鵝不食草油的薄層色譜鑒別及氣相色譜含量測定

2016-08-08 03:43:31林伊莉曾華平廖淑彬福建中醫藥大學藥學院福建福州350122

福建中醫藥 2016年1期

郭，陳　丹，林伊莉，曾華平，廖淑彬（福建中醫藥大學藥學院，福建福州 350122）

·方與藥·

目的建立鵝不食草油的質量控制方法。方法用薄層色譜法鑒別鵝不食草油，氣相色譜內標法測定鵝不食草油中的乙酸菊烯酯及麝香草酚含量。程序升溫：70℃，5℃/m in升至 160℃，再以3℃/m in升至180℃，再以8℃/m in升至240℃，保持10 m in。結果鵝不食草油供試品色譜在與乙酸菊烯酯、麝香草酚對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；乙酸菊烯酯、麝香草酚在0.1305～1.044 mg/m L和0.0630～0.5040mg/m L范圍內線性關系良好，標準曲線分別為Y＝7.776X－3.1×10-2r＝0.9997，Y＝9.595X－2.1×10-2r＝0.9994；平均回收率分別為101.4%、100.9%。結論建立的鵝不食草油薄層色譜鑒別法及氣相色譜含量測定法，準確度、重復性好，可為鵝不食草油的后續開發利用提供質量控制依據。

鵝不食草油；薄層色譜；氣相色譜；乙酸菊烯酯；麝香草酚

鵝不食草是菊科石胡荽屬植物鵝不食草［Centipeda minima（L.）A.Br.et Aschers.］的帶花全草，具有通鼻竅、止咳喘的功效，主要用于風寒頭痛、咳嗽痰多、鼻塞不通等。鵝不食草油是從鵝不食草中提取的揮發油，是鵝不食草治療過敏性鼻炎、變異性哮喘的有效部位。鵝不食草油中含有乙酸菊烯酯、麝香草酚、棕櫚酸、馬鞭草烯醇、石竹烯等成分［1-6］，其中乙酸菊烯酯和麝香草酚為鵝不食草油的主要成分，經硅膠柱色譜分離所得含上述2種成分的分離物具有顯著的抗炎鎮痛活性［7］。為了對鵝不食草油進行質量控制，我們以乙酸菊烯酯和麝香草酚為指標，采用薄層色譜法鑒別鵝不食草油，用氣相色譜內標法測定鵝不食草油中乙酸菊烯酯和麝香草酚的含量，為鵝不食草油的后續開發利用提供質量控制依據。

1　儀器與試藥

1.1儀器Agilent 6890N氣相色譜儀、氫火焰離子化檢測器（FID）、Agilent 6890N色譜工作站（美國安捷倫科技公司）；XS 205十萬分之一電子天平、

AR 2140萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；Yoko-PN電動噴霧器（武漢藥科新技術開發有限公司）。

1.2試藥乙酸菊烯酯對照品（自制，98.33%）；麝香草酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100508-200902）；油酸甲酯（中國食品藥品檢定研究院，批號：190034-201001）；鵝不食草油（自制，批號：20150510、20150515、20150522）；硅膠 G板（青島海洋化工廠分廠，批號：20120604）；石油醚（60℃～90℃）、二氯甲烷、乙酸乙酯、無水乙醇均為分析純。

2　方法與結果

2.1薄層色譜鑒別

2.1.1乙酸菊烯酯對照品溶液的制備精密稱取乙酸菊烯酯對照品9.26 mg，置5 m L瓶中，用石油醚溶解并稀釋至刻度，制得每1 mL含乙酸菊烯酯1.852 mg的溶液。

2.1.2麝香草酚對照品溶液的制備精密稱取麝香草酚對照品5.12 mg，置5 mL瓶中，用石油醚溶解并稀釋至刻度，制得每1mL含麝香草酚1.024 mg的溶液。

2.1.3混合對照品溶液的制備精密稱取乙酸菊烯酯對照品10.15 mg、麝香草酚對照品3.11 mg，置5mL瓶中，用石油醚溶解并稀釋至刻度，制得每1mL含乙酸菊烯酯2.03 mg、麝香草酚0.622mg的溶液。

2.1.4供試品溶液的制備精密稱取鵝不食草油25 mg，置5 mL瓶中，用石油醚溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.5薄層色譜分析取乙酸菊烯酯對照品溶液、麝香草酚對照品溶液、供試品溶液各5μL，混合對照溶液10μL，點于同一硅膠G薄層板上。以石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯（20∶10∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5%香草醛-硫酸試液，于105°C加熱5 min，置日光燈下檢視。實驗結果表明，供試品色譜與對照品色譜在相應的位置上，顯相同顏色的斑點，方法重復性良好。結果見圖1。

2.2氣相色譜法含量測定

2.2.1色譜條件色譜柱：Agilent DB-WAX毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）；載氣：N21 mL/ min，空氣流量：300 mL/min，氫氣流量：30 mL/min，尾吹氣流量：45 mL/min；檢測器：FID，檢測器溫度：240℃；進樣口溫度：180℃；進樣量：1μL，分流進樣，分流比為10∶1；柱溫：70℃。程序升溫：70℃，以5℃/min至160℃，3℃/min升至180℃，8℃/min升至240℃，保持10 min。

2.2.2乙酸菊烯酯對照品溶液的制備精密稱取乙酸菊烯酯對照品13.05 mg，置5 mL瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得每1 mL含2.61 mg乙酸菊烯酯對照品溶液。

2.2.3麝香草酚對照品溶液的制備精密稱取麝香草酚對照品6.30 mg，置5 mL瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得每1 mL中含1.26 mg麝香草酚對照品溶液。

2.2.4內標溶液的制備精密稱取油酸乙酯對照品11.24 mg，置10 mL瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得每1 mL中含1.124 mg油酸甲酯的內標溶液。

2.2.5混合對照品溶液的制備取乙酸菊烯酯、麝香草酚對照品溶液各0.5 mL，置5 mL瓶中，加入內標溶液0.5 m L，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻即得。

2.2.6供試品溶液的制備與測定精密稱定鵝不食草油10 mg，置 1 mL瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，精密吸取250μL，置 1 mL瓶中，加入內標溶液100μL，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，即得。

取待測溶液1μL，分別注入氣相色譜儀，測定，計算。

2.2.7專屬性試驗取空白溶劑、混合對照品溶液、含內標供試品溶液各1μL，分別注入氣相色譜儀，測定，乙酸菊烯酯、麝香草酚等各色譜峰分離完全，分析時間為42.2min。氣相色譜圖見圖2～圖4。

2.2.8標準曲線的制備與線性關系考察精密吸取乙酸菊烯酯、麝香草酚對照品溶液各50、60、80、100、200、300、400μL，置1 mL瓶中，分別加入100 μL內標溶液，用無水乙醇稀釋至刻度，得到系列混合對照品溶液。分別吸取系列對照品溶液各1μL，注入氣相色譜儀，測定。以對照品與內標物的峰面積比為縱坐標，對照品的濃度為橫坐標，繪制標準曲線，結果見表1，圖5。

表1　線性關系測定結果

2.2.9精密度試驗取同一混合對照品溶液，連續注入氣相色譜儀6次，以對照品與內標物的峰面積比計算相對標準偏差RSD，結果見表2。

2.2.10穩定性試驗精密稱取鵝不食草油10 mg，制成含內標供試品溶液，4°C放置，在0、2、4、6、 8、12、24 h注入氣相色譜儀，測定，分別計算乙酸菊烯酯與麝香草酚的含量及其RSD。結果表明，供試品溶液放置于4℃時在24 h內穩定，結果見表3。

表2　精密度試驗結果

表3　穩定性試驗結果

2.2.11重復性試驗分別精密稱取同一批鵝不食草油約10 mg，6份，按2.2.1、2.2.6項操作，測定，分別計算乙酸菊烯酯、麝香草酚的含量及RSD。實驗結果表明，方法重復性良好，結果見表4。

2.2.12加樣回收率試驗精密稱取已測含量的同一批鵝不食草油（乙酸菊烯酯含量為8.433%，麝香草酚含量為3.163%）5 mg，6份，分別精密加入乙酸菊烯酯及麝香草酚對照品溶液，按2.2.1、2.2.6項操作，測定乙酸菊烯酯及麝香草酚含量，計算回收率，結果見表5。

2.2.13樣品測定稱取鵝不食草油10mg，按2.2.1、2.2.6項操作，測定乙酸菊烯酯、麝香草酚的含量，結果見表6。

3　討論

3.1鵝不食草油薄層色譜鑒別試驗，采用硅膠G為固定相，曾比較了石油醚-乙酸乙酯、石油醚-二氯甲烷展開劑系統，但分離效果較差。也曾采用10%硫酸乙醇溶液作為顯色劑，顯色加熱后斑點均呈黑色，較難辨別。經試驗比較，最終選擇硅膠G薄層板，石油醚-二氯甲烷-乙酸乙酯（20∶10∶1）為展開劑，0.5%香草醛-硫酸試液為顯色劑的TLC鑒別方法，鑒別3批樣品，在供試品色譜中，與對照品色譜相應的位置上，顯示相同顏色的斑點，方法重復性良好。

3.2鵝不食草油成分復雜，GC法內標物選擇試驗時曾篩選了水楊酸甲酯、正十五烷、油酸甲酯等，其中水楊酸甲酯、正十五烷與鵝不食草油其它成分未能達到基線分離。油酸甲酯與鵝不食草油中的各成分達到良好分離，分離度大于1.5，且峰形尖銳，故選擇油酸甲酯作為GC法同時測定鵝不食草油中乙酸菊烯酯、麝香草酚含量的內標物。