健脾化濁方對(duì)酒精性脂肪肝大鼠血脂代謝及肝功能的影響

席菊蘭，楊苗，馬紅學(xué)，吳秋玲，李朝喧

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024；2.山西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山西太原030024）

健脾化濁方對(duì)酒精性脂肪肝大鼠血脂代謝及肝功能的影響

席菊蘭1，楊苗1，馬紅學(xué)2，吳秋玲1，李朝喧1

（1.山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原030024；2.山西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山西太原030024）

目的：觀察健脾化濁方對(duì)實(shí)驗(yàn)性酒精性脂肪肝（AFLD）大鼠血脂代謝及肝功能的影響。方法：將雄性SD大鼠采用酒精聯(lián)合脂肪乳劑法制備AFLD大鼠模型，將造模大鼠隨機(jī)分為模型組、聯(lián)苯雙酯組、健脾化濁低劑量組（10 g/kg）、健脾化濁中劑量組（20 g/kg）和健脾化濁高劑量組（40 g/kg）。正常組和模型組給予生理鹽水，其余各組連續(xù)灌胃相應(yīng)藥物30 d，給藥結(jié)束后比較各組大鼠體質(zhì)量、肝重，并利用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定各組大鼠血清中TC、TG、AST、ALT水平。結(jié)果：與正常組相比較，模型組大鼠的體質(zhì)量、肝重，血清TC、TG、AST、ALT的水平明顯升高（P＜0.01），表明造模成功；與模型組相比，健脾化濁方高、中、低劑量組均能顯著降低AFLD大鼠體質(zhì)量、肝重及血清TC、TG、AST、ALT水平（P＜0.01）。結(jié)論：健脾化濁方具有調(diào)節(jié)AFLD大鼠血脂代謝異常和保護(hù)其肝功能的作用。

酒精性脂肪肝；健脾化濁方；血脂代謝；肝功能

酒精性脂肪肝（alcoholic fatty liver disease，AFLD）是因長(zhǎng)期大量飲酒致過量脂肪在肝內(nèi)持久貯積所致的疾病。有調(diào)查顯示，在肝臟疾病中AFLD的死亡率僅次于肝癌［1］。近年酒精性肝病在我國(guó)發(fā)病率也呈上升趨勢(shì)，酒精已成為肝臟損傷的第二大因素。酒味苦甘辛，大熱有毒，嗜酒日久，易損傷脾胃，脾失健運(yùn)，濕濁內(nèi)生；酒毒內(nèi)侵，釀濕生痰，痰瘀阻滯，酒毒、濕熱、氣血及痰瘀搏結(jié)于脅下而發(fā)病［2］。健脾化濁方以五苓散為基礎(chǔ)化裁而成，由茯苓、豬苓、桂枝、白術(shù)、澤瀉、生山楂、虎杖等藥物嚴(yán)謹(jǐn)配伍成方，具有健脾養(yǎng)肝，氣血并調(diào)，痰瘀并治之功。前期臨床研究已經(jīng)證實(shí)，健脾化濁方治療酒精性肝病療效顯著，總有效率達(dá)74.3%。本實(shí)驗(yàn)通過建立酒精性脂肪肝大鼠動(dòng)物模型，觀察健脾化濁方對(duì)酒精性脂肪肝大鼠模型血脂代謝及肝功能的影響，旨在為健脾化濁方治療酒精性脂肪肝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量（180±20）g，購(gòu)自于山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，飼養(yǎng)于山西中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心動(dòng)物房。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物健脾化濁方主要藥物：茯苓15 g，豬苓10 g，白術(shù)10 g，桂枝6 g，生山楂15 g，澤瀉10 g，虎杖10 g，草決明15 g。實(shí)驗(yàn)用藥由山西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑室提供。按照各藥材在方中比例準(zhǔn)確稱取，采用傳統(tǒng)中藥煎煮制備，將兩次煎煮藥液合并，濃縮為含生藥1 g/mL，2 g/mL，4 g/mL的液體，滅菌，4℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆茫o藥時(shí)水浴至常溫。高脂飼料10%玉米油、1%膽固醇、5%豬油、84%基礎(chǔ)飼料。

1.1.3 儀器與試劑血清甘油三酯（TG）、血清總膽固醇（TC）、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶（ALT）檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所生產(chǎn)），BECKMAN Synchrom CX5全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 模型建立采用白酒聯(lián)合脂肪乳劑灌胃法造模［3］。以每次5 g/kg作為白酒初始灌胃劑量，后根據(jù)大鼠的活動(dòng)及反應(yīng)情況和體質(zhì)量逐步增加白酒灌胃量至8 g/（kg·次）。前后共9周造模完成。

1.2.2 分組及給藥選取60只SPF級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量（180±20）g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w，隨機(jī)取10只為正常組，50只作為造模組。動(dòng)物造模成功后，隨機(jī)分為模型組、聯(lián)苯雙酯組、健脾化濁方低劑量組10 g/kg、健脾化濁方中劑量組20 g/kg和健脾化濁方高劑量組40 g/kg。正常組和模型組灌胃生理鹽水，其余各治療組給藥劑量按1mL/100 g體積連續(xù)灌胃相應(yīng)藥物30 d。

1.3 觀察指標(biāo)

末次給藥后，所有大鼠均禁食12 h，稱取體質(zhì)量，并摘取各組大鼠肝臟稱重；血清指標(biāo)測(cè)定：眼眶靜脈取血，靜置30min，離心分離血清，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定TC、TG、AST、ALT水平，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，采用單因素方差分析處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)各組大鼠一般情況、體質(zhì)量及肝重的比較

造模過程中，正常組大鼠較造模大鼠一般狀態(tài)好，毛發(fā)有光澤，食欲佳，無嗜睡，大便未見異常。與正常組相對(duì)比，模型組大鼠體質(zhì)量和肝重明顯升高，表明酒精性脂肪肝模型已復(fù)制成功；與模型組相比，聯(lián)苯雙酯組及健脾化濁方低、中、高劑量組均能降低模型大鼠的體質(zhì)量和肝重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量及肝重比較（g，s）

表1 各組大鼠體質(zhì)量及肝重比較（g，s）

注：與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01

組別體質(zhì)量肝重正常組306.08±17.22 7.99±1.01模型組399.54±20.991）9.88±0.771）聯(lián)苯雙酯組376.24±24.182）9.06±1.332）健脾化濁低劑量組383.69±19.452）9.18±1.532）健脾化濁中劑量組380.77±18.612）9.11±0.992）健脾化濁高劑量組369.33±17.382）8.96±1.382）

2.2 各組大鼠血清TC、TG、AST及ALT水平比較

模型組大鼠血清TG、TC、AST、A LT水平較正常組有顯著升高，說明其出現(xiàn)了血脂代謝異常及肝功能受損；與模型組相對(duì)比，各給藥組大鼠血清指標(biāo)水平顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果提示健脾化濁方在調(diào)節(jié)大鼠血脂代謝和保護(hù)酒精性脂肪肝大鼠肝臟功能方面具有顯著作用。結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠血清TC、TG、AST及ALT水平比較（±s）

表2 各組大鼠血清TC、TG、AST及ALT水平比較（±s）

注：與正常組比較，1）P＜0.01；與模型組比較，2）P＜0.01

組別TC（mmol/L）TG（mmol/L）AST（U/L）ALT（U/L）正常組38.17±0.44 0.72±0.23 69.36±11.72 41.25±11.07模型組90.79±5.331）3.26±0.561）170.11±27.001）118.83±10.991）聯(lián)苯雙酯組78.56±1.982）2.18±0.132）92.66±22.022）85.96±13.042）健脾化濁低劑量組81.36±2.212）2.76±0.172）94.24±22.982）90.59±13.002）健脾化濁中劑量組77.17±1.762）2.29±0.232）91.33±21.862）83.27±10.362）健脾化濁高劑量組72.62±1.922）2.08±0.182）87.75±20.512）81.05±10.102）

3 討論

正氣不足是酒精性脂肪肝發(fā)病的重要內(nèi)因，脾失健運(yùn)、濕濁內(nèi)停、肝失條達(dá)是本病的主要病機(jī)，而氣虛則是其病理基礎(chǔ)，正氣虧虛尤其是脾氣虛衰在本病發(fā)生發(fā)展過程中有重要地位：一方面，脾氣虛，水濕不運(yùn)，脂膏不化，痰濁易生；另一方面，痰瘀交阻，肝氣郁結(jié)，日久必然有損脾胃。可以說，脾氣虧虛貫穿并影響了疾病的始終。因此在治療酒精性脂肪肝時(shí)必然要抓住健脾這一中心，配以疏肝、化痰等法，正盛則不受邪，亦可祛邪外出，最終疾病向愈。健脾化濁方由茯苓、豬苓、澤瀉、桂枝、生山楂、白術(shù)、虎杖、草決明組成，本方謹(jǐn)守脂肪肝的脾虛郁滯的病機(jī)之本，從脾論治，方中以茯苓和白術(shù)益氣健脾，桂枝溫化水飲，兼以通陽，澤瀉配伍茯苓、豬苓以加強(qiáng)利水，導(dǎo)濕下行，化痰消濁，也體現(xiàn)“見肝之病，當(dāng)先實(shí)脾”的法則；生山楂消積化食、化滯散瘀、化痰行氣，虎杖活血散痰、祛風(fēng)解毒、消炎止痛、去濕熱黃疸，本方在健脾和胃的同時(shí)，祛除積滯，解郁疏肝，從而做到祛邪不忘扶正，補(bǔ)虛不礙泄實(shí)，契合病機(jī)，用藥既顧及到醒脾保肝之功，又重點(diǎn)突出了消除積滯之效。

高脂血癥是脂肪肝形成的病理基礎(chǔ)，一方面，機(jī)體內(nèi)過多的游離性脂肪酸會(huì)直接損傷肝細(xì)胞；另一方面，堆積在肝臟內(nèi)的甘油三酯會(huì)導(dǎo)致肝血竇受到壓迫，逐漸缺血變性壞死；此外，高脂血癥還可通過脂質(zhì)過氧化而引起脂肪肝。因此，降低血脂、清除肝臟中堆積過多的脂肪也是治療脂肪肝的重要方法之一。本實(shí)驗(yàn)中觀察到：模型組大鼠血清TC、TG均出現(xiàn)顯著升高，這可能是造成模型組大鼠肝臟轉(zhuǎn)氨酶升高的原因之一，而健脾化濁各劑量組均能夠降低模型大鼠血清TC、TG水平，說明其具有調(diào)節(jié)酒精性脂肪肝大鼠血脂代謝異常的作用。ALT和AST是反映肝細(xì)胞損害的常用的酶學(xué)檢查指標(biāo)，是肝細(xì)胞損傷的敏感標(biāo)志，也是乙醇所致肝損傷最敏感的指標(biāo)，能直接反映肝細(xì)胞壞死的程度，其嚴(yán)重程度直接關(guān)系到酒精性肝病的發(fā)展轉(zhuǎn)歸與預(yù)后。酒精性脂肪肝引起AST升高比較明顯，正如本實(shí)驗(yàn)中所觀察到的一樣，模型組大鼠血清AST較ALT水平高，提示AST、ALT可能是鑒別酒精性脂肪肝與非酒精性脂肪肝的一項(xiàng)指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)中觀察到：健脾化濁低、中、高劑量組均能夠降低模型大鼠的AST及ALT水平，說明健脾化濁方能有效保護(hù)肝功能，減輕肝細(xì)胞變性、壞死及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，降低肝細(xì)胞膜的通透性，減少胞漿中過多的ALT、AST釋放入血。

綜上所述，健脾化濁方不僅能夠降低酒精性脂肪肝大鼠體質(zhì)量和肝重，還能調(diào)節(jié)模型大鼠血脂代謝，降低血清TC、TG水平，改善肝損傷，保護(hù)肝細(xì)胞，促進(jìn)肝細(xì)胞損傷修復(fù)，降低AST和ALT，維護(hù)肝功能正常，對(duì)酒精性脂肪肝具有治療作用。

［1］劉豐，趙喜穎.中醫(yī)藥治療酒精性脂肪肝的研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)臨床研究，2012，4（14）：119-120.

［2］梁衛(wèi)，梁濤，張麗玲，等.解酒消脂湯對(duì)酒精性脂肪肝保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2014（6）：534-536，549.

［3］楊蓮芳，石敏娟，高錦誠(chéng)，等.苦丁茶對(duì)酒精性脂肪肝模型大鼠脂質(zhì)代謝的影響［J］.中國(guó)藥業(yè)，2014（19）：30-32.

（編輯：翟春濤）

Effect of Jianpi Huazhuo decoction on blood lipid metabolism and liver function in experimental alcoholic fatty liver（AFLD）rats

Xi Julan1，Yang Miao1，Ma Hongxue2，Wu Qiuling1，Li Zhaoxuan1
（1.ShanxiCollege of TCM，Taiyuan Shanxi030024；2.Affiliate Hospital of Shanxi college of TCM，Taiyuan Shanxi030024）

Objective：To observe the effect of Jianpi Huazhuo decoction on blood lipid metabolism and liver function in experimental alcoholic fatty liver（AFLD）rats.Methods：To prepare themale SD rats into AFLD ratmodels by alcohol and fat emulsion，the rats were randomly divided into five groups：model group，biphenyl diester group，Jianpi Huazhuo low dose group（10 g/kg），JianpiHuazhuomedium dose group（20 g/kg）and JianpiHuazhuo high dose group（40 g/kg）.The rats in normal group and model group are given normal saline，other groups are intragastric administration with corresponding drugs for 30 days，compare body weight and liver weight among groups，and determine TC，TG，AST，ALT level of rats in the serum with automatic biochemical analyzer.Results：Compared with the normal group，body weight，liver weight，serum TC，TG，AST and ALT levels increased significantly of the rats in the model group（P＜0.01），indicating that the model building is successful；compared with the model group，high，medium and low dose group jianpi huazhuo recipe can significantly reduce the body weight，liverweight and serum TC，TG，AST，ALT level（P＜0.01）of AFLD rats.Conclusion：Jianpihuazhuo recipe can regulate the abnormal blood lipid metabolism and protect the liver function of AFLD rats.

alcoholic fatty liver；Jianpihuazhuo decoction；lipidmetabolism；liver function

R285

A

1671-0258（2016）06-0013-03

山西中醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)與臨床研究計(jì)劃（2011jc09）

席菊蘭，實(shí)驗(yàn)師，E-mail：1048374562@qq.com

李朝喧，副教授，E-mail：iamlizhaoxuan@163.com