實驗室室間質評染色體檢測水平效果分析*

陳　希，陳園園，牟　琴，楊　靜，范　玲，張大勇，王治國，豆　虎，鄒　琳，包黎明△

(1.重慶醫科大學附屬兒童醫院臨床分子醫學中心/重慶市兒科學重點實驗室/兒童發育疾病研究省部共建教育部重點實驗室，重慶 400014；2.重慶醫科大學附屬兒童醫院檢驗科，重慶 400014；3.國家衛生計生委臨床檢驗中心，北京 100730)

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實驗室室間質評染色體檢測水平效果分析*

陳希1，陳園園1，牟琴1，楊靜1，范玲1，張大勇1，王治國3，豆虎2，鄒琳1，包黎明1△

(1.重慶醫科大學附屬兒童醫院臨床分子醫學中心/重慶市兒科學重點實驗室/兒童發育疾病研究省部共建教育部重點實驗室，重慶 400014；2.重慶醫科大學附屬兒童醫院檢驗科，重慶 400014；3.國家衛生計生委臨床檢驗中心，北京 100730)

目的分析參加美國病理學會(CAP)室間質評的能力比對檢驗(PT)后，染色體檢測水平的變化。方法分析2011～2014參加CAP PT的結果，并根據CAP評審結果，得出該實驗室細胞遺傳學染色體質控測試的準確率，并通過分析該實驗室參加CAP前后的染色體條帶水平、異常檢出率及染色體檢測失敗率，評估CAP室間質評項目對提高該實驗室染色體檢測水平的作用。結果2011～2014年該實驗室參加CAP PT測試10次，共分析病例59例，判斷染色體核型正確率為100%，核型描述正確率為95.1%。該實驗室臨床病例染色體檢測結果顯示：外周血染色體的異常檢出率為18.9%，骨髓染色體的異常檢出率為25.9%，初診白血病異常率為66.8%；外周血染色體及骨髓染色體檢測的失敗率分別為0.5%、5.0%；參加CAP后，外周血及骨髓染色體檢測失敗率均下降，染色體條帶平均水平均提高，與參加CAP前比較差異均有統計學意義(P<0.01)。結論參加高水平的室間質評項目可以提高細胞遺傳學染色體檢測的臨床分析水平。

細胞遺傳學；室間質評；能力比對檢驗

采用臨床細胞遺傳學方法檢測與疾病有關的染色體數目及結構改變，對遺傳性疾病和腫瘤的診治起著重要作用[1]。染色體檢查所涉及的標本種類多，包括外周血、骨髓、淋巴結、實體腫瘤、產前標本等，檢測過程中手工操作較多、時間長、易受多種因素影響[2]。目前尚無全國性的細胞遺傳學檢測指導標準[3-4]，各實驗室水平參差不齊，在染色體顯色條帶水平、細胞分析個數、審核流程及報告模式等方面不統一[5]。部分實驗室進行了區域性的室間結果比對，但是范圍小，且缺乏統一標準及權威性[6]。為了更好地監測染色體檢查水平，提高質量，本實驗室于2011年起參加了美國病理學家學會(College of American Pathologists，CAP)主辦的細胞遺傳學的室間質控能力比對檢驗(proficiency test，PT)項目。

1　材料與方法

1.1標本來源(1)CAP室間質控病例：通過CAP網站(www.cap.org)申請參加PT項目，每年收到3次測試材料，每次測試有5～8例病例，病例標本種類包括腫瘤、外周血、產前組織等表本，每例病例一般含有5張細胞中期分裂圖像和簡要的病史資料。(2)臨床病例：本實驗室至今已完成的臨床染色體檢測15 579例，其中外周血染色體檢測13 003例，病例主要來自于重慶醫科大學附屬兒童醫院兒童保健門診、遺傳門診、內分泌門診、泌尿外科門診和住院部就診的疑似智力低下、發育障礙、出生缺陷及智力低下合并出生缺陷的兒童；骨髓染色體檢測2 576例，病例來自于重慶醫科大學附屬兒童醫院血液科的血液系統疾病患兒，包括白血病、血小板減少性紫癜(idiopathic trombocytopenic purpura，ITP)、貧血及白血病復查病例。

1.2方法

1.2.1CAP室間質控按照CAP的要求分析染色體核型，采用人類細胞遺傳學國際命名體系(International System for Chromosome Nomenclature，ISCN)描述核型，分析條帶要求在400以上，最后結果以實際觀察到的最高分別率為準，在規定的時間內(1個月)在CAP網站上報結果。CAP PT結果從兩個方面進行判斷：(1)染色體核型判斷，主要考核實驗室發現異常染色體的能力；(2)核型描述，主要考核實驗室正確描述核型的能力。CAP有時還會有一些不計入評分的內容和調查問卷，主要是了解行業中開展新項目、新技術的狀況。評分項目需要80%實驗室回答正確才能成立，每次結果都附有對每個檢測病例的分析說明。

1.2.2臨床質控評估方法為了滿足CAP要求，本實驗室完善了標本在檢驗前中后的室內質控：(1)引進了計算機數字核型分析系統，使分析更簡便直觀；(2)建立高分辨染色體制備方法，在恒溫恒濕干燥箱內制片，染色體條帶水平有較大提升；(3)骨髓染色體采用多種方法培養，降低培養失敗率；(4)病例采取兩人共同分析，雙審核，降低分析失誤率。本實驗室以條帶水平評估染色體技術質量，每月隨機抽取骨髓及外周血染色體病例各10例，根據英國室間質控計劃(條帶評估指南)評估染色體條帶水平[7-8]；定期統計骨髓及外周血染色體的異常檢出率及失敗率。

2　結　　果

2.1CAP能力測試2011～2014年共參加10次CAP能力測試，分析59例病例，標本類型以外周血、骨髓及產前組織標本為主，見表1。共54例返回評審結果，本實驗室上交的54例染色體核型分析結果全部正確，正確率為100%，核型描述正確率為92.6%(50/54)。3例核型描述與標準答案不一致，其中1例上報核型為 46,X,i(X)(q10)[2]/45,X[3]，CAP判定為45,X[3]/46,X,i(X)(q10)[2]，ISCN規定異常細胞株按數目由多至少排列；另2例由于描述位點未達到所提供染色體的最高分辨率而不被接受，上報核型分別為46,XX,t(11;22)(q23;q11.2)、 45,XX,t(3;3)(q21;q26),-7[5]，CAP判定為46,XX,t(11;22)(q23.3;q11.2)、45,XX,t(3;3)(q21;q26.2),-7[5]。還有1例被認為可以接受，CAP判定為46,X,+der(4)t(4;11)(q12;q13.5)mat，本實驗室上報核型為46,X,+der(4)t(4;11)(q13.2;q21),根據所提供的病史資料，該病例的4號異常染色體為母親遺傳所致。

2.2臨床標本檢測本實驗室已完成15 252例臨床病例的染色體檢測，其中外周血染色體13 016例，異常檢出率達18.9%(2 460/13 016)，以數目異常為主，占82.0%(2 017/2 460)，其次為結構異常，占18.0%(443/2 460)；骨髓染色體2 236例，異常檢出率為25.9%(580/2 354)，數目異常占47.2%(274/580)，結構異常占52.8%(306/580)，初診白血病病例異常率高達66.8%。

表1　　2011～2013年CAP室間質評標本及核型類型

2.3染色體檢測水平提高本實驗室2007～2013年染色體條帶平均水平不斷提升，見圖1。2011～2013年骨髓及外周血條帶水平較2007～2010年均提高，差異均有統計學意義(P<0.01)；骨髓染色體條帶平均水平從每單倍體371條帶提高到471條帶，外周血條帶平均水平從每單倍體403條帶提高到515條帶。外周血染色體及骨髓染色體檢測失敗率分別為0.5%(65/13 082)和5.0%(118/2 354)，保持在較低水平，在2011年參加CAP后染色體檢測成功率明顯上升，見圖2。骨髓染色體檢測失敗率從2007～2010年的7.8%(70/899)降低至2011～2013年的3.8%(55/1 455)，外周血染色體檢測失敗率從2007～2010年的1.0%(64/6 324)下降至2011～2013年的0.03%(2/6 758)，差異均有統計學意義(P<0.01)。

圖1　　2007～2013年染色體條帶水平

圖2　　2007～2013年染色體檢測失敗率

3　討　　論

本實驗調查結果顯示，外周血染色體的異常檢出率達18.9%，骨髓染色體的異常檢出率為25.9%，均與國際報道水平相當[6]。2011～2013年骨髓及外周血條帶水平較2007～2010年均提高，骨髓及外周血染色體檢測失敗率均下降，表明參加CAP后，加強實驗室質量控制，使檢測失敗率有所降低。從以上本實驗室的調查結果與經驗來看，參加室間質評(如CAP PT)項目可以提高細胞遺傳學染色體檢測分析水平[8]，通過增加染色體條帶分辨率，可發現染色體微小缺失及易位。本實驗室染色體檢查的質量指標(失敗率及檢出率)達到國際同類實驗室的水平，這可能與本實驗室不斷改進方法，如建立高分辨染色體的檢測技術，引進數字化核型分析系統，以及分析人員技術培訓等密不可分。參加國際性PT項目存在標本遞送、費用較貴等問題，有必要在中國開展國內細胞遺傳學染色體室間質評項目，本實驗室于2013年協助國家衛生和計劃生育委員會臨床檢驗中心開展全國醫院臨床實驗室染色體核型分析質量調查評估活動，此次調查包括5例病例，每例含5張中期分裂象的圖片，采用選擇題的方式，有139家實驗室參與，準確率均達95%以上。此次室間質評調查為今后開展全國細胞遺傳學室間質評奠定了基礎。

全國醫院臨床實驗室染色體室間質量評價才剛起步，室間質評的組織形式還需進一步完善，評價的質控物要有一定的代表性和穩定性，評定的方法和標準可以參照CAP細胞遺傳學PT的評定方法，通過室間質評活動可以提高細胞遺傳學的檢查質量，為遺傳疾病及腫瘤診治提供依據。筆者對今后室間質評工作提出了以下建議：(1)建立全國統一的細胞遺傳學和分子熒光原位雜交的行業技術質量標準；(2)定期開展室間質控活動，監測實驗室染色體檢查水平；(3)開展培訓班，提高從業人員業務水平；(4)把室間質評結果作為臨床實驗室認證的主要指標之一；(5)鼓勵有條件的實驗室參加國際室間質評。

[1]Hoeltge GA，Dewald G，Miles J，et al．Proficiency testing in clinical cytogenetics.The 1986 experience of the College of American Pathologists[J]．Arch Pathol Lab Med，1988，112(11)：1085-1090．

[2]Hoeltge GA，Dewald G，Palmer CG，et al．Proficiency testing in clinical cytogenetics.A 6-year experience with photographs,fixed cells,and fresh blood[J]．Arch Pathol Lab Med，1993，117(8)：776-779．

[3]翁炳煥，任宇珂，呂時銘，等．產前診斷中染色體核型分析的質量控制[J]．中華醫院管理雜志，2008，24(3)：202-203．

[4]呂時銘．我國產前診斷技術發展與質量控制[J]．中華檢驗醫學雜志，2010，33(2)：101-105．

[5]王薇，陳園園，陳希，等．我國產前染色體核型分析的室間質評調查結果分析[J]．中華醫學遺傳學雜志，2014，31(4)：483-486．

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Assessment of effect of laboratory external quality assessment program on cytogenetic testing*

ChenXi1，ChenYuanyuan1，MuQin1，YangJing1，FanLing1，ZhangDayong1，WangZhiguo3，DouHu1，ZouLin1，BaoLiming1△

(1.CenterforClinicalMolecularMedicine,AffiliatedChildren′sHospitalofChongqingMedicalUniversity/KeyLaboratoryofPediatricsinChongqing/MinistryofEducationKeyLaboratoryofChildDevelopmentandDisorders,Chongqing400014,China；2.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedChildren′sHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400014；3.CenterforClinicalLaboratoriesofNationalHealthandFamilyPlanningCommission,Beijing100730,China)

ObjectiveTo analyze the change of chromosome test level after participating in the inter-laboratory proficiency test(PT) program of the College of American Pathologists(CAP).MethodsThe results for participating in CAP PT during 2011-2014 were analyzed,the accuracy of the cytogenetic chromosome quality control test in this laboratory was obtained according to the CAP evaluation results,and the effect of CAP external quality assessment item on increasing the chromosome detection level in this laboratory was evaluated by analyzing the chromosome band levels before and after participating in CAP.ResultsThis laboratory participated in CAP PT test for 10 times during 2011-2014,a total of 59 cases were analyzed,the accuracy rate for judging chromosome karyotype was 100%,the karyotype description accuracy rate was 95.1%.The chromosome test results of clinical cases in this laboratory displayed that peripheral blood chromosome abnormal detection rate was 18.9% and bone marrow chromosome abnormal detection rate was 25.9%,the abnormal rate of newly diagnosed leukemia was 66.8%; the detection failure rates of peripheral blood chromosome and bone marrow chromosome were 0.5% and 5.0% respectively; the detection failure rates of peripheral blood chromosome and bone marrow chromosome after participating in CAP were decreased,the chromosome band average level was improved,showing statistical difference compared with those before participating in CAP(P<0.01).ConclusionParticipating in high quality external laboratory assessment item can increase the clinical analytic level of cytogenetic chromosome test.

cytogenetics；external quality assessment；proficiency test

重慶市衛生局課題資助項目(2012-2-100)。作者簡介：陳希(1983-)，主管技師，碩士，主要從事血液病及遺傳病研究。△

，E-mail:lbaogene@yahoo.com。

R394.2

A

1671-8348(2016)21-2917-03

2016-01-16

2016-04-03)

論著·臨床研究doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.21.011