針刺結合補陽還五湯對缺血性中風大鼠腦能量代謝的影響

陳秋帆，陳 穗（廣東省佛山市南海區羅村醫院康復科、急診科，廣東 佛山 528226）

論 著

針刺結合補陽還五湯對缺血性中風大鼠腦能量代謝的影響

陳秋帆，陳 穗
（廣東省佛山市南海區羅村醫院康復科、急診科，廣東 佛山 528226）

目的：研究針刺結合補陽還五湯對缺血性中風大鼠的腦能量代謝的影響。方法：120只健康的SD大鼠作為研究對象，隨機選擇8只為正常組，30天后8只為假手術組，其余按照四血管閉塞法造模分成模型組、湯劑組、針藥組及陽性藥組各26只。正常組、假手術組及模型組均給予生理鹽水，湯劑組用補陽還五湯，針藥組用針刺聯合補陽五湯劑，陽性藥組用腦心通，均干預4周。結果：針藥組、湯劑組及陽性藥組腦組織ATP、ADP含量，及TAN、EC值均高，AMP降低，和模型組、假手術組比較差異有統計學意義（P＜0.05），前3組比較差異無統計學意義（P＞0.05）。結論：針刺結合補陽還五湯對缺血性中風大鼠的腦能量代謝有良好的改善效用，能起到抗腦缺血損傷作用。

針刺；補陽還五湯；大鼠模型；缺血性中風；腦能量代謝

腦中風是基于腦內動脈血管硬化、狹窄、血栓脫落等導致腦組織血氧不足而壞死，并使相應區域神經功能出現障礙的病癥［1］。我們對大鼠進行模擬研究針刺結合補陽還五湯治療腦中風的效果，報道如下。

1 材 料

120只健康SD大鼠，均為雄性，SPF級別。大鼠平均體質量為（250±15）g。在實驗室進行適應性飼養1周，再隨機選定8只為正常組，過30天后選定8只為假手術組。其余104只大鼠均通Pulsinelli四血管閉塞法制作全腦缺血-再灌注模型，成功造模之后基于隨機分組分成模型組、湯劑組、針藥組及陽性藥組各26只。

2 方 法

2.1 儀器及試劑

研究儀器：洗板機（南京德鐵HBS-4009），酶標儀（北京普天光PT-3502A），分析天平（梅特勒-巧利多儀器公司ME104E型），超低溫冰箱（賽默飛世爾儀器公司702型），高速冷凍離心機智能生化培養箱（賽默飛世爾儀器公司Multifuge 11R型），勻漿機（德國IKA儀器公司D79219型），移液槍（上海佳安200μL、1000μL），手術器具包（上海通派生物科技）。

實驗試劑：大鼠三磷酸腺苷酶（ATP）ELISA試劑盒，大鼠二磷酸腺苷酶（ADP）ELISA試劑盒，大鼠磷酸腺苷酶（AMP）ELISA試劑盒（均為武漢新啟迪生物科技生產），乙醇（天津大茂化學藥劑生產廠），水合氯醛（天津科密歐試劑公司），磷酸二氫鈉（天津大茂化學藥劑生產廠），磷酸氫二鈉（天津科密歐試劑公司），頭抱拉定注射液（汕頭金石粉針劑有限公司），腦心通膠囊（陜西步長制藥有限公司），華佗牌30號0.5寸毫針1盒。

2.2 動物模型制備

用Pulsinelli四血管閉塞法制作全腦缺血-再灌注模型。①所有大鼠進入實驗室進行為期一周的適應性喂養，在造模前1天禁食；②造模進行時，應用調配好的10%水合氯醛安裝0.35mL/kg用量予以腹腔注射，在大鼠麻醉后，將施術部位毛發予以剃除；③使大鼠俯臥并固定在手術臺，將高頭部提高約2cm，應用2%碘酒、75%酒精進行有效消毒；④在枕骨后，第1頸椎水平正中線行一個長為1.5cm縱切口，使背闊肌、斜方肌得以充分暴露，應用無菌攝子把其往兩側予以純性分離，使第1頸椎橫突翼得以暴露，再找到左、右雙側橫突孔；⑤把已預熱好的電凝器緩緩置入雙側橫突孔內2次，首次停留5s，第2次停留3s，對雙側椎動脈有效燙凝，以構造永久性閉塞，在手術口滴1～2滴頭抱拉定注射液進行感染預防，再縫合后再應用酒精消毒；⑥把大鼠仰臥并固定于手術臺，進行消毒、備皮，在頸前正中部行一長度約為1cm縱切口，把氣管兩側肌肉予以鈍性分離，探查到頸總動脈，應用無菌鑷子把迷走神經予以有效分離，并置線標記，在手術口處滴1～2滴頭孢拉定注射液，縫合1針，予以消毒；第2天，把清醒大鼠置入干燥器內，應用適量乙醚予以麻醉待四肢雍軟之后迅速取出，并讓其仰臥固定在手術臺，進行消毒，把頸部切口開啟，找到之前置入的頸總動脈標記線，將頸總動脈提起，待清醒予以夾閉，以構成全腦缺血，15min后松開，恢復血液灌注，術后滴1～2滴頭孢拉定注射液，縫合，消毒；⑦造模結束后，對各組大鼠神經功能缺損進行評分，1～3分為成功、0分為失敗。

2.3 針刺穴位

選擇百會、水溝兩穴位，其中水溝穴在唇裂正中、鼻尖下端1mm部位、百會則在頂骨正中。

2.4 中藥湯劑

用補陽還五湯（黃芪120g，地龍、紅花、川芎、桃仁各3g，當歸尾、赤芍各5g），置入5000mL燒瓶內，注入2000mL清水后和回流冷凝裝置相連，加熱沸騰之后進行計時30min，趁熱將要藥液倒出，再往燒瓶注入2000mL清水，加熱到沸騰后計時30min，趁熱取液。最后將前后兩次藥液合并調整至所用濃度，冷卻密封保存。

2.5 干預方法

正常組、假手術組、模型組均按10mL/kg予0.9%生理鹽水。湯劑組按10mL/kg藥量給予濃度為1.496g/mL補陽還五湯湯劑。針藥組予和湯劑組相同用量的補陽還五湯并輔以針刺，百會穴30號0.5寸華佗牌毫針向前沿皮刺0.5～1.0cm，水溝穴用相同型號毫針自穴位處向鼻中隔方向斜刺0.2～0.3cm。左手持水溝、右手持百會針柄，以120次/min左右捻轉1min，留針30min，次期間每5min捻轉1次、每次捻轉lmin。陽性藥組給與濃度為0.050g/ mL腦心通膠囊水溶液10mL/kg。

2.6 取樣及樣本處理

每日1次，干預3周后禁食，第2天用水合氯醛予以麻醉，麻醉起效后快速斷頭取腦，并妥善置于低溫冰盒內，將腦膜、血管快速去除，應用手術刀片切取雙側大腦缺血皮質，應用錫紙包好，并快速置入干冰內速凍15min，再取出予以標記，置入-80℃冰箱內妥善保存，等待檢測。把保存的樣本取出，進行稱重，在0.01MPBS中洗1次同時按照1∶9比例注入生理鹽水，放置到冰水內予以勻漿。勻漿后，置入高速冷凍離心機內，5000rmp離心10min，選取上清液檢測。應用各自酶聯免疫試劑盒，采取酶聯免疫吸附法化測定各組樣本腦組織的ATP、ADP、AMP等含量。

2.7 統計處理

用SPSS20.0軟件進行統計學處理，計量數據用均數和標準差（±s）表示，用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結 果

各組腦組織液ATP、ADP含量比較見表1。

表1 各組腦組織液中ATP、ADP含量比較 （μmol/g，±s）

表1 各組腦組織液中ATP、ADP含量比較 （μmol/g，±s）

注：與正常組及假手術組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05。

組別　n　ATP　ADP正常組　8　8.02±0.34　4.72±0.54假手術組　8　7.97±0.31　4.65±0.32模型組　26　2.64±0.29*　1.32±0.31*湯劑組　26　4.88±0.52△　2.47±0.26△針藥組　26　5.87±0.37△　2.92±0.35△陽性藥組　26　5.22±0.43△　2.45±0.26△

各組腦組織液AMP、TAN及EC值比較見表2。

表1 各組腦組織液AMP、TAN及EC值比較 （μmol/g，±s）

表1 各組腦組織液AMP、TAN及EC值比較 （μmol/g，±s）

注：與正常組及假手術組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05。

組別　n　AMP　TAN　EC正常組　8　1.32±0.24　13.94±0.52　0.71±0.02假手術組　8　1.35±0.26　13.85±0.47　0.68±0.04模型組　26　4.67±0.41*　8.16±0.28*　0.35±0.04*湯劑組　26　3.38±0.52△　9.35±0.52△　0.47±0.01△針藥組　26　2.84±0.38△　9.97±0.37△　0.55±0.03△陽性藥組　26　3.52±0.44△　9.41±0.44△　0.48±0.02△

4 討 論

腦中風又分成缺血性中風和出血性中風［2］。研究發現，能量代謝障礙通常和腦缺血損傷存在密切關系。腦缺血導致能量代謝異常主要因腦缺血、能量被耗竭所致［3，4］。其中一些因素會導致神經細胞能量耗竭，另一些因素則能讓細胞存活，在一定積極干預下可完全恢復。實踐表明，針刺、中藥等均是有效干預手段，可減輕腦缺血損傷，改善能量代謝異常。

通過造模成功大鼠實施不同干預方法，干預后和模型組相比，針藥組、湯劑組、陽性藥組腦組織中的ATP、ADP、TAN及EC含量均得到顯著提升，并可使AMP的含量降低。而湯劑組、針藥組、陽性藥間無明顯差異，針藥組略高于兩者?？芍鞲深A方法均在一定程度上可改善大鼠腦組織中腺苷酸系統代謝水平，主要表現為ATP、ADP、AMP含量上變化，以及TAN、EC值的調節效用。

［1］ 武削，黃偉青，文銳玲，等.改良二血管阻斷加低血巧法制作大鼠全腦缺血再灌注模型［J］.中國現代藥物應用，2012，6（17）：4-5.

［2］ 劉亞明，郭繼龍，劉必巧，等.中藥地龍的活性成分及藥理作用研究進展［J］.山西中醫，2011，27 （3）：44-45.

［3］ 邱勇波，劉錦，武飛.黃芪化學成分及藥理作用研究進展［J］.中國療養醫學，2011，20（5）：435-436.

［4］ 張義，任玉蘭，王興麗，等.現代針灸治療中風偏疲選穴處方規律研究［J］.遼寧中醫藥大學學報，2012，14（9）；61-64.

［Abstract］Objective：To study the effect of acupuncture combined with Buyang Huanwu Decoction on brain energy metabolism of ischemic stroke rats. Method： 120 healthy SD rats were taken as the study object. 8 rats were selected as the normal group and 8 rats were selected as the sham operation group randomly. The rest rats were divided into the model group，decoction group， combination of acupuncture and Chinese herbs group and positive medicine group after models established by the four vessel occlusion method， with 26 rats in each group. The normal group， the sham operation group and the model group were given normal saline. The decoction group were given Buyang Huanwu Decoction. Combination of acupuncture and Chinese herbs group were treated with acupuncture combined with Buyang Huanwu Decoction. The positive medicine group were treated with Naoxintong. All the group were treated for 4 weeks. Result： The content of ATP and ADP， the value of TAN and EC increased and AMP decreased in combination of acupuncture and Chinese herbs group， decoction group and positive medicine group. There was statistical significance compared with that of the model group and the sham operation group （P＜0.05）. There was no statistical significance among the former three groups（P＞0.05）. Conclusion： Acupuncture combined with Buyang Huanwu Decoction has good improvement effect on brain energy metabolism of ischemic stroke rats，with anti cerebral ischemic injury effect.

Acupuncture；Buyang Huanwu Decoction；Rat model；Ischemic stroke；Brain energy metabolism

R246.633 ［文獻標識碼］B

1004-2814（2016）07-0639-02

2014年佛山市醫學類科技公關項目（2014AB000562）

2016-04-13