膚美達醫用膠原充填劑對大鼠慢性毒性的試驗研究

李會影 劉建璇 毋英杰（吉林省中醫藥科學院，吉林 長春 130012）

膚美達醫用膠原充填劑對大鼠慢性毒性的試驗研究

李會影 劉建璇 毋英杰
（吉林省中醫藥科學院，吉林 長春 130012）

目的 考察膚美達醫用膠原充填劑對大鼠的慢性毒性。方法 選取健康Wistar大鼠120只，一次給予膚美達醫用膠原充填劑樣品，觀察期為3個月，觀察期結束后，進行各組動物的血液學和血清生化指標測定及病理組織學檢查。結果 經過3個月觀察，各組動物活動、毛色、行為、進食量、體質量、尿、便均無明顯異常情況，血液學和血清生化指標皆在正常范圍內，各組未見臟器組織有明顯器質性異常改變。結論 膚美達醫用膠原充填劑，在350、175、87.5 mg/kg劑量下對大鼠無慢性毒性作用。

膚美達醫用膠原充填劑；大鼠；慢性毒性

膚美達醫用膠原充填劑是長春博泰醫藥生物技術有限責任公司利用酶消化和層析分離法制備的高純度可溶性醫用膠原產品，在歐美發達國家，膠原蛋白在臨床及美容領域得到了廣泛的應用，而在我國，膠原的研究才剛剛起步。為了保證該產品面向臨床的安全性，我們對膚美達醫用膠原充填劑進行了生物安全性評價，現將其對于大鼠的慢性毒性研究資料分析如下。

1　資料與方法

1.1受試樣品：膚美達醫用膠原充填劑（JYTC），性狀：乳白色膠狀液，劑型：注射劑樣品 批號：040301規格：35 mg/mL（膠原蛋白含量），1 mL/支，溶劑：用磷酸緩沖鹽（PBS）配成的0.3%利多卡因；保存條件：2～8 ℃冷藏保存；本品為無菌產品，使用時應無菌操作。本項試驗所用膚美達醫用膠原充填劑的樣品編號為040301（38-82）號，由長春博泰醫藥生物技術有限責任公司提供。

1.2動物：健康Wistar大鼠，體質量70～90 g，雌雄各半，動物數120只，由長春高新醫學動物實驗研究中心提供。動物合格證號：SCXK-（吉）2003-0004。

1.3儀器：CS-600B全自動生化分析儀（長春迪瑞實業有限公司）；PE-6800VET全自動血細胞分析儀（深圳市普康電子有限公司）；FB-40半自動血液凝固分析儀（山西亞森實業有限公司）；生物組織脫水機（湖北ZT-14V2）。

1.4方法：取健康Wistar大鼠120只，雌雄各半，隨機分為4組，每組動物30只，1、2、3組為膚美達醫用膠原充填劑高、中、低劑量組，劑量分別為350、175、87.5 mg/kg，第4組為對照組（按給樣品高劑量容積）給同體積相應溶媒（磷酸緩沖鹽溶液+0.3%利多卡因）。均選用皮下注射給樣品途徑。實驗前，動物檢疫1周后，每組動物背部同側同部位脫毛，在脫毛處中間點一次性皮下注射給予膚美達醫用膠原充填劑（35 mg/mL濃度）。依據膚美達醫用膠原充填劑在國外文獻中為一次性給予樣品，故試驗選定一次給予該樣品，觀察期為3個月。觀察期結束后，腹主動脈取血進行血液學和血清生化指標測定，采血后頸椎脫臼處死動物作大體解剖觀察，并剖取部分臟器組織進行相應的病理組織學檢查。

1.5統計學處理：采用SPSS 17.0軟件統計分析。數據以表示，組間計量資料差異性，按t檢驗方法進行分析處理，P＜0.05具有統計學差異。

2　結 果

2.1膚美達醫用膠原充填劑對大鼠行為活動和體質量變化的影響：經過3個月的給樣品與觀察，各組大鼠狀態良好，活動自如，皮毛光亮，進食、進水、排便均正常，無任何異常反應，給樣品期間動物無一死亡。給樣品組與對照組的大鼠體質量增長均勻，各組間無顯著性差異，說明該樣品對大鼠體質量無明顯影響。

2.2膚美達醫用膠原充填劑對大鼠血常規的影響：表1結果表明，給樣品的350、175、87.5 mg/kg劑量組和對照組各項指標無顯著性差異，皆在正常范圍內，各項指標無顯著性差異，說明給予該樣品3個月，均未對大鼠血常規產生不良影響。

表1　膚美達醫用膠原充填劑對大鼠對血液學指標的影響

表1　膚美達醫用膠原充填劑對大鼠對血液學指標的影響

注：與對照組比較P＞0.05

PLT組別與劑量（mg/kg）動物數（只）RBC （1012/L）WBC （109/L）　Hb（g/L）　（χ109/L）　G（%）　L（%）　M（%）　MCHC（g/L）MCH（pg） MCV（fL）　HCT（%）　PDW（%）　PT（s）JYTC350　10　7.4±0.63 10.6±1.73 151.5±11.36 586±71.68 21.0±2.86 70.2±4.09 8.96±1.97 323.5±17.58 24.45±1.98 84.59±10.65 48.42±3.66 16.20±0.50 9.83±0.37 JYTC175　10　7.1±0.52 9.87±1.38 161.9±10.46 619±86.49 19.0±4.65 71.7±5.41 9.26±2.00 337.4±16.97 23.80±4.33 85.86±6.12 47.56±3.30 15.97±0.37 9.60±0.69 JYTC87.5　10　7.2±0.54 10.6±1.42 158.2±9.90 639±98.61 19.7±2.78 70.7±2.25 9.66±2.05 329.6±47.31 24.57±3.61 87.56±3.47 49.61±7.14 16.27±0.60 9.69±0.51對照　10　7.1±0.60 9.70±0.92 154.3±11.08 589±77.12 18.8±3.79 71.7±2.82 9.45±1.41 343.5±35.17 26.20±2.50 86.05±4.76 49.67±8.92 16.30±0.82 9.74±0.57

表2　膚美達醫用膠原充填劑對大鼠血液生化指標的影響

表2　膚美達醫用膠原充填劑對大鼠血液生化指標的影響

注：與對照組比較P＞0.05

組別與劑量（mg/kg） 動物數（只）　GLU （mmol/L）　TP（g/L）　ALT（U/L）　CRE （μmol/L）UREA （mmol/L）T-CHO （mmol/L）　ALB（g/L）　TBIL （μmol/L）　AST（U/L）　AL P（U/L）JYTC350　10　7.95±1.04　57.71±2.18　46.2±10.24　66.1±5.62　8.63±1.10　1.38±0.23　23.75±2.30　6.1±0.36　136.3±7.56　338.8±51.16 JYTC175　10　7.66±0.85　59.14±2.53　43.9±9.45　68.7±4.42　8.41±1.35　1.29±0.23　24.08±1.94　6.3±0.33　145.1±20.14　363.9±67.54 JYTC87.5　10　8.15±1.11　58.33±3.33　46.3±7.62　65.7±2.72　7.72±1.26　1.40±0.33　23.84±1.73　6.1±0.26　144.6±17.88　324.9±63.36對照　10　7.95±1.23　57.90±2.61　46.6±9.41　65.0±4.28　8.53±1.01　1.21±0.24　23.25±2.97　6.0±0.42　132.0±10.29　364.2±63.71

2.3膚美達醫用膠原充填劑對大鼠血生化指標的影響：表2的結果表明，給樣品3個月，試驗各組的大鼠各項指標均在正常范圍內，各給樣品組與對照組比較各項指標沒有顯著性差異；說明該樣品長期在動物體內未對大鼠血生化指標產生變化。亦表明該樣品長期應用不會給肝、腎功能等造成不可逆影響。

2.4膚美達醫用膠原充填劑對大鼠病理學檢查結果的影響：病理檢查結果表明，膚美達醫用膠原充填劑給予大鼠3個月后，對胃、十二指腸、回腸、結腸、垂體、延髓、胸骨、淋巴、膀胱、胰腺、視神經、甲狀腺，肌肉，皮下組織等臟器做病理組織學切片檢查，各組未見臟器組織有明顯器質性異常改變。

3　討 論

膚美達醫用膠原充填劑高、中、低三種不同劑量350、175、87.5 mg/kg，經大鼠背部皮下注射給樣品1次，連續觀察3個月，外觀一般狀況檢查，各組動物活動、毛色、行為、進食量、體質量、尿、便均無明顯異常情況；并對恢復期結束動物的血液學常規指標、血液生化指標的測定，給樣品組與對照組比較P均＞0.05；各組動物未見臟器組織有明顯器質性異常改變［1-2］。綜上所述，膚美達醫用膠原充填劑，1次性給予大鼠背部皮下注射高、中、低三種不同劑量與對照組比較，經外觀檢查、進食、進水、體質量、血常規、血液生化、病理組織學檢查等項指標無影響和異常改變，均屬于正常范圍內。故膚美達醫用膠原充填劑，在350、175、87.5 mg/kg劑量下對大鼠無慢性毒性作用［3］。

［1］ 《中華人民共和國國家標準》醫用有機硅材料生物學評價試驗方法［S］.GB/T 16175-1996.

［2］ 徐叔云.藥理實驗方法學［M］.北京：人民衛生出版社，1982：181.

［3］ 藥物重復給藥毒性研究技術指導原則［S］.2014.

1671-8194（2016）21-0031-02

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