HPV L1及P16蛋白在診斷宮頸鱗狀上皮病變的應(yīng)用及價值

黃建偉，田學(xué)智，張王娜，馮陽陽，葉 婷，魏素嬌

HPV L1及P16蛋白在診斷宮頸鱗狀上皮病變的應(yīng)用及價值

黃建偉，田學(xué)智，張王娜，馮陽陽，葉 婷，魏素嬌

目的 探討人乳頭狀瘤病毒(HPV)主要衣殼蛋白L1(HPVL1)及P16蛋白的表達(dá)在宮頸鱗狀上皮病變中的診斷及應(yīng)用價值。方法 選取本院2015年1月至2015年10月HPV檢測高危陽性的215名患者的常規(guī)病理切片，其中慢性宮頸炎101例，宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ級60例，CINⅡ級27例，CINⅢ級21例，鱗狀細(xì)胞癌(SCC) 6例，運用免疫組織化學(xué)染色檢測各組活檢標(biāo)本中HPV L1、P16的表達(dá)，并對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果 HPVL1蛋白在宮頸炎標(biāo)本表達(dá)率為66.33%(67/101)，CINⅠ表達(dá)率為71.67%(43/60)，CINⅡ表達(dá)率為25.92%(7/27)，CINⅢ表達(dá)率為9.52%(2/21)，SCC表達(dá)率為0%(0/6)；P16蛋白在宮頸炎標(biāo)本表達(dá)率為69.31%(70/101)，CINⅠ表達(dá)率為58.33%(35/60)，CINⅡ表達(dá)率為85.19%(23/27)，CINⅢ表達(dá)率為95.24%(20/21)，SCC表達(dá)率為100%(6/6)；HPVL1蛋白表達(dá)率在宮頸上皮病變中(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC)隨著宮頸上皮病理分級升高而下降(P<0.05)，但炎癥中的表達(dá)率與CINⅠ中的表達(dá)率無明顯差異(P>0.05)；相反，P16蛋白表達(dá)率在宮頸上皮病變中隨病理分級升高而升高，二者的表達(dá)成負(fù)相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 對于宮頸篩查HPV陽性的患者，聯(lián)合檢測HPVL1蛋白和P16蛋白的表達(dá)，有一定的診斷價值。

人乳頭狀瘤病毒；免疫組化；宮頸上皮病變

宮頸癌(squamous cervical carcinoma,SCC)是威脅女性健康的一種惡性腫瘤。近年來，宮頸癌的發(fā)病率逐年提高，發(fā)病年齡逐漸年輕化。目前認(rèn)為宮頸癌的主要致病原因為人乳頭瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染引起[1]，經(jīng)過宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級最終發(fā)展為宮頸癌。從HPV感染到最終發(fā)展為宮頸癌的較長時期內(nèi)，HPV的主要衣殼蛋白L1及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子P16的表達(dá)與宮頸上皮病變的轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)[2]。本研究探討人乳頭狀瘤病毒(HPV)主要衣殼蛋白L1及P16蛋白的表達(dá)在宮頸鱗狀上皮病變中的表達(dá)及其對宮頸癌診斷的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015年1月至2015年10月宮頸脫落細(xì)胞學(xué)HPV病毒檢測高危陽性且經(jīng)過活檢進(jìn)一步確診的215例患者作為研究對象，年齡22～55歲，其中活檢組織病理學(xué)診斷為慢性宮頸炎101例，CINⅠ60例，CINⅡ27例，CINⅢ21例，SCC 6例。

1.2 研究方法 將215例HPV篩查高危陽性患者的石蠟包埋組織做厚度為4 μm連續(xù)切片，用免疫組織化學(xué)染色方法檢測HPVL1和P16的表達(dá)。主要試劑：賽泰細(xì)胞/組織HPVL1檢測試劑盒(艾迪旺斯醫(yī)療科技有限公司，美國)，P16單克隆抗體試劑盒(福州邁新生物科技公司，中國)；德國羅氏全自動免疫組化染色機。所有免疫組化步驟按試劑盒質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 18.0分析軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以構(gòu)成比(%)表示，組間比較采用χ2檢驗，并進(jìn)行相關(guān)性分析來檢測兩者之間是否具有相關(guān)性，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPVL1蛋白的表達(dá) HPVL1蛋白陽性褐色信號定位于細(xì)胞核。在炎癥組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組的陽性率分別為66.33%、71.67%、25.92%、9.52%、0%，隨著宮頸鱗狀上皮病變程度的增加，HPVL1陽性率下降，鱗狀細(xì)胞癌組不表達(dá)，炎癥組與CINⅡ組、CINⅢ組和鱗狀細(xì)胞癌組各組陽性率比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而炎癥組與CINⅠ組的陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 P16因子的表達(dá) P16蛋白陽性褐色信號定位于細(xì)胞核。炎癥組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組、SCC組陽性率分別為69.31%、58.33%、85.19%、95.24%、100%。隨著宮頸上皮病變程度的增加，P16陽性率增加。炎癥組與CINⅡ組、CINⅢ組和鱗狀細(xì)胞癌組各組陽性率差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而炎癥組與CINⅠ組的陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.3 HPVL1與P16聯(lián)合表達(dá)情況 HPVL1和P16在宮頸鱗狀上皮病變中的表達(dá)存在如下4種情況：HPVL1+/P16+、HPVL1+/P16-、HPVL1-/P16+和HPVL1-/P16-，綜合以上4種情況的表達(dá)，P16-/HPVL1+的情況主要出現(xiàn)在炎癥和CINⅠ級，與其他各組均有差異(P<0.05)；P16-/HPVL1-的表達(dá)情況在所有組間無明顯差別(P>0.05)；P16+/HPVL1-在炎癥組和CINⅠ組中顯著高于其他組(P<0.05)，P16+/HPVL1+在CINⅡ、CINⅢ、SCC組顯著高于炎癥組和CINⅠ組(P<0.05)。說明當(dāng)HPVL1陽性時，患者病情較輕，或者僅位于宮頸癌變早期，當(dāng)P16陽性時，患者病情較重，已位于宮頸病變晚期，HPVL1和P16 之間為負(fù)相關(guān)關(guān)系(P<0.05)，見表1。

表1 HPV L1、P16聯(lián)合表達(dá)結(jié)果(n=215) 例(%)

注：HPV：人乳頭癌病毒；CIN:宮頸上皮內(nèi)瘤變；SCC：宮頸癌。

3 討論

宮頸癌是發(fā)生在女性生殖道的惡性腫瘤之一，而HPV感染是其最主要的致病因素之一。從HPV感染到發(fā)生宮頸癌變將經(jīng)歷較長的時期。有研究表明，在這個時期內(nèi)如果進(jìn)行規(guī)范治療，對于一些可逆的病變，如CINⅠ級、CINⅡ級，治愈率可達(dá)到98%，否則小部分CINⅡ級和CINⅢ級的患者可能發(fā)展成宮頸癌。因此，早期進(jìn)行科學(xué)規(guī)范的臨床干預(yù)對宮頸癌的轉(zhuǎn)歸有極其重要的意義。

HPV病毒是20面體立體結(jié)構(gòu)，呈球形，無包膜，病毒基因組是雙鏈環(huán)狀DNA，包含3個功能區(qū)：早期轉(zhuǎn)錄區(qū)、晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)和非轉(zhuǎn)錄區(qū)(控制區(qū))。其中，晚期轉(zhuǎn)錄區(qū)又稱為L區(qū)，編碼兩個衣殼蛋白即主要衣殼蛋白L1和次要衣殼蛋白L2，共同組成病毒的衣殼，保護(hù)病毒DNA結(jié)構(gòu)不受核酸酶的破壞，并與病毒的侵襲和增殖有關(guān)[3]。L1蛋白高度保守，是最主要的特異性抗原，在病毒感染宮頸上皮細(xì)胞過程中，L1蛋白首先與靶細(xì)胞的膜受體結(jié)合，并與L2蛋白協(xié)同將病毒DNA轉(zhuǎn)運至胞質(zhì)和胞核內(nèi)。免疫力正常時病毒DNA處于游離狀態(tài)，在機體免疫力下降時，病毒顆粒就會整合到宿主細(xì)胞的DNA中。在病毒DNA整合到宿主細(xì)胞核染色體后L1蛋白逐漸消失，而宮頸上皮不典型增生將進(jìn)入發(fā)展階段。因此，HPVL1蛋白的表達(dá)水平反映了病毒的感染狀態(tài)，本研究結(jié)果中顯示，隨著CIN等級的升高，HPVL1的陽性率逐漸降低，CINⅡ、CINⅢ和SCC組中HPVL1陽性表達(dá)率顯著低于炎癥組和CINⅠ組(P<0.05)。

P16是抑癌基因1NK4a編碼的抑癌蛋白，P16通過抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白(retinoblastoma protein，pRb)的磷酸化，阻斷細(xì)胞增殖周期G1期向S期轉(zhuǎn)化，抑制細(xì)胞增殖。本研究顯示P16蛋白陽性表達(dá)隨宮頸上皮病變程度的增加而逐漸升高。而P16在肺癌、乳腺癌、膀胱癌等惡性腫瘤中的表達(dá)則相反。因為在細(xì)胞增殖周期級聯(lián)調(diào)節(jié)機制中， pRb負(fù)反饋調(diào)節(jié)P16蛋白的表達(dá)，在高危型HPV感染的宮頸上皮中，HPV DNA早期轉(zhuǎn)錄區(qū)表達(dá)蛋白E7結(jié)合pRb，使其失活，喪失了對P16-1NK4a基因的負(fù)反饋抑制[4]，造成P16的過表達(dá)。

本研究顯示HPVL1和P16-聯(lián)合表達(dá)對判斷宮頸病變等級及生物學(xué)行為具有一定臨床意義。P16-/HPVL1+的情況主要出現(xiàn)在炎癥和CINⅠ級，與其他各組有差異(P<0.05)；P16+/HPVL1-在炎癥組和CINⅠ組中顯著高于其他組(P<0.05)，P16+/HPVL1+在CINⅡ、CINⅢ、SCC組顯著高于炎癥組和CINⅠ組(P<0.05)。因此，認(rèn)為P16-/HPVL1-和P16-/HPVL1+屬于病變程度較輕，不易進(jìn)展，可以定期隨訪；對于P16+/HPVL1-和P16+/HPVL1+則認(rèn)為病變程度比較重，說明病毒DNA已經(jīng)整合到宿主DNA中，應(yīng)當(dāng)予以治療，否則將發(fā)展成SCC。綜上，對于HPV篩查高危陽性的患者，聯(lián)合檢測HPVL1蛋白和P16蛋白的表達(dá)，有一定的診斷價值。

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Value of Diagnosis Cervical Squamous Epithelial Lesions with HPV L1 and P16 Protein

HUANG Jian-wei, TIAN Xue-zhi, ZHANG Wang-na, FENG yang-yang, YE Ting, WEI Su-jiao

(Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University,Luoyang 471000,China)

ObjectiveTo investigate the expression of major capsid protein L1 and P16 protein in the human papilloma virus (HPV), and determine its value in the diagnosis and application of cervical squamous epithelial lesions.Methods215 cases of high risk with HPV positive expression were collected from Luoyang Central Hospital，whicht including 101 cases of chronic cervicitis, 60 cases of CIN grade Ⅰ, 27 cases of CIN grade Ⅱ, 21 cases of CIN grade Ⅲ and 6 cases of squamous cell carcinoma (SCC). Immunohistochemical staining was used to detect the expression of HPV L1 and P16 protein of all cases.ResultsThe expression rate of HPVL1 protein in cervicitis, CIN Ⅰ, CIN Ⅱ, CIN Ⅲ and SCC were 66.33%(67/101), 71.67%(43/60), 25.92%(7/27), 9.52%(2/21) and 0%(0/6), respectively. The expression rate of P16 protein in cervicitis, CIN Ⅰ, CIN Ⅱ, CIN Ⅲ and SCC were 69.31%(70/101), 58.33%(35/60), 85.19%(23/27), 95.24%(20/21) and 100%(6/6) , respectively. The rate of expression of HPVL1 protein in cervical intraepithelial lesions (CIN Ⅰ and CIN Ⅱ, CIN Ⅲ, SCC) decreased with the increasing of pathological grade of cervical epithelium (P<0.05), but there was no significant difference between cervicitis and CIN I (P>0.05). On the contrary, the expression rate of P16 in cervical intraepithelial lesions increased with the increasing of pathological grade. It was a negative correlation between the expression of the two proteins (P<0.05).ConclusionCombined detection of HPV L1 and P16 protein had a certain diagnostic value in cervical disease screening with HPV positive patients.

human papilloma virus; immunohistochemistry; cervical intraepithelial neoplasia

1672-688X(2016)04-0259-03

10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.04.

2016-09-08

鄭州大學(xué)附屬洛陽市中心醫(yī)院病理科，河南洛陽 471000

黃建偉(1980-)，男，河南商丘人，主治醫(yī)師，從事病理診斷工作。

R711.74；R373

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