鬼箭羽與其偽品大果榆的薄層色譜鑒別研究*

王　相　郭丁丁　陳靜靜　李先榮

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鬼箭羽與其偽品大果榆的薄層色譜鑒別研究*

王相郭丁丁△陳靜靜李先榮

山西省中醫(yī)藥研究院(太原 030012)

摘要：目的建立區(qū)分鬼箭羽與其偽品大果榆的薄層色譜鑒別方法，為鬼箭羽藥材的鑒別提供更加方便、快捷的依據(jù)。 方法通過(guò)系統(tǒng)的對(duì)比研究，采用薄層色譜法對(duì)鬼箭羽及大果榆進(jìn)行定性鑒別。 結(jié)果在鬼箭羽與大果榆的薄層色譜鑒別結(jié)果中存在一特殊斑點(diǎn)，利用該斑點(diǎn)可以區(qū)分兩者。 結(jié)論研究所建立的薄層色譜方法操作簡(jiǎn)單、可行性高，可以作為鬼箭羽與大果榆的鑒別依據(jù)。

關(guān)鍵詞：鬼箭羽；大果榆；薄層鑒別

鬼箭羽，又名衛(wèi)矛、鬼箭、六月凌等，為衛(wèi)矛科植物衛(wèi)矛Euonymusalatus(Thunb.)Sieb.的具翅狀物的嫩枝或翅狀附屬物。具有破血通經(jīng)、解毒消腫、殺蟲(chóng)之功效。近代研究表明，其化學(xué)成分主要為黃酮類(lèi)[1]、甾體類(lèi)、萜類(lèi)及多糖類(lèi)[2]等，且其藥理活性研究主要集中在黃酮類(lèi)成分[3]的活性研究。大果榆，為榆科植物大果榆UlmusmacrocarpaHance.的干燥莖，具有祛痰、利尿、殺蟲(chóng)之功效。二者來(lái)源不同，但因其莖亦為圓柱狀，具不規(guī)則木栓翅，枝堅(jiān)硬而韌，故目前藥材商品流通中常常可見(jiàn)以大果榆冒充鬼箭羽藥材。為了保證藥材質(zhì)量及臨床用藥安全，本文系統(tǒng)的研究了鬼箭羽與大果榆在薄層色譜的主要差別，已達(dá)到有效鑒別真?zhèn)蔚哪康?，保證藥材質(zhì)量及臨床用藥安全。

1　儀器與試藥

KQ-3200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；BP-211D型電子天平(德國(guó)賽多利斯)；DZKW-4型電子恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)儀器有限公司)；DFT-200C型粉碎機(jī)(上海比朗儀器有限公司)；薄層層析硅膠G(化學(xué)純 青島海洋化工有限公司)；薄層層析硅膠GF254(化學(xué)純 青島海洋化工有限公司)；β-谷甾醇對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110851-201206)；蒸餾水；其他試劑均為分析純。

鬼箭羽藥材分別購(gòu)自成都、河北、山西等地，另有自采自山西沁水縣鬼箭羽藥材，共13批，經(jīng)山西省食品藥品檢驗(yàn)所王春芳教授鑒定1，2，7號(hào)樣品為榆科植物大果榆UlmusmacrocarpaHance.，其余樣品為衛(wèi)矛Euonymusalatus(Thunb.)Sieb.具體信息見(jiàn)表1。

表1　鬼箭羽藥材收集情況

2　試驗(yàn)方法與結(jié)果

曾參照不同文獻(xiàn)中記載鬼箭羽藥材的薄層色譜鑒別方法對(duì)10份鬼箭羽藥材及3份大果榆藥材進(jìn)行鑒別。結(jié)果如下。

2.1方法一[4]取樣品粉末2 g，加甲醇30ml，超聲處理20分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。以β-谷甾醇為對(duì)照，照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙醚(3∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光下檢視。其結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1　薄層色譜鑒別1-13：供試品　B：β-谷甾醇對(duì)照品

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，利用該方法進(jìn)行薄層鑒別，以β-谷甾醇為對(duì)照，鬼箭羽與大果榆均在相同位置顯示相同顏色斑點(diǎn)，該成分在兩種藥材中均含有，選用該方法未能區(qū)分兩者，無(wú)鑒別意義。

2.2方法二[5]取樣品粉末5 g，加乙酸乙酯50ml，超聲2小時(shí)，提取液回收乙酸乙酯至近干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液，另取齊墩果酸對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1ml含2mg的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，分別吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇(10∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2　薄層色譜鑒別1-13：供試品　B：齊墩果酸對(duì)照品

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，利用該方法進(jìn)行薄層鑒別，以齊墩果酸為對(duì)照，3份大果榆樣品中均未顯示對(duì)應(yīng)斑點(diǎn)，而10份鬼箭羽藥材中卻在某些批次中顯示該斑點(diǎn)，有些批次中并未顯示該斑點(diǎn)，利用齊墩果酸為對(duì)照，未能達(dá)到區(qū)分所有鬼箭羽與大果榆的目的。

2.3方法三基于以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)資料，對(duì)鬼箭羽樣品進(jìn)行了系統(tǒng)的薄層色譜條件研究。

2.3.1供試品溶液的制備取本品粉末2 g，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取鬼箭羽對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.3.2不同展開(kāi)條件下薄層鑒別

2.3.2.1不同展開(kāi)體系下對(duì)鬼箭羽與大果榆的薄層鑒別照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，分別以正丁醇-醋酸-水(12∶5∶4)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶4∶1)[6]，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖3、4。

圖3　硅膠G板 365nm檢視正丁醇-醋酸-水(12∶5∶4)1，3：樣2(大果榆) 2，4：樣10(鬼箭羽)5：樣9(鬼箭羽)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，利用該兩種方法進(jìn)行薄層鑒別，圖3薄層結(jié)果中大果榆與鬼箭羽存在差異，但鬼箭羽主斑點(diǎn)Rf值太大，未能顯示更多信息，圖4薄層結(jié)果中二者均有相同主斑點(diǎn)，但大果榆結(jié)果在Rf值約0.4左右有一斑點(diǎn)，鬼箭羽未顯示相同斑點(diǎn)，但當(dāng)所有批次藥材均在該薄層條件下展開(kāi)時(shí)，并未出現(xiàn)相同薄層行為，某些批次鬼箭羽樣品中也顯示相同斑點(diǎn)，因此對(duì)該方法進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化研究，以期達(dá)到區(qū)分所有批次鬼箭羽與偽品大果榆的目的。

2.3.2.1同一展開(kāi)體系下不同薄層板對(duì)鬼箭羽與大果榆的薄層鑒別照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G、GF254薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶4∶1)，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖4、5。

圖4　硅膠G板 365nm檢視甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶4∶1)1，3：樣2(大果榆) 2，4：樣10(鬼箭羽) 5：樣9(鬼箭羽)

圖5　硅膠GF254板 254nm檢視1：樣品2(大果榆)2：樣品10(鬼箭羽)3-4：樣品9(鬼箭羽)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，利用該種方法進(jìn)行薄層鑒別，大果榆與鬼箭羽在Rf值約0.95附近有一斑點(diǎn)存在差異，但該主斑點(diǎn)Rf值偏大，故調(diào)整該薄層展開(kāi)劑體系，以尋求更好的薄層鑒別方法。

2.3.2.1同一展開(kāi)體系下不同極性展開(kāi)劑對(duì)鬼箭羽與大果榆的薄層鑒別照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶4∶1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶9∶1)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶1∶0.5)，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。結(jié)果見(jiàn)圖6、7、8。

圖6　硅膠GF254板 254nm檢視1-13：樣1-13甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶4∶1)

圖7　硅膠GF254板 254nm檢視1-13：樣1-13甲苯-乙酸乙酯-甲酸(9∶9∶1)

圖8　硅膠GF254板 254nm檢視1-13：樣1-13甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶1∶0.5)

由以上試驗(yàn)結(jié)果可知，在硅膠G254薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶1∶0.5)為展開(kāi)劑進(jìn)行展開(kāi)，得到的結(jié)果能較好的區(qū)別鬼箭羽藥材與大果榆藥材。故將其薄層鑒別方法定為：取本品粉末2 g，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取鬼箭羽對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶1∶0.5)，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。

2.3.3薄層板耐用性考察觀(guān)察在不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的薄層板上的層析效果。將相同的供試品溶液分別點(diǎn)樣于自制硅膠GF254板和青島海洋化工廠(chǎng)分廠(chǎng)購(gòu)買(mǎi)的硅膠GF254板上，用相同的展開(kāi)系統(tǒng)展開(kāi)，結(jié)果顯示兩個(gè)薄層板上的展開(kāi)效果均較理想，所得斑點(diǎn)清晰，且分離效果好。結(jié)果見(jiàn)圖8、9。

圖8　硅膠GF254板 254nm檢視(自制)1-13：樣1-13

圖9　硅膠GF254板 254nm檢視(青島海洋化工廠(chǎng))1-13：樣1-13

3　討論

鬼箭羽在臨床中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，市場(chǎng)中常有其偽品出現(xiàn)，鬼箭羽與偽品大果榆的鑒別已有相關(guān)報(bào)道[7]，但通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)其重復(fù)性較差，往往得不到預(yù)期的結(jié)果。目前，湖南、湖北、甘肅等地的藥材地方標(biāo)準(zhǔn)中收載有鬼箭羽藥材的薄層色譜鑒別方法，但所建立的方法標(biāo)準(zhǔn)[1，8～9]中所收載的定性鑒別方法分別以β-谷甾醇、異鼠李素等對(duì)照品來(lái)鑒別鬼箭羽，均未能用于區(qū)分其與大果榆。另外，文獻(xiàn)報(bào)道中作為對(duì)照使用的香橙素、柚皮素、山奈酚等多為實(shí)驗(yàn)室自制，不易購(gòu)得。本文通過(guò)系統(tǒng)的研究，以鬼箭羽藥材為對(duì)照來(lái)區(qū)分鬼箭羽及其偽品大果榆，并找出定性區(qū)別鬼箭羽與大果榆的方法，經(jīng)過(guò)考察，該方法可行性高、直觀(guān)、方便，為區(qū)別鬼箭羽與大果榆提供了有利的依據(jù)。區(qū)別鬼箭羽與其偽品大果榆的斑點(diǎn)成分結(jié)構(gòu)鑒定將另文報(bào)道。

參考文獻(xiàn)

[1]巴寅穎，石任兵，劉倩穎,等.鬼箭羽中黃酮類(lèi)化學(xué)成分研究[J].中草藥，2012，2(43):242-246.

[2]巴寅穎，張?zhí)m珍，石任兵.HPLC法同時(shí)測(cè)定鬼箭羽藥材中4種有效成分含量[J].藥物分析雜志，2010,30(6):991-994.

[3]李玉杰，龔慕辛，來(lái)媛媛,等.鬼箭羽不同提取部位對(duì)糖尿病大鼠藥理作用的研究[J].北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010,33(3):179-182.

[4]遼寧省食品藥品監(jiān)督管理局.遼寧省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[S].沈陽(yáng)：沈陽(yáng)科學(xué)技術(shù)出版社，2009:130.

[5]劉贅,周欣，龔小見(jiàn),等.鬼箭羽藥材的薄層色譜鑒別[J].貴州師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2009, 27(3):113-115.

[6]徐小瓊,王西芳,張偉,等.金柴胡總黃酮的含量測(cè)定及薄層鑒別[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥，2012，32(6)：61-63.

[7]張超,龔慕辛,羅云,等.鬼箭羽正品飲片與偽品大果榆飲片的區(qū)別研究[J].北京中醫(yī)藥，2011，30(2):136-139.

[8]湖南省食品藥品監(jiān)督管理局編.湖南省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[S].長(zhǎng)沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社,2009:99.

[9]甘肅省食品藥品監(jiān)督管理局編.甘肅省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[S].蘭州：甘肅文化出版社,2009:295.

*基金項(xiàng)目：山西省中藥材、中藥飲片地方藥材標(biāo)準(zhǔn)研究(No.2012016A)

通訊作者△

doi:10.3969/j.issn.1003-8914.2016.01.024

文章編號(hào)：1003-8914(2016)-01-0050-04

收稿日期：(本文校對(duì)：劉言言2015-01-17)

The TLC Study of Euonymus Alatus and Its Adulterants Ulmus Macrocarpa

WANG XiangGUO Dingding△LI Xianrong

(Shanxi Institute of Prescription of TCM, Shanxi, Taiyuan 030012, China)

Abstract：ObjectiveTo establish the TLC methods of the Euonymus alatus and Ulmus macrocarpa in order to make its identification easier and convenient. MethodsAccording to its systems research, using TLC methods can identify the Euonymus alatus and Ulmus macrocarpa. ResultsThere is a special spot in TLC results which can distinguish the two herbs between the Euonymus alatus and Ulmus macrocarpa. ConclusionThe method is easy and reliable with good reproducibility, and can be used as quality control standard of Euonymus alatus and its adulterants Ulmus macrocarpa.

Key words：Euonymus alatus; Ulmus macrocarpa; TLC