腺癌組織中的陽性染色位于細胞質內。 TAG-72蛋白在正常乳腺組織以及乳腺癌組織中的陽性表達見表2。從結果中可以看出TAG-72在正常乳腺組織中的陽性表達率是94.44%(85/90)，在癌組織中的表達的陽性率是30.00%(27/90)，TAG-72蛋白在乳腺癌中的表達情況相較于正常乳腺組織明顯降低，兩者比較差異具有統計學意義(P<0.05)。

表2　TAG-72在正常乳腺組織、乳腺癌組織的表達

2.3GRP94表達與TAG-72表達的相關性分析

GRP94蛋白表達結果與TAG-72蛋白表達結果之間的相關性分析，見表3；71例GRP94蛋白表達陽性的乳腺癌組織中有18例標本TAG-72蛋白呈陽性表達；63例TAG-72蛋白表達陰性的乳腺癌組織中有10例GRP94蛋白呈陰性表達；GRP94表達與TAG-72表達具有明顯的負相關性(r=-0.635，P=0.002，P<0.05)，比較后差異具有統計學意義。

表3　GRP94表達與TAG-72表達的相關性分析

3討論

GRP葡萄糖調節蛋白它是作用在細胞內質網的一種應激蛋白，每當細胞的內環境發生改變時候都會馬立即做出反應，比如細胞內低糖時、細胞內缺氧時、以及細胞內鈣失衡時候或內質網中出現蛋白質的錯誤折疊時等一系列可導致細胞應激反應的細胞事件。GRP94是分子質量為94kD的蛋白質，只存在于真核生物中，是內質網中數量最多的糖蛋白。GRP94作為分子伴侶，在細胞內環境發生變化時，如：內質網應激，可與未折疊的多肽鏈結合，阻止錯誤蛋白質聚集，抑制錯誤蛋白質的分泌。目前研究表明，GRP94在腫瘤的發生、發展中起著重要作用，對腫瘤的治療及預后具有重要的臨床意義。

腫瘤相關糖蛋白72(TAG-72),抗原是一種廣泛在腫瘤中表達陽性率較高的腫瘤相關抗原,可于消化道腫瘤、卵巢腫瘤及肺癌中強勢表達,其表達常提示腫瘤預后差[2～4]。已有研究TAG-72對多種惡性腫瘤有提示診斷價值,但其在乳腺癌織中的表達及其參與乳腺癌發生發展的相關研究并不多。本實驗應用免疫組化的方法得出GRP94、TAG-72在乳腺組織及乳腺癌組織中均可以表達，但表達水平不一致其中GRP94呈高表達，TAG-72呈低表達，進而推斷出乳腺癌組織中存在未折疊蛋白反應、內網應激及凋亡通路抑制。

葡萄糖調節蛋白94(GRP94)[6]員在乳腺癌組織中陽性表達患者生存率明顯低于陰性者， 由此認

為該因子可以作為判斷腫瘤生物學行為及預后的指標。因此研究二者表達情況對乳腺癌的診斷及預后有著積極的作用。本實驗采用免疫組化的方法，對于TAG-72、GRP94在乳腺癌中的表達做定性加定量分析。對本實驗的90例患者進行免疫組化實驗，預實驗檢查GRP94、TAG-72是否在乳腺癌組織中表達。其結果顯示：GRP94在乳腺癌呈高表達，TAG-72在乳腺癌中呈低表達，該結果符合前人的部分研究結論[6，7]。

本實驗中，GRP94、TAG-72在乳腺癌及癌旁組織中均有表達，但在 90例乳腺癌標本中， GRP94、TAG-72其陽性表達率分別78.89%、30%，90例癌旁組織中陽性表達率分別為21.11%、94.44%。結果顯示GRP94在乳腺癌中陽性表達率明顯高于癌旁組織，TAG-72在乳腺癌中陽性表達率明顯低于癌旁組織。提示：GRP94是乳腺癌組織中高表達因子，TAG-72是乳腺癌組織中低表達因子，二者有望成為乳腺癌的新診斷目的因子。在關于GRP94、TAG-72在乳腺癌臨床分期及臨床病理之間的研究中，根據免疫組化結果顯示：GRP94、TAG-72在不同分化程度的乳腺癌組織中的表達差異有統計學意義，本研究結果顯示，TAG-72、GRP94在乳腺癌之間呈負相關關系。TAG-72、GRP94在乳腺正常組織之間仍呈負相關。TAG-72、GRP94可能在未來成為乳腺癌新的腫瘤參考因子。

參考文獻：

[1]王新，范立君，李壯，等.GRP78、GRP94在乳腺癌中的表達及其意義[J].黑龍江醫藥科學，2014，37(6)：89-91

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[4]Schlesinger MJ.Heat shock proteins[J].J Biol Chem，1990，265:12111-12114

[5]李壯、田寅、蘇俊強，等.GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表達及意義[J].黑龍江醫藥科學，2015,38(4):89-91

[6]應小平,楊守京,王敏,等.人乳腺癌中葡萄糖調節蛋白94(Grp94/Gp96)的表達及意義[J].現代腫瘤醫學,2011,11(3): 176-177

[7]Ito T, Shiraki K, Sugimoto K. Survivin promotes cell proliferation in human hepatocellular carcinoma [J].Hepatology,2013,31(5):1080-1085

基金項目：①1.黑龍江省青年基金，批準號：QC2013C013；2.佳木斯大學青年基金，編號：sq2013-013。

作者簡介：王新(1962～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫師，碩士研究生導師。 通訊作者：周昱(1969～)男，黑龍江集賢人，學士，副主任醫師，碩士研究生導師。E-mail:zhouyu731@126.com。

中圖分類號：R737.9

文獻標識碼：A

文章編號：1008-0104(2016)03-0017-02

(收稿日期：2015-11-07)