參竹精片協同戊巴比妥鈉對小鼠睡眠及5-HT的影響*

趙宏杰，樊官偉，羅毅楊，高笑雨，齊　記，柳占彪，郭利平

（天津中醫藥大學中醫藥研究院，天津　300193）

參竹精片協同戊巴比妥鈉對小鼠睡眠及5-HT的影響*

趙宏杰，樊官偉，羅毅楊，高笑雨，齊記，柳占彪，郭利平

（天津中醫藥大學中醫藥研究院，天津300193）

［目的］觀察參竹精片對睡眠的影響。［方法］選昆明小鼠隨機分為正常對照組、參竹精片0.5、0.25、0.125 g/kg組，分別單次灌胃給藥和連續7 d給藥，末次給藥后2 h，各組小鼠分別以30 mg/kg（閾下劑量）和50 mg/kg（閾劑量）腹腔注射戊巴比妥鈉，觀察小鼠入睡時間、入睡率及睡眠時間，測定腦干組織5-羥色胺（5-HT）、5-羥基吲哚乙酸（5-HIAA）含量。［結果］與正常組比較，單次灌胃給藥和連續7 d給藥，參竹精片可明顯增加戊巴比妥鈉（閾下劑量）致小鼠的入睡率（0.5 g/kg，P＜0.05），減少戊巴比妥鈉（閾劑量）致小鼠的入睡時間（P＜0.01），延長睡眠時間（P＜0.01），增加腦干組織5-HT含量（P＜0.05）。［結論］參竹精片可促進腦組織分泌5-HT，減少入睡時間、提高入睡率、延長睡眠時間，具有一定改善睡眠的作用。

失眠；參竹精片；5-HT

失眠是嚴重危害身心健康的常見疾病，老年人因體衰，氣血不足，多為虛證失眠。參竹精片由手掌參、黃精、玉竹、何首烏（制）、廣棗組成，具有補腎強身，治療筋骨酸痛、年邁體弱的作用，臨床上對老年失眠患者具有較好療效。本研究擬觀察參竹精片對睡眠的影響。

1　實驗材料

1.1動物昆明小鼠，體質量（30±2）g，雌性，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號為SCXK（京）2012-0001，出廠合格證號為11400700104548。

1.2藥物參竹精片，將手掌參、黃精、玉竹、何首烏（制）、廣棗混合，經水提、過濾、干燥制成片劑。元和藥業股份有限公司提供（批號：20140901）。

1.3試劑戊巴比妥鈉 （國藥集團化學試劑有限公司，批號：WS20051129），5-羥基吲哚乙酸（5-HIAA，Alfa Aesar公司，批號：140737），5-羥色胺（5-HT，Sigma Aldrich公司，批號：111656），OSA（Adamas Reagent Co.，Ltd.批號：P03898），乙二胺四乙酸二鈉（天津市大茂化學試劑廠，批號：20130406），磷酸二氫鉀（天津市風船化學試劑科技有限公司，批號：20131120），甲醇（天津康科德有限公司，批號：20130318），乙腈（天津康科德有限公司批號：20140523）。

1.4儀器JA1003型電子天平（上海天平儀器廠），35900E型高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司），ALU98G17型高速離心機（BECKMAN INSTRUMENTS.INC），VCX130型 超 聲 破 碎 儀（SONICS&MATERIALS.INC），多參數測試儀（梅特勒托利多儀器上海有限公司），GM-0.33型隔膜真空泵（天津市津騰實驗設備有限公司），KQ-250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

2　實驗方法

2.1參竹精片單次給藥對戊巴比妥鈉致小鼠睡眠的影響選昆明小鼠96只，雌性，將小鼠稱質量、編號，并按體質量順序從低到高排列，將正常組，參竹精片0.5、0.25、0.125 g/kg組做成4個標簽，每個編號小鼠依次抽簽分組，每組24只，給藥組按照設定劑量，單次灌胃給藥后2 h，每組選12只小鼠以30 mg/kg（閾下劑量）腹腔注射戊巴比妥鈉，以小鼠翻正反射消失1 min以上為入睡指標，觀察小鼠入睡數量，計算入睡率。另12只小鼠以50 mg/kg（閾劑量）腹腔注射戊巴比妥鈉，觀察小鼠入睡時間和睡眠時間。各組小鼠清醒后，脫頸處死，剖解，取腦干組織，勻漿，離心，取上清液，備用。

2.2參竹精片7 d給藥對戊巴比妥鈉致小鼠睡眠的影響選昆明小鼠96只，雌性，將小鼠稱質量、編號，并按體質量順序從低到高排列，將正常組，參竹精片0.5、0.25、0.125 g/kg組做成4個標簽，每個編號小鼠依次抽簽分組，每組24只，給藥組按照設定劑量，灌胃，連續7 d，末次給藥后2 h，每組選12只小鼠以30 mg/kg（閾下劑量）腹腔注射戊巴比妥鈉，以小鼠翻正反射消失1 min以上為入睡指標，觀察小鼠入睡數量，計算入睡率。另12只小鼠以50 mg/kg（閾劑量）腹腔注射戊巴比妥鈉，觀察小鼠睡眠潛伏時間和睡眠時間。各組小鼠清醒后，脫頸處死，剖解，取腦干組織，勻漿，離心，取上清液，備用。

2.3腦干組織樣本5-HT和5-HIAA含量測定采用高效液相電化學法檢測。先繪制5-HT和5-HIAA標準曲線，然后取腦干組織，解凍，溶解，加入0.1 mmol/L高氯酸溶液稀釋，分別抽取10 μL注入HPLC系統，觀察記錄各樣本5-HT、5-HIAA的峰面積，根據標準曲線計算各樣本5-HT和5-HIAA的含量。

2.4統計學方法實驗數據用SPSS18.0軟件統計，入睡時間、睡眠時間及5-HT和5-HIAA用均數±標準差（±ss）表示，正態分布計量資料組間比較采用單因素方差分析，偏態分布計量資料組間比較采用秩和檢驗，計數資料用率表示，計數資料組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

3　結果

3.1對戊巴比妥鈉閾下劑量致小鼠睡眠的影響見表1。

表1　對戊巴比妥鈉閾下劑量致小鼠睡眠的影響Tab.1　The effects of sodium pentobarbitalat at the dose of 30 mg/kg-induced hypnosis

由表1、表2可知，用參竹精片連續7天灌胃給藥，可明顯增加戊巴比妥鈉閾下劑量時睡眠小鼠的數量（0.5 g/kg，P＜0.05），用參竹精片單次灌胃給藥和連續7天灌胃給藥可增加腦干組織5-HT含量（0.5g/kg，P＜0.05），結果提示參竹精片通過促進5-HT含量增加，可提高戊巴比妥鈉所致小鼠的入睡時間和睡眠時間，具有一定協同和促進睡眠的作用。

3.2對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠睡眠的影響由表3、表4可知，用參竹精片單次灌胃給藥，可明顯增加戊巴比妥鈉閾劑量時小鼠的入睡時間（0.25g/kg，0.125 g/kg，P＜0.05）和睡眠時間（0.5、0.25、0.125 g/kg，P＜0.05），增加腦干組織5-HT含量（0.5 g/kg，P＜0.05），用參竹精片連續7 d灌胃給藥，入睡時間雖無明顯改變（P＞0.05），但睡眠時間明顯延長（0.5 g/kg，P＜0.01，0.25 g/kg，P＜0.05），腦干組織5-HT含量增加，（0.25 g/kg，P＜0.05），結果提示參竹精片通過促進5-HT含量增加，促進戊巴比妥鈉所致小鼠的入睡時間和睡眠時間，具有一定改善睡眠的作用。

表2　對戊巴比妥鈉閾下劑量致小鼠腦干組織神經遞質的影響（±ss）Tab.2　The effects of sodium pentobarbital at the dose of 30 mg/kg-induced neurotransmitter in the brain stem of mice（±ss）ng/g

表2　對戊巴比妥鈉閾下劑量致小鼠腦干組織神經遞質的影響（±ss）Tab.2　The effects of sodium pentobarbital at the dose of 30 mg/kg-induced neurotransmitter in the brain stem of mice（±ss）ng/g

注：ANOVA檢驗，與正常組比較*P＜0.05。

組別　單次給藥5-HIAA　5-HT正常組　624.36±34.34　303.01±106.19參竹精片0.5 g/kg　635.63±283.85　451.17±185.85*參竹精片0.25 g/kg　1 152.74±999.36　270.77±78.53參竹精片0.125 g/kg　1 067.19±747.94　385.82±155.7組別　7 d給藥5-HIAA　5-HT正常組　1 661.32±383.32　331.69±114.91參竹精片0.5 g/kg　1 421.64±308.47　473.55±180.83*參竹精片0.25 g/kg　1 387.50±229.19　451.78±55.41參竹精片0.125 g/kg　1 749.64±569.21　379.57±83.15

表3　對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠睡眠的影響（±ss）Tab.3　The effects of sodium pentobarbital at the dose of 50 mg/kg-induced hypnosis（±ss）min

表3　對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠睡眠的影響（±ss）Tab.3　The effects of sodium pentobarbital at the dose of 50 mg/kg-induced hypnosis（±ss）min

注：ANOVA檢驗，與正常組比較*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　單次給藥　7 d給藥入睡時間　睡眠時間　入睡時間　睡眠時間正常組　4.44±1.81　59.11±18.93　6.78±6.28 30.44±13.85參竹精片0.5 g/kg　4.30±0.82　93.00±22.02**7.09±5.45 78.64±32.55**參竹精片0.25 g/kg　3.17±0.83**88.25±23.22**5.55±4.76 57.09±24.59*參竹精片0.125 g/kg　3.00±0.77**87.91±17.41**8.27±10.26 51.64±27.67

4　討論

戊巴比妥鈉屬于巴比妥類鎮靜催眠藥，隨著用藥劑量的增加可依次表現出鎮靜、催眠、麻醉、呼吸抑制、心功能抑制等多種藥理效應。戊巴比妥鈉的作用機制之一是調節腦內GABAA受體（γ-氨基丁酸A型受體）功能［1］。判定受試藥是否具有改善睡眠功能，現代藥理實驗方法一般通過觀察受試藥對巴比妥類藥物誘導睡眠的影響，觀察受試藥是否能協同戊巴比妥鈉的作用，使小鼠入睡數目增加，縮短睡眠潛伏期，延長睡眠時間，以上3項結果中兩項呈陽性者，即可判定受試藥具有改善睡眠功能［2-3］。本研究結果顯示，參竹精片可增加戊巴比妥鈉閾下劑量時睡眠小鼠的數量，增加閾劑量時小鼠的睡眠潛伏時間和睡眠時間，3項實驗結果均為陽性，結果表明參竹精片具有改善睡眠的功能。

表4　對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠腦干組織神經遞質的影響（±ss）Tab.4　The effects of sodium pentobarbital at the dose of 50 mg/kg-induced neurotransmitter in the brain stem of mice（±ss）ng/g

表4　對戊巴比妥鈉閾劑量致小鼠腦干組織神經遞質的影響（±ss）Tab.4　The effects of sodium pentobarbital at the dose of 50 mg/kg-induced neurotransmitter in the brain stem of mice（±ss）ng/g

注：ANOVA檢驗，與正常組比較*P＜0.05，**P＜0.01。

7 d給藥5-HIAA　5-HT　5-HIAA　5-HT正常組　1 980.63±689.10　519.81±71.82　2 104.08±　580.35　277.27±84.03參竹精片0.5 g/kg　1 863.94±388.32　681.23±117.81**　3 456.93±1 209.30　284.58±37.49參竹精片0.25 g/kg　1 826.15±420.54　556.29±92.48　2 356.26±1 288.35　367.99±92.75*參竹精片0.125 g/kg　1 837.22±490.60　526.58±46.92　2 662.20±1 343.02　291.50±93.83組別　單次給藥

失眠癥屬蒙醫“身、心、語”功能紊亂而引起人體“三根”平衡失調而導致的“赫依”病。治療的關鍵在于調節“三根”平衡，疏通筋脈，促使機體歸于“三根七素”相對平衡狀態，恢復正常生理功能［4］。參竹精片由手掌參、黃精、玉竹、何首烏（制）、廣棗組成，方中手掌參具有補益氣血，生津止渴；玉竹、黃精具有補中益氣，潤心肺，強筋骨，潤燥，止渴；制何首烏具有補肝、益腎、養血生精；廣棗具有行氣活血，養心安神［5］；方中諸藥配伍，通過健脾、補腎、養肝生津作用，加強了機體的分解與吸收功能；通過補益氣血、行氣活血，使機體過剩“赫依”加快分解排泄，從而起到養心安神，改善睡眠的作用。

失眠是人體最為常見的睡眠-覺醒節律紊亂［6］，導致失眠的相關因素繁多。近年來，研究表明睡眠是中樞神經系統內一種主動的神經調節過程，與中樞神經系統內某些特定結構及中樞神經遞質的作用關系密切［7］。5-HT是腦內一種重要的神經遞質，可能參與痛覺睡眠和體溫等生理功能的調節［8］。5-HT主要分布在腦干背側中線附近的中縫核等處，多呈抑制效應［9］。改善睡眠作用與5-HT具有相關性［10］。動物腦內5-HT水平的減少可引起失眠，5-HT也能夠引起睡眠的發生而用于失眠的治療［11］。破壞5-HT能神經末梢或抑制色胺酸羥化酶的作用會阻斷腦內5-HT的合成，外在表現失眠狀態［12］。Jouve等也發現破壞貓的中縫核5-HT能神經元或者利用神經毒素選擇性破壞5-HT能神經末梢，都能夠使腦內5-HT水平下降，動物出現不同程度的失眠。給大鼠中縫背核微量注射對氯苯丙氨酸，減少5-HT的合成，能夠使動物出現失眠癥狀［13］。Fischer等［14］將5-羥色氨酸用于治療1例嚴重失眠患者，癥狀得到一定程度的改善。楊岑等［15］認為5-HT是一種促進睡眠的物質，腦內高水平的5-HT是睡眠發生所必需的。本研究結果顯示，用參竹精片單次和連續7 d灌胃給藥，在增加睡眠小鼠數量、入睡時間和睡眠時間的同時，腦干組織5-HT含量增加，結果表明參竹精片可能通過促進5-HT含量增加，起到改善睡眠的作用。

［1］葉少劍，黃念芳.戊巴比妥鈉多種藥理效應的閾劑量觀察［J］.衛生職業教育，2014，32（24）:94-95.

［2］魏偉，吳希美，李元建.藥理實驗方法學［M］.北京:人民衛生出版社，2010:69-73.

［3］張均田，張慶柱.神經藥理學研究技術與方法［M］.北京:人民衛生出版社，2005：397.

［4］王月洪，阿古拉，斯楞格，等.蒙醫溫針對大鼠睡眠時間和自主活動的影響［J］.上海針灸雜志，2014，33（5）:472-475.

［5］烏力吉特古斯，烏云斯日古楞，白玉風，等.蒙藥參竹精片（毛浩日查干-5）治療腎虛的體會［J］.中國民族醫藥雜志，2014，20（5）：21-22.

［6］梁春蓮，陳芬.原發性上失眠患者個性及身心健康研究［J］.實用醫學雜志，2007，23（1）:120-121.

［7］Mitchell H A，Weinshenker D.Good night and good luck:norepinephrine in sleep pharma-cology［J］.Biochem Pharmacol，2010，79（6）：801-809.

［8］孔梅，邢長永，舒曉春.逍遙散干預抑郁癥睡眠障礙模型大鼠海馬5-HI1A受體，5-HI2受體的變化［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16（14）:157.

［9］付乙.中藥對運動性失眠單胺類神經遞質和免疫功能的影響［J］.四川中醫，2004，04:13-15.

［10］陳佳帥，吳軍凱，劉玲，等.黑水纈草石油醚部位改善小鼠睡眠作用及相關機制研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（24）:245-249.

［11］鐘靜瑜，黃俊山.5-羥色胺與睡眠的研究進展［J］.醫學綜述2010，16（10）:1471-73.

［12］張喬，金陽，徐瑞鑫，等.四逆散有效組分改善睡眠作用與5-羥色胺能神經系統相關性的實驗研究［J］.中國醫藥導報，2012，33（14）:29-30，34.

［13］肖成榮，馬增春，李海靜，等.PCPA失眠大鼠模型的制作及其機制［J］.毒理學雜志，2007，21（4）:326.

［14］Fischer PC，Mouret J，Jouvet M.Case of agrypnia（4moths without sleep）in Morvan's disease Favorable eaction of 5-hydroxytry tophan［J］. Elect Clin Neuroph，1974，36（1）:1-18.

［15］楊岑，冉明梓，歐陽鵬榮，等.五羥色胺在睡眠-覺醒中作用［J］.現代生物學進展，2015，15（11）:2191-2194.

（本文編輯：高杉，張震之）

Effects of Shenzhujing tablets for sodium pentobarbital-induced hypnosis in mice

ZHAO Hong-jie，FAN Guan-wei，LUO Yi-yang，GAO Xiao-yu，QI Ji，LIU Zhan-biao，GUO Li-ping
（Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］To observe the effects of Shenzhujing tablets on sodium pentobarbital-induced hypnosis.［Methods］The 96 of Kunming mice were randomly divided into 4 groups:normal group，and Shenzhujing tablet（0.5，0.25，0.125 g/kg）groups.The drugs were administrated orally in single doses to 12 of the mice in each group 2 h before the intraperitoneal injection of sodium pentobarbital at the dose of 30 mg/kg or 50 mg/kg，respectively.Then the mice received daily oral treatments of drugs for 7 days.Similarly，Sodium pentobarbital-induced hypnosis tests were also used 2 h after the last administration of the drugs.The sleep latency and sleep duration during pentobarbital-induced sleep were measured and the ratios of sleep mice to non-sleep mice were counted in mice after oral administration of the drugs.Moreover，the contents of the 5-hydroxytryptamine（5-HT）and 5-hydroxyindoleacetic acid（5-HIAA）in the brain stem were determined.［Results］Compared with normal group，Shenzhujing tablets significantly prolonged the pentobarbitalinduced sleep duration and decrease sleep latency at dose of 0.5 g/kg（P＜0.05），increase the ratios of sleep mice（P＜0.01）to non-sleep mice and the contents of 5-HT in the brain stem under the condition of 30 mg/kg of sodium pentobarbital（P＜0.05）.［Conclusion］Shenzhujing tablets possess sedative-hypnotic activity possibly by promoting the secretion of 5-HT in the brain and might be effective agents for treatment of insomnia.

insomnia；Shenzhujing tablet；5-HT

R285.5

A

1672-1519（2016）05-0307-04

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.05.13

天津市現代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地。

趙宏杰（1990-），女，碩士，研究方向為全科醫學。通訊作者：柳占彪，E-mail：634256747@qq.com；郭利平，E-mail：lpgtjn@163.com。

2016-03-20）