百花含片的急性毒性試驗

林伊莉，陳　丹，曾華平，郭，廖淑彬（福建中醫藥大學藥學院，福建 福州 350122）

百花含片的急性毒性試驗

百花含片；最大給藥量；急性毒性試驗；小鼠

百花含片系由中藥藥對百合Lilimu brownie F. E.Brown var.viridulum Baker及款冬花Tussilago farfara L.制成的中藥復方制劑，具有潤肺止咳功效。為評價百花含片的安全性，本實驗依據中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則［1］，采用最大給藥量試驗法，即通過最大給藥濃度及最大小鼠灌胃體積給藥，觀察小鼠的急性毒性反應［2］，評價百花含片的口服用藥安全性。

1　儀器與材料

1.1儀器ARA520百分之一電子天平 （梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；AR2140萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）。

1.2試藥百花含片（自制，0.6 g/片），蒸餾水。

1.3動物健康4～5周齡昆明小鼠40只，清潔級，雌雄各半，體質量24～29 g，購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司，合格證號：SCXK（瀘）2007-0005。實驗前在福建中醫藥大學實驗動物中心適應性飼養3 d。

2　方法與結果

2.1藥液的配制取百花含片42.25 g，充分研磨成粉，用蒸餾水50 mL配制成濃稠混懸液，并以灌胃針測試至吸取較難，但不至無法吸取的濃稠度為百花含片的最大濃度藥液（0.845 g/mL）。

2.2預實驗取昆明小鼠20只，雌雄各半，給藥前禁食不禁水16 h，灌胃給藥玳玳果黃酮降脂滴丸藥液1次（0.4 mL/10 g，最大灌胃體積），連續觀察7 d，找出100%死亡率（Dm值）。結果小鼠狀況良好，無動物死亡，無數據計算玳玳果黃酮降脂滴丸LD50，故實驗選擇采用測定百花含片的最大耐受量（MTD）法試驗。

2.3最大耐受量試驗取40只，雌雄各半，隨機分為給藥組和空白組，每組20只，雌雄各10只，給藥前禁食不禁水12 h。空白組灌胃蒸餾水0.4 mL/ 10 g，給藥組0.4 mL/10 g，按最大體積灌胃百花含片最大濃度藥液。連續觀察14 d，觀察記錄動物外觀、行為、分泌物、排泄物、中毒癥狀及死亡情況，同時稱量給藥前、給藥后第1、2、3、4、6、7、9、11、14 d體質量，觀察小鼠體質量變化，第14天處死2組小鼠，對其主要臟器進行肉眼觀察比較，稱取各臟器濕重，計算臟器指數。小鼠反應癥狀指標見表1。

2.4觀察給藥后癥狀給藥后當天密切觀察6 h 內2組小鼠灌胃后的癥狀。結果表明，給藥后15～30 min，小鼠行動緩慢，對外界刺激反應遲鈍，但過后均逐漸恢復正常活動，飲食飲水正常，觀察期內無動物死亡。

2.5體質量變化小鼠給藥后連續觀察14 d，稱取2組動物體質量。結果表明，給藥組和空白組體質量變化無顯著性差異，結果見表2。

表2　2組體質量比較（±s）g

表2　2組體質量比較（±s）g

給藥后/d組別　性別2 1 3 4 6 7 9空白組給藥組雌性雄性雌性雄性給藥前25.67±0.94 29.67±1.07 26.64±1.28 25.48±1.16 27.33±1.83 30.65±1.10 27.94±1.04 26.26±1.20 25.94±1.38 30.03±1.19 25.87±1.30 25.89±0.74 25.92±1.54 29.64±1.51 26.76±1.59 25.95±0.72 28.25±1.30 32.47±1.19 29.02±2.28 27.72±0.85 25.64±1.54 30.17±0.43 26.74±1.90 25.98±1.10 29.13±1.08 34.65±0.96 30.73±2.20 29.73±1.35 29.91±1.32 35.52±0.99 31.65±2.11 30.89±1.76 11 30.86±1.98 36.73±1.20 31.09±1.20 31.95±2.05 14 31.23±2.49 35.28±1.19 31.11±1.26 31.16±1.84

2.6小鼠臟器指數小鼠給藥后第14天，脫頸處死，解剖，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、胃、胸腺，稱取各臟器濕重，計算臟器指數。

臟器指數＝臟器濕重（mg）/體質量（g）

結果表明，2組各臟器的顏色、質地無差異，臟器指數無顯著性差異，結果見表3。

表3　小鼠臟器指數（±s）

表3　小鼠臟器指數（±s）

組別空白組心肝脾肺腎胃給藥組性別雌性雄性雌性雄性4.52±0.72 5.57±0.64 4.66±0.33 5.27±0.85 40.38±4.84 41.74±1.45 40.55±4.47 43.20±3.48 3.30±0.46 2.22±0.15 3.43±0.55 2.72±1.02 6.60±1.12 7.15±1.12 7.19±0.99 5.93±0.30 9.90±1.16 13.90±1.17 10.37±1.10 13.92±1.52 10.40±1.06 8.07±1.13 9.73±0.98 7.68±0.35胸腺3.85±0.17 2.38±0.51 4.45±0.72 2.84±0.44

3　討論

3.1百花含片基于百花丸為模型復方，保留古方含服的給藥方式，以中藥百合和款冬花的提取物為制劑原料，改進劑型為中藥口含片，具有潤肺止咳的功效，用于津少咽干，虛煩潮熱，咳喘痰少，痰中帶血。百花含片初步安全性預實驗，以最大給藥濃度、最大給藥體積小鼠1次口服灌胃，無Dm值。

3.2小鼠給藥后第1～3天，給藥組小鼠體質量略為減輕或增加緩慢，其主要原因為滿負荷灌胃操作所致，隨著時間推移，體質量恢復正常。

3.3根據《中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則》進行MTD法的測定，采用小鼠最大耐受藥量倍數計算，以耐受人臨床用量的100倍以上為安全，根據百花含片人臨床用量9 g/d計算，結果表明最大耐受量相當于臨床用量的187倍。小鼠急性毒性實驗結果表明，百花含片毒性低，口服用藥安全。

［1］國家食品藥品監督管理局.藥物研究技術指導原則［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2006：209-216.

［2］連赟芳，陳丹，鄭利，等.玳玳黃酮滴丸的急性毒性試驗［J］.福建中醫藥大學學報，2014，24（1）：24-26.

R285.5

B

1000-338X（2016）01-0024-02

2015-11-18

福建省科技計劃項目（2010Y2004）

林伊莉（1990—），女，2013級藥物分析學專業碩士研究生，主要從事中藥制劑與質量分析研究。

陳丹（1961—），女，教授。E-mail：gscd2@163.com