免疫組化技術(shù)在病理診斷中的應(yīng)用

楊勇（貴州省都勻市黔南州人民醫(yī)院，貴州都勻558000）

免疫組化技術(shù)在病理診斷中的應(yīng)用

楊勇
（貴州省都勻市黔南州人民醫(yī)院，貴州都勻558000）

目的探討免疫組化技術(shù)在疾病檢測和診斷中的應(yīng)用。方法選取2013年7月至2014年9月間我院收治的發(fā)生胸腔積液患者，共計(jì)74例。患者入院后據(jù)給予對癥治療的同時(shí)，采用病理石蠟切片免疫組化技術(shù)進(jìn)行診斷檢測，對比各自臨床效果。結(jié)果轉(zhuǎn)移性癌和漿膜腔原發(fā)性間皮性腫瘤。本次研究結(jié)果如表1所示。檢測成功例數(shù)72例，成功率為97.3%。其中轉(zhuǎn)移性癌癥患者47例，原發(fā)性癌癥患者25例，2例患者檢測失敗，待進(jìn)一步進(jìn)行診斷。對比兩種癌癥比例發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)對于轉(zhuǎn)移性癌檢測效果更好，差異具有顯著性，P＜0.01。結(jié)論本次研究探討免疫組化在疾病研究中的應(yīng)用，有效提升臨床檢測和診斷情況，為臨床的治療提供了理論參考，值得臨床廣泛推廣和應(yīng)用。

病理石蠟切片；免疫組化；胸腔積液；臨床效果

自上世紀(jì)80年代初，免疫組化技術(shù)作為一種較為高效的鑒別技術(shù)，在各類疾病診斷中已廣泛應(yīng)用，隨著各項(xiàng)技術(shù)的不斷發(fā)展和成熟，目前免疫組化技術(shù)在疾病病理診斷中的應(yīng)用也愈發(fā)廣泛［1］。本次研究針對我院收治的胸腔積液患者，為區(qū)別轉(zhuǎn)移性癌和漿膜腔原發(fā)性間皮性腫瘤，采用病理石蠟切片免疫組化方法進(jìn)行診斷，說明臨床應(yīng)用效果，對免疫組化在疾病病理的診斷和臨床治療中的作用進(jìn)行比較和分析。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2013年7月至2014年9月間我院收治的發(fā)生胸腔積液患者，共計(jì)74例。其中男性患者42例，女性患者32例，年齡范圍為16～70歲，平均年齡為（39.0±7.1）歲；病程范圍為6個(gè)月至7年，平均病程為（4.0±2.2）年；上述患者入院后據(jù)給予對癥治療的同時(shí)，采用病理石蠟切片免疫組化技術(shù)進(jìn)行診斷檢測，對比各自臨床效果。本次研究選取患者在性別、年齡、病程、受教育程度、遺傳病史等方面均無顯著性差異，P＞0.05，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本次研究所有患者均符合臨床關(guān)于胸腔積液相關(guān)診斷要求和標(biāo)準(zhǔn)，符合本次研究需要［2］；排除患有心臟、肝、腎臟等重要臟器嚴(yán)重疾病患者；所有患者均實(shí)施住院治療，主要臨床癥狀包括胸悶氣短、咳嗽濃痰等；所有患者均已與我院簽署研究內(nèi)容知情同意書，表示自愿參與并堅(jiān)持完成；研究內(nèi)容均通過倫理委員會審核。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集醫(yī)護(hù)人員于患者入院后第二天，活檢取肺部組織進(jìn)行，完成標(biāo)本采集后采用10%緩沖甲醛溶液進(jìn)行固定，采用石蠟包埋法進(jìn)行再固定后切片，取切片進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，準(zhǔn)備進(jìn)行免疫組化檢測。收集患者新鮮胸腔積液100ml，分裝至4個(gè)試管中進(jìn)行離心處理，轉(zhuǎn)速為2500r/min，離心時(shí)間不超過15min，完成離心后采用移液槍移除上清液，取沉淀物進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞涂片檢查。合并余下沉淀，加入2.5ml戊二醛進(jìn)行固定處理，依照上述條件進(jìn)行離心，去除上清液后用濾紙包裹，常規(guī)脫水處理，用是啦包埋切片，采用HE染色處理

1．2．2免疫組化技術(shù)嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作，主要步驟如下①取組織切片去石蠟，同時(shí)進(jìn)行水化，采用PBS緩沖液進(jìn)行洗滌，時(shí)間不超過5min，重復(fù)洗滌3次。②采用3%的過氧化氫作為阻斷劑進(jìn)行室溫下孵育，時(shí)間為15min，重復(fù)上述過程3次。③上述組織加入動物血清阻斷劑50μl，室溫下孵育5min后去血清。④以CEA、CK7、WT-1、CR抗體（均購于自基因公司）作為抗體進(jìn)行后續(xù)孵育，以DAB顯色液為顯色條件，染色過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3觀察標(biāo)準(zhǔn)

患者樣本進(jìn)行免疫組化后，CK7及CEA在組織部位染色后出現(xiàn)棕黃色時(shí)即為陽性；Calretinin、WT-1在細(xì)胞間隙出現(xiàn)棕色即為陽性。間皮細(xì)胞或腺癌細(xì)胞達(dá)10%以上細(xì)胞陽性診斷為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究中所有數(shù)據(jù)均采用Excel2010版進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和歸類，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS19.0進(jìn)行處理，差異具有顯著性以P＜0.01為標(biāo)準(zhǔn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義以P＜0.05為標(biāo)準(zhǔn)。

2　結(jié)　果

本次研究結(jié)果均由同一經(jīng)驗(yàn)豐富的臨床操作人員進(jìn)行評估。轉(zhuǎn)移性癌和漿膜腔原發(fā)性間皮性腫瘤。本次研究結(jié)果如表1所示。檢測成功例數(shù)72例，成功率為97.3%。其中轉(zhuǎn)移性癌癥患者47例，原發(fā)性癌癥患者25例，2例患者檢測失敗，待進(jìn)一步進(jìn)行診斷。對比兩種癌癥比例發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)對于轉(zhuǎn)移性癌檢測效果更好，差異具有顯著性，P＜0.01。

各組陽性分析結(jié)果如表1中所示。細(xì)胞學(xué)涂片實(shí)驗(yàn)后，檢測陽性例數(shù)為27例，陽性率為57.4%，細(xì)胞涂片結(jié)合免疫組化技術(shù)檢測陽性率為100%，即25例患者均為陽性。對比兩組差異發(fā)現(xiàn)具有顯著性，即P＜0.05，原發(fā)性癌組優(yōu)于轉(zhuǎn)移性組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　兩組患者陽性率比較

3　討論

胸腔積液作為臨床常見并發(fā)癥，多見于胸部腫瘤病癥患者，患者發(fā)生腫瘤并積液后，使間皮細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞均浸泡于胸腔積液中，長期受到該類物質(zhì)刺激后，導(dǎo)致間皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞均發(fā)生形態(tài)學(xué)變化，導(dǎo)致各類疾病在常規(guī)條件下區(qū)分較難［3］。傳統(tǒng)條件下采用細(xì)胞學(xué)涂片，該技術(shù)應(yīng)用范圍較廣，操作易于掌握，在實(shí)驗(yàn)過程中能穩(wěn)定細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)，然而敏感度較低以及準(zhǔn)確性等問題一直制約該技術(shù)的應(yīng)用，尤其是對惡性胸腔積液的患者，診斷準(zhǔn)確率僅為75%左右。

本次研究在傳統(tǒng)技術(shù)上，結(jié)合本次研究摒棄傳統(tǒng)細(xì)胞涂片技術(shù)，采用免疫組化染色方法，針對性選擇特異性抗體對患者肺部組織的抗原進(jìn)行檢測，通過酶活性產(chǎn)生的顯色反應(yīng)顯示了細(xì)胞組織的形態(tài)的結(jié)構(gòu)，疾病部位的定位分布和相關(guān)特點(diǎn)。方法檢測，原理清晰，易于操作和掌握，陽性物質(zhì)定位準(zhǔn)確，特異性較強(qiáng)。同時(shí)在實(shí)驗(yàn)過程中結(jié)構(gòu)標(biāo)本保存良好，利于更多檢查進(jìn)行。

本次研究結(jié)果如表1中所示。原發(fā)性癌檢出例數(shù)為25例，這與相關(guān)報(bào)道中臨床常規(guī)方法報(bào)道相符，說明了該方案的有效性以及局限性，亦說明胸腔積液的發(fā)病多與轉(zhuǎn)移性癌癥有關(guān)［4］，可能與研究內(nèi)容和選擇樣本特異性有關(guān)。對比兩種癌癥比例發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)對于轉(zhuǎn)移性癌檢測效果更好，差異具有顯著性，P＜0.01。

綜上所述，本次研究探討免疫組化在疾病研究中的應(yīng)用，有效提升臨床檢測和診斷情況，為臨床的治療提供了理論參考，值得臨床廣泛推廣和應(yīng)用。

［1］ 盛偉琪.胃腸胰神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤病理診斷的規(guī)范和進(jìn)展［J］.中國癌癥雜志,2013,7（6）:401-407.

［2］ 張玉萍,王魯平.免疫組化標(biāo)記物在肝細(xì)胞肝癌病理診斷中的作用及進(jìn)展［J］.診斷病理學(xué)雜志,2012,19（2）:148-151.

［3］ 韓安家,閻曉初,王堅(jiān)等.軟組織腫瘤病理診斷免疫組化指標(biāo)選擇專家共識 （2015）［J］.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2015,31（11）: 1201-1204.

［4］ 謝剛,原慶會,柯琦等.免疫組化在老年胸腔積液細(xì)胞塊病理診斷中的應(yīng)用［J］.四川醫(yī)學(xué),2015,10（7）:935-937.

Clinical value of immunohistochemistry in pathological diagnosis

YANG Yong
（The People's Hospital of Qiannan Prefecture，Duyun 558000，China）

ObjectiveTo investigate the clinical value of immunohistochemistry in disease detection and diagnosis.MethodsA total of 74 patients with pleural effusion who were admitted to our hospital from July 2013 to September 2014 were enrolled.Besides symptomatic treatment after admission，immunohistochemistry with pathological paraffin section was performed for detection and diagnosis.The patients'clinical outcome was compared.ResultsThe patients had metastatic carcinoma or primary mesothelial tumors in the serous cavity.The results were shown in Table 1. A total of 72 patients underwent a successful detection，yielding a success rate of 97.3%.Of all patients，47 had metastatic carcinoma，25 had primary cancer，and 2 underwent a failed detection and awaited further diagnosis.The comparison of these two types of tumors showed that immunohistochemistry had a significantly better effect in the detection of metastatic carcinoma（P＜0.01）.ConclusionIn disease studies，immunohistochemistry can effectively improve clinical detection and diagnosis and provides a theoretical basis for clinical treatment，and therefore，it holds promise for wide clinical application.

Pathological paraffin section；Immunohistochemistry；Pleural effusion；Clinical effect

楊勇，1981年生，男，苗族，貴州貴定人，本科學(xué)歷，主治醫(yī)師，主要從事臨床病理診斷方面的工作。