納豆紅曲銀杏的毒理安全性評價

朱春陽+周婷婷+林立鶴+隋自潔

【摘要】 目的 探討納豆紅曲銀杏（NHY）的安全性。方法 選取無特定病原體（SPF）級健康昆明種小白鼠、Wistar大鼠， 按《食品安全性毒理學評價程序和方法》進行試驗。結果 小鼠急性毒性試驗LD50>10.0 g/kg BW， 屬實際無毒級；遺傳毒性試驗均未呈現致突變作用。大鼠30 d喂養試驗表明動物各項生理指標均未發生異常。結論 NHY安全無毒、無致突變性。

【關鍵詞】 納豆紅曲銀杏；無毒；致突變；安全性

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.18.197

納豆[1]作為黃豆為原料的發酵品， 是一種營養價值很高的食品， 可調節血脂， 降低膽固醇、血脂， 預防高血壓和動脈硬化；可調節腸道菌群平衡， 預防痢疾、腸炎和便秘；還有防癌抗癌、緩型減肥、排毒養顏、延緩衰老等功效。銀杏葉提取物是從銀杏科屬植物葉中提取的一種營養物質， 它具有促進機體循環、抗氧化、延緩衰老、提高記憶力、防治高血壓、調節血糖等方面的功效與作用。納豆紅曲銀杏是以納豆凍干粉、功能性紅曲粉、銀杏葉提取物為主要原料的保健食品[2]。依照《食品安全性毒理學評價程序和方法》對其安全性進行毒理試驗， 以保證其對人體食用安全。

1 材料與方法

1. 1 受試物 納豆紅曲銀杏。

1. 2 實驗動物 SPF級健康昆明種小白鼠、Wistar大鼠， 吉林大學白求恩醫學院動物實驗中心提供， 使用許可證號SCXK-（吉）-2011-0004。本清潔級實驗動物環境設施合格證號， 吉動設字10-1005。

1. 3 試驗方法

1. 3. 1 小鼠急性毒性試驗 采用急性經口毒性實驗， 一次最大量法進行。選取18～22 g的小鼠20只， 雌雄各10只。受試物用蒸餾水配制， 灌胃最大濃度25%， 灌胃2次， 每次0.2 ml/10 gBW， 劑量為10 g/kgBW， 給予受試物后， 觀察14 d。

1. 3. 2 遺傳毒性試驗 ①小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗： 選用25～30 g的小鼠50只， 雌雄各半， 隨機分組， 每組10只。以40 mg/kgBW的環磷酰胺為陽性對照， 蒸餾水為陰性對照， 試驗設5.00、2.50、1.25 g/kgBW三個劑量組。間隔24 h 2次經口灌胃， 末次灌胃后6 h頸椎脫臼處死動物， 取股骨骨髓常規制片。每只動物計數1000個骨髓嗜多染紅細胞的微核發生率。②小鼠精子畸形試驗：選用25～30 g 雄性小鼠25只， 隨機分組。以40 mg/kgBW的環磷酰胺為陽性對照， 蒸餾水為陰性對照， 試驗設5.00、2.50、1.25 g/kgBW三個劑量組。連續灌胃5 d， 首次灌胃后35 d處死動物， 常規制片。每只動物計數1000個結構完整精子的畸變精子發生率。③Ames試驗：試驗菌株TA97、TA98、TA100、TA102， 經鑒定符合要求， 均為鼠傷寒沙門氏菌組胺酸缺陷型。體外代謝活化系統用多氯聯苯誘導的大鼠肝勻漿。試驗設5000、1000、200、40、8 μg/皿5個劑量， 同時設陰性對照（蒸餾水）和陽性對照， 平板摻入法， 每個劑量3個平行， 整套試驗重復2次。

1. 3. 3 大鼠30 d喂養試驗 設三個受試物組分別為2.93、2.20、1.47 g/kgBW及對照組， 每組20只， 雌雄各半。三個試驗組受試物用逐步擴大量法分別均勻摻入基礎飼料中， 含量分別為2.93%、2.20%、1.47%， 基礎飼料為陰性對照組。單籠喂養， 記錄大鼠每周的體重、進食量， 連續喂養30 d。實驗第31天， 麻醉后下腔靜脈取血， 進行血液學、生化學指標測定， 處死大鼠， 大體解剖， 觀察每只大鼠臟器有無異常， 取肝、腎、脾臟和睪丸（卵巢）稱重， 計算臟體系數， 高劑量組大鼠的肝、腎、脾臟、胃、睪丸、卵巢進行病理組織學檢查。

1. 4 統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件進行數據統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 小鼠急性毒性試驗 該受試物小鼠急性毒性試驗雌、雄小鼠LD50>10.0 g/kgBW， 按急性毒性分級標準為實際無毒級。

2. 2 遺傳毒性試驗 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗及小鼠精子畸形試驗和Ames試驗結果均為陰性， 未見致突變作用。

2. 3 大鼠30 d喂養試驗

2. 3. 1 實驗動物一般狀況 在30 d喂養期間， 各劑量組大鼠生長良好， 活動正常， 無死亡。各劑量組動物體重、進食量、動物食物利用率等一般情況未見異常。

2. 3. 2 對大鼠血常規的影響 按高、中、低、對照組順序， 血紅蛋白（HGB）雄性分別為（138.00±4.35）、（139.20±4.83）、（136.70±3.27）、（139.10±3.31）g/L， 雌性分別為（135.80±2.90）、（135.30±2.63）、（135.90±3.00）、（136.40±2.27）g/L；紅細胞（RBC）雄性分別為[（7.06±0.48）、（7.08±0.36）、（7.11±0.26）、（7.29±0.29）] ×1012/L， 雌性分別為[（6.77±0.34）、（6.79±0.32）、（6.80±0.16）、（6.99±0.30）] ×1012/L；白細胞（WBC）雄性分別為[（4.69±0.32）、（5.01±0.66）、（4.66±0.46）、（4.68±0.53）] ×109/L， 雌性分別為[（4.58±0.28）、（4.53±0.26）、（4.83±0.32）、（4.56±0.26）] ×109/L。各劑量組HGB、RBC及WBC與對照組比較差異無統計學意義（P>0.05）。

2. 3. 3 對大鼠血生化的影響 各劑量組的谷丙轉氨酶（ALT）、尿素（BUN）、谷草轉氨酶（AST）、肌酐（Cr）、血糖（GLU）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、膽固醇（CHO）、甘油三脂（TG）與對照組比較差異無統計學意義（P>0.05）。且無劑量反應關系。見表1。

2. 3. 4 病理學檢查 各劑量組與對照組比較， 肝、腎、脾臟和睪丸（卵巢）各臟器絕對重量及臟器系數， 差異無統計學意義（P>0.05）。組織病理學觀察肝、腎、脾臟、胃、睪丸、卵巢均未見明顯病理改變。

3 討論

納豆、銀杏葉都有較高的食用安全性[1， 3]， 功能性紅曲無毒副作用， 但傳統工藝生產的紅曲可能有真菌毒素桔霉素的存在， 真菌毒素桔霉素是紅曲菌的一種次級代謝產物， 具有腎毒性， 還可致畸、致癌和誘發基因突變， 因而使功能性紅曲的使用安全性受到挑戰[4]。以納豆凍干粉、功能性紅曲粉、銀杏葉提取物（所占比例分別為20%、12%、7%）為主要成份的NHY是否安全呢， 小鼠急性毒性試驗說明該受試物為實際無毒級。小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗是對體細胞染色體結構完整性改變的評估， 小鼠精子畸形試驗是評價受試物對體內生殖細胞的遺傳毒性作用， Ames試驗是檢測受試物是否具有誘發基因突變的能力， 遺傳毒性試驗結果表明NHY對體細胞和生殖細胞均無染色體畸變作用， 亦無基因突變作用。大鼠30 d喂養試驗結果說明NHY不影響動物的生長發育， 對造血功能、肝腎功能亦無損害作用， NHY對大鼠臟器的病理組織學無明顯影響， 在2.93 g/kgBW劑量范圍內未觀察到有害作用。在本研究劑量范圍內NHY無毒、無致突變性， 認為NHY食用較安全。

參考文獻

[1] 胡景柱， 夏壽華， 吳林.納豆凍干粉的安全性研究.安徽農業科學， 2000， 28（3）：380-381.

[2] 盧連華， 吳世富， 張云端， 等.一種銀杏葉提取物膠囊的毒理學安全性評價.預防醫學論壇， 2013（7）：517-520.

[3] 張衛明， 顧龔平， 史勁松.銀杏葉食用安全性的毒理學評價.南京師大學報（自然科學版）， 2005， 28（1）：80-83.

[4] 黃艷， 李從發， 姚廣龍.紅曲及其安全性研究進展.食品研究與開發， 2006， 27（8）：217-219.

[收稿日期：2016-03-23]