紫白膏對肛腸病術后疼痛大鼠血漿IL-6、IL-10影響*

蔡而瑋　張倩倩

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【實驗研究】

紫白膏對肛腸病術后疼痛大鼠血漿IL-6、IL-10影響*

蔡而瑋1張倩倩2

1.福建中醫藥大學附屬人民醫院肛腸二科(福州 350004); 2.福建中醫藥大學第一臨床醫學院(福州 350000)

摘要：目的研究紫白膏對肛腸病術后疼痛模型大鼠血漿中IL-6、IL-10的影響。方法將健康SD大鼠48只,雌雄各半,隨機分成正常組、單純模型組、凡士林組、紫白膏組。除正常組外,其余大鼠均建立腸病術后疼痛模型；正常組、模型組不予藥物治療,其余各組大鼠分別給予相應藥物創面換藥,連續給藥3天，每天2次，在末次給藥后1小時取血。測定各組大鼠血漿IL-6和IL-10含量。結果四組IL-6情況：單純模型組、凡士林組血漿IL-6水平均高于正常組(P<0.05)，統計學有明顯差異；凡士林組IL-6略低于模型組(P>0.05)，但無明顯統計學差異。紫白膏組IL-6低于模型組、凡士林組(P<0.05)，統計學有明顯差異；紫白膏組血漿IL-6水平略高于正常組(P>0.05)，但無明顯統計學差異；四組IL-10情況：模型組大鼠血漿IL-10與正常組比較無明顯差異(P>0.05)，凡士林組IL-10水平高于模型組，但無統計學差異(P>0.05)，紫白膏組IL-10水平高于凡士林組、模型組、正常組，統計學具有明顯差異(P<0.05)。結論紫白膏能控制肛腸病術后疼痛大鼠血漿IL-6水平，并提升IL-10水平，這可能是紫白膏的臨床鎮痛效果機制之一。

關鍵詞：紫白膏；疼痛； 大鼠； IL-6；IL-10

術后疼痛是人體由于組織損傷、神經纖維受外源性理化因素刺激而產生的一種痛苦感覺, 可見于大多數手術后患者，亦是是肛腸科常見的并發癥。紫白膏是本院院內制劑，主要成分是大黃、紫草、石膏、白及及冰片等，其被長期應用于肛腸病術后創面恢復并取得了良好療效[1～2]。本研究通過測量肛腸病術后疼痛大鼠血清IL-6、IL-10的含量,研究紫白膏對肛腸病術后大鼠血清IL-6、IL-10的影響，從微觀及分子水平探討我院自制劑紫白膏的鎮痛作用機理。

1　研究材料

1.1實驗動物健康清潔級SD大鼠,48只,雌雄各半,體質量為(200±20) g,由福建中醫藥大學動物實驗中心代購，廠家：上海斯萊克實驗動物有限責任公司，合格證編號：2007000573723，許可證號2012-0002。

1.2實驗藥物及試劑(1)紫白膏：由福建中醫藥大學附屬人民醫院中藥制劑室制備。(2)凡士林：福建省人民醫院代購,天津市恒興化學試劑制造有限公司生產。(3)IL-6、IL-10ELISA試劑盒：鼎國昌盛生物技術有限責任公司代購，品牌CUSABIO，產品編號：CSB-E04640r，CSB-E04595r。 (4)10%水合氯醛：福建中醫藥大學實驗室代購，批號：符合HG3-1004-76。

1.3實驗器材手術包(包括眼科手術刀、鑷子、剪刀等)、千分之一電子天平、高速離心機、酶標儀、毛細玻璃管、-20℃冰箱。

1.3研究方法

1.3.1動物分組將48只SD大鼠按隨機數字表法分成4組，即正常組、單純模型組、凡士林組、紫白膏組。

1.3.2動物造模參考何永恒教授造模方法[3]。大鼠經腹腔注射 10% 水合氯醛 0.3 mL/100 g體重麻醉，麻醉后仰臥固定,將鼠尾近端包括肛周進行消毒, 肛門松弛后,以肛緣為界,切開皮膚至直腸點膜,切口修剪成三角形缺損,底寬約l.0cm,高約2. 0cm,深至皮下深筋膜層。

1.3.3創面換藥紫白膏組:造模后創面外用紫白膏。凡士林組:造模后創面外用凡士林。模型組:只造模不使用藥物。正常組:不造模、不使用任何藥物。各組大鼠造模后，正常組、模型組不用藥物處理,其余組分別用相應藥物均勻涂于相應創面上，紗布覆蓋創面。連續換藥3天,每天早晚2次(上午8點至9點、下午4點至5點)。

1.3.4樣本采集各組動物分別換藥3天，于末次換藥后1h,將大鼠經腹腔注射 10% 水合氯醛 0.3 mL/100 g體重麻醉，用5ml注射器抽取腹主動脈血4 mL,抗凝保存，采集后30min內離心10min(3000r/min)，取上清液在-20℃冰箱中保存備用，避免反復凍融。

1.3.5數據處理每孔設計復孔，取平均值計算。以廠家提供專業軟件，根據軟件提示繪出標準曲線，根據樣本 OD值，由標準曲線查出相應濃度。

2　結果

表1　各組實驗大鼠IL-6水平比較

表2　各組實驗大鼠IL-10水平比較　(例)

3　結論

紫白膏能控制肛腸病術后疼痛大鼠血漿IL-6水平，并提升IL-10水平，這可能是紫白膏臨床鎮痛效果的機制之一。

4　討論

現代醫學認為大部分手術后患者由于組織損傷、 創口修復、 神經纖維受外源性理化因素刺激從而產生術后疼痛。疼痛亦是肛腸科常見的并發癥，創傷或手術等組織損促使導致炎癥介質的釋放，繼而外周傷害感受器被激活，傷害性信號就會通過脊髓上行傳導至丘腦和大腦皮層，中樞對這部分信號進行整合后人就產生疼痛感覺[4]。而手術后創面神經纖維末梢暴露, 反復受到外界理化因素(如IL-6、IL-1β、TNF-α)的刺激，一方面炎癥因子直接刺激外周產生疼痛, 另一方面,炎癥因子經過一些反應后作用于脊髓背角神經元 NMDA 受體和AMPA 受體, 使脊髓背角神經元長時去極化, 其興奮性和反應性增加導致中樞敏感化。最終引起了組織對正常刺激的反應增強和反應時間延長, 產生持久性疼痛，故術后疼痛主要的病理基礎是炎癥因子的刺激[5]。因此，減少炎性介質的產生可成為肛腸病術后緩解疼痛的思路之一。

IL- 6是由多種細胞分泌(如單核巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞等)產生的具有分化和促生長作用的生物活性細胞因子，本質是一種多肽物質，是炎癥免疫反應的關鍵介質之一。炎癥激活免疫細胞產生的一系列致炎細胞因子,如IL-1α、IL-1β、IL-18及TNF-α等均可進一步誘導正常細胞產生 IL-6，它可以刺激活化B細胞增殖，分泌抗體[6]，在創傷后代謝反應中起重要作用。IL-10主要由輔助性Th2細胞產生，是一種生物活性強，具有多向性的免疫抑制因子。它可以限制中性粒細胞產生,抑制中性粒細胞及巨噬細胞的趨化性，抑制單核-巨噬細胞、中性粒細胞、嗜酸細胞產生促炎性細胞因子如IL-1、 TNF-α及IL-6等[7],所以可以說IL-10是一種抗炎因子。作為廣泛生物活性的細胞因子，白介素6和白介素10被認為是術后創傷血清中的炎性和抗炎因子的代表，可作為評價術后炎癥反應強烈程度的檢測指標[8]，而術后疼痛的病理基礎是炎癥因子刺激，所以通過檢測術后大鼠血漿白介素6和白介素10的水平能在一定程度上反應術后大鼠的疼痛情況。

祖國醫藥外治法治療肛腸病歷史悠久，紫白膏是本院院內制劑，其臨床療效顯著。但筆者認為中醫藥的療效不僅僅是體現在臨床效果上，中醫應走向科學化道路，故通過本實驗為紫白膏的臨床效果提供科學的數據支持。紫白膏主要成分是大黃、紫草、石膏、白及、冰片等，全方起到清熱利濕、涼血止血、消腫止痛的功效。本方以大黃、紫草為君，研究證實大黃素[9]、紫草素[10]等中藥提取物對炎性介質有干預效果；白及、煅石膏共為臣，有研究[11]證實白及具有緩解術后疼痛效果，而煅石膏具有收斂生肌，多外用以治癰疽瘡瘍，潰不收口，金瘡出血等[12]。冰片為使，研究證實其具有顯著的抗炎、鎮痛效果[13]。總而觀之，本方整體藥理具有抗炎鎮痛效果，本實驗研究證實了紫白膏對肛腸病術后疼痛模型大鼠IL-6的控制作用和對IL-10的提升作用，此可能為紫白膏鎮痛機制之一，但遺憾的是本實驗不能證實紫白膏對炎性因子產生作用的具體機理，有待后續進一步研究。

參考文獻

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*基金項目：福建省科技廳紫白膏治療混合痔術后的臨床研究(No.2011Y0033)

doi:10.3969/j.issn.1003-8914.2016.01.023

文章編號：1003-8914(2016)-01-0048-03

收稿日期：(本文校對：葉玲2015-01-12)

The influence of the ZiBai Cream on IL-6 and IL-10 in plasma of rats with anorectal postoperative pain

CAI Erwei1ZHANG Qianqian2

(1.The Affiliated People's Hospital of Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fujian, Fuzhou 350004, China;2.Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fujian, Fuzhou 350000, China)

Abstract：ObjectiveTo study on the influence of the ZiBai Cream on IL-6 and IL-10 in plasma of rats with anorectal postoperative pain. MethodsThe healthy 48 SD rats, half male and half female, were randomly divided into 4 groups，namely the normal group, pure model group, vaseline group, ZiBai cream group。Except the normal group, the other rats were established anorectal diseases anorectal diseaseanorectal diseasepostoperative pain model；Except the normal group and model group, other groups of rats were given corresponding medicine dressing change, continuous administration for 3 days, 2 times a day，In the last 1 hours after administration of blood treatment。Determine the plasma IL-6 and IL-10 content in all rats。ResultsFour groups of IL-6: IL-6 levels in plasma of simple model group, vaseline group are higher than those of normal group(P<0.05), statistically significant difference; The level of IL-6 vaseline group is slightly lower than the model group(P>0.05), but no statistical difference； The ZiBai cream group IL-6 was lower than that of model group, vaseline group(P<0.05)，statistics had significant difference。Four groups of IL-10：No significant difference was found between the plasma IL-10 of the rats in the model group and the normal group(P>0.05)；Vaseline group was higher than that in the model group, but the difference was not statistically significant(P>0.05)；The ZiBai cream group IL-10 levels higher than vaseline group, model group and normal group, with significant difference in Statistics(P<0.05)。ConclusionZiBai cream can control the rat plasma IL-6 level of anorectal postoperative pain，and enhance the level of IL-10，This may be one of the mechanism of analgesic effect of ZiBai cream。

Key words：ZiBai cream；Pain； rats；IL-6；IL-10