小黑楊CYCD3;3基因啟動子序列分析及其在擬南芥中的表達1)

劉彩霞　鄭唐春　張鑫鑫　葛曉蘭　曲冠證

(林木遺傳育種國家重點實驗室(東北林業大學)，哈爾濱，150040)

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小黑楊CYCD3;3基因啟動子序列分析及其在擬南芥中的表達1)

劉彩霞鄭唐春張鑫鑫葛曉蘭曲冠證

(林木遺傳育種國家重點實驗室(東北林業大學)，哈爾濱，150040)

摘要通過相關網站及生物信息軟件對Poptr:CYCD3;3基因啟動子序列進行詳細分析，從小黑楊(Populus)葉片總DNA中克隆到2 000 bp的目的片段，構建植物表達載體(pCAMBIA1301-Promoter:CYCD3;3)，并利用浸花法轉化野生型擬南芥(Arabidopsis thaliana)；通過抗性篩選和分子檢測結果顯示，pCAMBIA1301-Promoter:CYCD3;3基因已經整合到擬南芥基因組中。同時對獲得的轉基因幼苗進行GUS染色并觀察，其基因表達模式主要集中在植物分生組織中，由此表明Poptr:CYCD3;3調控CYCD3;3基因在細胞分裂中發揮作用。

關鍵詞Poptr:CYCD3;3基因啟動子；擬南芥；遺傳轉化；GUS檢測

細胞周期有序的進行離不開細胞周期蛋白(Cyclin)。周期蛋白是指在細胞周期的不同階段周期性出現或消失，其濃度變化在細胞周期中是浮動的，呈周期性。其作為一種調節亞基，經活化后，通過對下游調控因子的可逆磷酸化和去磷酸化作用來調控細胞分裂周期的有序進行[1-2]。Renaudinetal[3]將目前已經分離鑒定出的植物周期蛋白分成3大類即A、B、D。這3類周期蛋白在細胞周期不同階段發揮作用，其中CYCD在G1到S期過渡中起重要作用[4]，控制著細胞周期的進程。目前，許多科學家都致力于D型周期蛋白的研究：Cokcrofletal[5]用D類周期蛋白轉化煙草，發現D類周期蛋白過表達會使煙草生長加快；Witteetal[6]將CYCD轉入擬南芥中，發現其過量表達導致擬南芥細胞分化受抑制，導致擬南芥生長發育受到嚴重影響;Riouzetal[7]將CYCD3與35S啟動子相連轉化擬南芥中，發現無外援分裂素條件下，轉基因株系仍能夠維持細胞正常分裂。……