桃葉珊瑚苷通過ERβ途徑抑制TNF-α誘導的心臟祖細胞凋亡

李春曉，李慧影，王　虹，陳　璐，邱麗珍，耿　瀟，尤星宇

(天津中醫藥大學，天津市現代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗培育基地，天津市中藥藥理學重點實驗室，方劑學教育部重點實驗室，天津　300193)

?

桃葉珊瑚苷通過ERβ途徑抑制TNF-α誘導的心臟祖細胞凋亡

李春曉，李慧影，王虹，陳璐，邱麗珍，耿瀟，尤星宇

(天津中醫藥大學，天津市現代中藥重點實驗室-省部共建國家重點實驗培育基地，天津市中藥藥理學重點實驗室，方劑學教育部重點實驗室，天津300193)

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.08.008

目的桃葉珊瑚苷(aucubin, AU)是杜仲、車前草、地黃等中草藥的有效成分之一。現代藥理學研究發現，AU對免疫、心腦血管、神經系統均有保護作用，但其作用機制尚不清楚。課題組前期研究證實AU可激活雌激素受體，提示AU可能通過雌激素信號通路發揮心血管保護作用。近年來越來越多的證據表明，心臟祖細胞(cardiac progenitor cells, CPCs)在心肌缺血組織損傷修復中發揮重要作用。方法為了進一步闡明AU的作用機制，該研究以小鼠CPCs為細胞模型，采用IncuCyte活細胞成像、TUNEL、Western blot、定量PCR等方法探討了AU對腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)誘導的CPCs凋亡的影響及其作用機制。結果AU可以降低由TNF-α誘導的CPCs凋亡，降低caspase-3蛋白質表達，上調Bcl-2/Bax水平，雌激素受體β(estrogen receptor β,ERβ)抑制劑可阻斷AU的抗凋亡作用，同時AU可使ERβ表達升高。結論AU可以抑制由TNF-α誘導的CPCs凋亡，其部分作用機制為ERβ通路的激活。

桃葉珊瑚苷；心臟祖細胞；雌激素受體β；腫瘤壞死因子-α；細胞凋亡；組織損傷修復

缺血性心臟病具有高發病率、高致死率等特點[1]，盡管現有的治療手段如血管成形術、支架及溶栓藥物治療可減輕導致缺血的原因[2]，改善供血，但不能修復壞死的心肌。近年來研究表明，心臟干/祖細胞(cardiac stem cells/cardiac progenitor cells, CSCs/CPCs)是心臟自身的多能干細胞，具備特異性心肌分化的潛能，可分化為心肌細胞、內皮細胞及血管平滑肌細胞等多種心臟細胞系[3]。2011年和2012年，Bolli等[4]和Makkar等[5]分別完成一項心臟干細胞治療缺血性心臟病的I期臨床試驗：SCIPIO和CADUCEUS試驗。試驗顯示干細胞治療組左室射血分數明顯提高，梗死瘢痕明顯減少，局部心臟收縮功能改善，局部收縮期室壁增厚，活力心臟面積增加。試驗結果證明移植心臟干細胞治療缺血性心臟病的安全性，同時表明基于心臟干細胞的再生療法可能逆轉心臟病發作引起的損傷。盡管心臟祖細胞治療有一定療效，但也有報道顯示[6]，心臟干細胞僅能在短期內改善心功能，心肌梗死時，梗死區域缺血缺氧、炎癥細胞入侵、誘導移植細胞凋亡，移植后僅1%～10%的細胞存活下來，這極大程度限制了細胞治療的效果。因此，減少心臟干/祖細胞凋亡，促進其存活至關重要。

桃葉珊瑚苷(aucubin,AU)又稱珊瑚木苷，其化學名為β-D-吡喃葡萄糖苷，屬環烯醚萜苷類，是杜仲、車前草、地黃等中草藥的有效成分之一。現代藥理學研究發現，AU具有護肝、抗氧化、抗炎、促干細胞再生等多種藥理作用[7-8]，對免疫、心腦血管、神經系統均有保護作用，但其對CPCs的作用機制尚不清楚。本實驗用TNF-α誘導的細胞凋亡，探討AU對CPCs凋亡的影響及其機制，為AU防治缺血性心臟病提供新的實驗依據。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1細胞小鼠CPCs，由美國西北大學覃剛健教授惠贈。

1.1.2藥物與試劑AU購于中新藥業；雌二醇(E2)、L-谷氨酰胺、β-巰基乙醇、二甲基亞砜(DMSO)、SDS購于Sigma公司；MPP dihydrochloride、(R,R)-THC購于Tocris公司；mTNF-α購于R&D公司；DMEM/F12購于Hyclone公司；MEM nonessential amino acids、Basic fibroblast growth factor購于Gibco公司；胎牛血清FBS、青鏈霉素、0.25%胰蛋白酶購于Biological Industries公司；cDNA合成試劑盒(TaqMan?Reverse Transcription Rengents)、RT-PCR試劑盒(SYBR?Select Master Mix)購于Applied Biosystems公司；全蛋白提取試劑盒購于生工公司；In Situ Cell Death Detection Kit，TMR red購于Roche公司；β-actin、Bax、Bcl-2、caspase-3等抗體均購于Cell Signaling Technology公司；CD117抗體購于Miltenyi Biotec公司；CD45、CD31、Flk-1、Ly-6A/E等抗體均購于BD Biosciences公司；CD34抗體購于eBiosciences公司。

1.2方法

1.2.1細胞培養細胞培養所用培養基為CCM完全培養液，基礎培養基為DMEM/F12，加入體積分數為10%的FBS(或體積分數為1%的FBS)、2 mmol·L-1L-Glutamine、10 mmol·L-1β-mercaptoethanol、體積分數為1%的MEM nonessential amino acids、5 pg·L-1Basic fibroblast grow factor、體積分數為1%的青鏈霉素混勻，4℃存放。細胞融合至80%～90%時進行傳代。

1.2.2流式細胞術細胞長勢良好時，用胰酶進行消化，經計數后取1×106cells/tube進行鑒定，避光加入相應抗體CD117、Sca-1、Flk、CD34、CD45、CD34或iostype各1 test，冰上避光孵育30 min，用4 mL PBS去除未結合抗體后離心，去除上清，加入500 μL PBS重懸上機檢測。

1.2.3IncuCyte活細胞成像系統正常培養細胞融合至80%時，以4×103個細胞每孔接種于96孔板中，分為對照組(0.1% DMSO,1% FBS)、正常組(0.1% DMSO)、陽性藥組(TNF-α 25 pg·L-1, 10 nmol·L-1E2, 1% FBS)、模型組(TNF-α 25 pg·L-1, 0.1% DMSO, 1% FBS)、給藥組(TNF-α 25 pg·L-1, 10 μmol·L-1AU, 1% FBS)、ERα拮抗組(TNF-α 25 pg·L-1, 10 μmol·L-1AU, 100 nmol·L-1MPP,1% FBS)、ERβ拮抗組[TNF-α 25 pg·L-1, 10 μmol·L-1AU, 100 nmol·L-1(R,R)-THC, 1% FBS]，共7組，每組6個復孔。培養24 h待細胞貼壁生長良好后，用無血清完全培基血清饑餓24 h，此時按分組加入培養基放入IncuCyte中設置程序，每隔2 h進行拍照統計。用Confluence值作為結果，統計每孔數據進行分析。

1.2.4Western blot正常培養細胞融合至80%時，以3×105個細胞每孔接種于6孔板中，分為對照組(0.1% DMSO, 1% FBS)、模型組(TNF-α 25 pg·L-1, 0.1% DMSO, 1% FBS)、給藥組(TNF-α 25 pg·L-1, 10 μmol·L-1AU, 1% FBS)，共3組，每組3個復孔。培養24 h待細胞貼壁生長良好后，按分組加入培養基，培養48 h后提取總蛋白。用BCA法進行蛋白濃度測定，取等量蛋白進行SDS-PAGE，半干法轉膜，與相應一抗二抗結合反應后，用化學發光法檢測抗原抗體結合區帶。用凝膠成像分析儀進行電泳條帶的拍照與分析。實驗中以β-actin為內參，分別檢測了Bax、Bcl-2、caspase-3。

2　結果

2.1CPCs的鑒定通過標記CD117、Sca-1、Flk、CD34、CD45、CD34進行流式檢測，其中Sca-1的陽性率為98%，其余抗體均顯示陰性，最高陽性率為18.8%，提示實驗中所使用的細胞為Sca-1+的心臟祖細胞[9](Fig 1)。

2.2AU對CPCs增殖的影響基于以上鑒定結果，首先研究AU對CPCs增殖能力的影響。對照組為1% FBS的完全培養基，給藥組加藥濃度為10 μmol·L-1，為1% FBS的完全培養基。其中正常組用10% FBS的完全培養基，作為細胞正常增殖的參照，便于對藥效進行評估。以細胞密度作為參考指標，24 h后，將3組細胞進行比較發現，3組細胞均能貼壁正常生長，其中對照組細胞密度低于正常組和加藥組，且加藥組細胞密度低于正常組。從Fig 2中可以看出，AU具有一定的促增殖作用，但作用并不明顯(Fig 2)。

Fig 1Identification of CPCs

The CPCs were incubated with CD117, Sca-1, Flk, CD34, CD45 and CD34 antibody respectively.The positive cell rate was analyzed by flow cytometry.

Fig 2　Effect of aucubin on proliferation in ±s,n=3)

CPCs were incubated with 10 μmol·L-1aucubin. The proliferation was analyzed by IncuCyte. Values from three independent experiments.*P<0.05vsDMSO treated cells alone when CPCs were incubated with 10 μmol·L-1aucubin for 24 h.

2.3AU對TNF-α誘導凋亡的影響以上研究發現，AU對細胞增殖的影響并不明顯，接下來我們進一步研究其抗凋亡作用。實驗中加入TNF-α誘導凋亡，觀察其細胞形態。實驗以E2作為陽性對照，給藥組中加入MPP作為ERα拮抗組，給藥組中加入(R,R)-THC作為ERβ拮抗組。

觀察細胞形態發現，對照組細胞形態良好，正常組細胞密度較大，形態正常，模型組細胞明顯發生形態改變，大部分細胞變圓，體積縮小，呈明顯的凋亡特征(P<0.05)。陽性藥組可以看出凋亡細胞明顯減少(P<0.05)，并能進行正常的增殖。給藥組細胞狀態與陽性藥組相當，凋亡細胞明顯減少(P<0.05)。MPP為ERα的拮抗劑，(R,R)-THC為ERβ的拮抗劑。ERα拮抗組中給藥組的保護作用并未消失，凋亡細胞減少，但ERβ拮抗組中細胞凋亡明顯增加(P<0.05)，與給藥組相比差異具有顯著性(Fig 3)。由此可以推斷，AU可以抑制TNF-α誘導的凋亡，可能是通過ERβ途徑發揮作用。

2.4TUNEL染色進一步證明AU對TNF-α誘導凋亡的影響為了進一步驗證AU的抗凋亡作用，本研究利用TUNEL染色更準確地反映細胞凋亡的特征，經TUNEL染色后凋亡細胞顯現紅色熒光。從Fig 4A中可以看出，對照組基本無熒光信號，模型組中加入TNF-α誘導凋亡后，可以明顯看到細胞形態發生皺縮，且紅色熒光信號明顯變強(P<0.01)。陽性藥組中凋亡細胞明顯減少(P<0.01)，給藥組細胞狀態與陽性對照組相當，與模型組相比凋亡細胞明顯減少(P<0.01)。ERα拮抗組中給藥組的保護作用并未消失，凋亡細胞減少，但ERβ拮抗組中細胞凋亡明顯增加，明顯抑制了AU的保護作用(P<0.01)。由此可以進一步判斷，AU可以抑制TNF-α誘導的細胞凋亡，且極有可能是通過ERβ途徑發揮作用(Fig 4)。

2.5Western blot檢測AU對凋亡相關蛋白的影響確定AU的抗凋亡作用后，本研究對其抗凋亡的機制進行了進一步的探討，驗證了細胞凋亡相關蛋白質水平的變化。結果顯示，加入TNF-α誘導凋亡后，細胞中活化的caspase-3蛋白質水平明顯上調(P<0.01)，Bcl-2/Bax水平明顯下調(P<0.01)，10 μmol·L-1的AU加藥48 h后可以明顯降低由TNF-α誘導凋亡引起的caspase-3蛋白質水平的上調(P<0.01)和Bcl-2/Bax水平的下調(P<0.01)，差異具有統計學意義，證明AU確實可以在一定程度上抑制細胞凋亡的發生(Fig 5)。

CPCs were incubated with TNF-α(25 pg·L-1) for 69 h in the absence or presence of aucubin(10 μmol·L-1), E2(10 nmol·L-1), MPP(100 nmol·L-1), (R,R)-THC(100 nmol·L-1). A: Images of CPCs at 69 h; B: The apoptosis of CPCs was analyzed by IncuCyte. Values from six independent experiments.*P<0.05 compared with DMSO treated cells alone;#P<0.05 compared with TNF-α (25 pg·L-1) treated cells alone;△P<0.05 compared with TNF-α (25 pg·L-1) and 10 μmol·L-1aucubin treated cells.

Fig 4　Effect of aucubin on TNF-α induced apoptosis in CPCs by ±s,n=6)

CPCs were incubated with TNF-α(25 pg·L-1) for 69 h in the absence or presence of aucubin(10 μmol·L-1), E2(10 nmol·L-1), MPP(100 nmol·L-1), (R,R)-THC(100 nmol·L-1). A: Images of CPCs labeled by TUNEL technology at 69 h; B:Analyzed by IncuCyte. Values from six independent experiments.**P<0.01 compared with DMSO treated cells alone;##P<0.01 compared with TNF-α (25 pg·L-1) treated cells;△△P<0.01 compared with TNF-α (25 pg·L-1) and 10 μmol·L-1aucubin treated cells.

2.6實時定量PCR檢測AU對ERα和ERβ表達的影響在上述結果中，初步判定了AU的抗凋亡作用可能是通過ERβ途徑發揮作用的，為了進一步對雌激素通路進行驗證，本研究對ERα和ERβ的mRNA水平進行了檢測。AU對CPCs細胞ERα和ERβ mRNA水平的影響結果見Fig 6。結果顯示，加藥8 h后，ERα的基因表達水平有所下調，而ERβ的基因表達水平明顯上調(P<0.05)，差異具有統計學意義，證明AU在發揮抗凋亡作用的同時，激活了ERβ受體，進一步驗證了AU的保護作用很可能是通過ERβ相關通路發生的。

3　討論

隨著社會經濟發展，高速的生活節奏及不健康的生活方式導致心肌梗死等心血管疾病成為人類死亡的主要原因之一[10]。現代藥理學研究發現，在成年個體心臟內存在原始的心臟祖細胞，可以分化為心肌細胞、平滑肌細胞、內皮細胞，直接參與心肌的損傷修復[11-12]。2003年美國FDA就已批準自體骨髓干祖細胞移植治療心梗性疾病，國內也針對干祖細胞治療做了大量研究，但是，干祖細胞移植作為誘導心肌再生修復的手段之一，還存在許多不足之處，梗死區域的特殊生理環境，使得移植后僅1%～10%的細胞存活，極大程度限制了祖細胞移植的治療效果。因此，如何促進祖細胞增殖及抑制祖細胞凋亡也成為了重要的研究方向，在臨床上具有重大的研究意義。

CPCs were pre-incubated with TNF-α(25 pg·L-1) and 10 μmol·L-1aucubin for 48 h. The apoptosis protein expression was analyzed by Western blot. Values from three independent experiments.**P<0.01 compared with DMSO treated cells alone;##P<0.01 compared with TNF-α(25 pg·L-1) treated cells alone.

Fig 6　Effect of aucubin on ERα gene

The genes expression was analyzed by quantitative real time PCR(qRT-PCR). Values from three independent experiments. A: Effect of aucubin on ERα gene expression in CPCs; B: Effect of aucubin on ERβ gene expression in CPCs.*P<0.05 compared with DMSO treated cells alone.

細胞凋亡與多種因素相關，機制較為復雜，其中TNF-α是一種常見的誘導細胞凋亡的因子，是一種由單核巨噬細胞釋放的細胞因子，它通過與膜受體TNFR I或TNFR II結合從而發揮生物學作用。先前已有研究證明TNF-α可誘導心肌細胞凋亡，損傷血管內皮細胞，促進動脈粥樣硬化的發生發展等[13-14]。我們的實驗結果表明，AU可以明顯抑制由TNF-α誘導的CPCs凋亡。并且通過對Incucyte結果進行分析可以發現，AU在該濃度下對細胞無毒性，但其并不能明顯促進CPCs增殖，進一步證明AU的保護作用是通過抑制細胞凋亡，促進細胞的存活率實現的。上述結果通過TUNEL進一步進行驗證，可以進一步證明TNF-α誘導細胞凋亡的作用以及AU抗凋亡的作用。確定AU的抗凋亡作用后，本研究對其抗凋亡的機制進行了進一步的探討。caspase-3是細胞凋亡過程中最主要的終末剪切酶。Bcl-2可以阻止細胞色素C從線粒體釋放到細胞質，從而抑制了細胞凋亡。Bax是與Bcl-2同源的水溶性相關蛋白，是Bcl-2基因家族中的促進細胞凋亡基因，Bax的過度表達可拮抗Bcl-2的保護效應，使細胞趨于死亡[15]。比較Western blot結果，活化的caspase-3蛋白質水平有明顯上調，Bcl-2/Bax水平有明顯下調，均證明AU可以抑制由TNF-α誘導的細胞凋亡。

本課題組前期研究發現AU可激活雌激素受體[16]，具有植物雌激素樣作用。為了進一步探討其抗凋亡作用是否與雌激素受體相關，實驗中加入了MPP作為ERα的拮抗劑，(R,R)-THC作為ERβ的拮抗劑。MPP即甲基哌啶吡唑，是ERα選擇性拮抗劑，其與ERα的親和力是ERβ的200倍。(R,R)-THC即四氫大麻酚，是ERβ的選擇性拮抗劑，其與ERβ的親和力是ERα的7倍[17]。由結果可以看出，加入MPP后，其抗凋亡作用并無明顯變化，而加入(R,R)-THC后，抗凋亡作用消失。表明AU可通過干預ERβ途徑發揮抗凋亡作用。同時，AU使ERβ mRNA表達明顯上調，ERα表達有下調趨勢。Koehler等[18]發現，ERβ能夠以一種濃度依賴的方式抑制ERα作用，可能與本研究結果的機制相同，但還有待進一步驗證。

綜上所述，桃葉珊瑚苷可以抑制TNF-α誘導的心臟干/祖細胞凋亡，雌激素受體相關信號通路參與其中，并且相比于ERα，ERβ發揮了更加明顯的作用。本研究為桃葉珊瑚苷干預心臟干/祖細胞治療缺血性心臟病的臨床應用提供了實驗依據。

[1]Zhou M,Wang H,Zhu J,et al.Cause-specific mortality for 240 causes in China during 1990-2013: a systematic subnational analysis for the Global Burden of Disease Study 2013[J].Lancet,2016,387(10015):251-72.

[2]何曉全,劉梅林.中國冠心病防治策略[J]. 中國全科醫學,2015, 18(2)：239-40.

[2]He X Q,Liu M L.Prevention and control strategy of coronary heart disease in China[J].ChinGenPract,2015,18(2):239-40.

[3]Beltrami A P,Barlucchi L,Torella D,et al.Adult cardiac stem cells are multipotent and support myocardial regeneration[J].Cell,2003,114(6):763-76.

[4]Bolli R,Chugh A R,D′Amario D,et al.Cardiac stem cells in patients with ischaemic cardiomyopathy (SCIPIO): initial results of a randomised phase 1 trial[J].Lancet,2011,378(9806):1847-57.

[5]Makkar R R,Smith R R,Cheng K,et al.Intracoronary cardiosphere-derived cells for heart regeneration after myocardial infarction(CADUCEUS): a prospective, randomised phase 1 trial[J].Lancet,2012, 379(9819):895-904.

[6]Hodgkinson C P,Bareja A,Gomez J A,et al.Emerging concepts in paracrine mechanisms in regenerative cardiovascular medicine and biology[J].CircRes,2016,118(1):95-107.

[7]Chang I M. Liver-protective activities of aucubin derived from traditional oriental medicine[J].ResCommunMolPatholPharmacol,1998,102(2):189-204.

[8]Park K S, Chang I M. Anti-inflammatory activity of aucubin by inhibition of tumor necrosis factor-alpha production in RAW 264.7 cells[J].PlantaMed,2004,70(8):778-9.

[9]Oh H,Bradfute S B,Gallardo T D,et al.Cardiac progenitor cells from adult myocardium: homing, differentiation, and fusion after infarction[J].ProcNatlAcadSciUSA,2003,100(21):12313-8.

[10]米粟,胡卓偉.抑制心肌纖維化促進心肌再生治療慢性心血管疾病[J]. 生理科學進展,2010,41(5)：352-8.

[10]Mi S,Hu Z W.Suppressing myocardial fibrosis to promote myocardial regeneration as a therapeutic strategy for chronic cardiovascular disease[J].ProgPhysiolSci,2010,41(5):352-8.

[11]Ellison G M,Vicinanza C,Smith A J,et al.Adult c-kit(pos) cardiac stem cells are necessary and sufficient for functional cardiac regeneration and repair[J].Cell,2013,154(4):827-42.

[12]Messina E,De Angelis L,Frati G,et al.Isolation and expansion of adult cardiac stem cells from human and murine heart[J].CircRes,2004, 95(9):911-21.

[13]Ceradini D J,Kulkarni A R,Callaghan M J,et al.Progenitor cell trafficking is regulated by hypoxic gradients through HIF-1 induction of SDF-1[J].NatMed,2004, 10(8): 858-64.

[14]朱新紅,高美華,于新娟,等. CD59轉染細胞Caspase-3和Bcl-2基因的表達[J]. 青島大學醫學院學報, 2009, 45(1)： 9-10.

[14]Zhu X H,Gao M H,Yu X J,et al.ExpressionsI of Caspase-3 and Bcl-2 on CD59 transfected cells[J].ActaAcadMedQingdaoUniv,2009,45(1):9-10.

[15]張亞云,林超,孫鑫,等.雌激素介導的 HSP27 在動脈粥樣硬化中作用的研究進展[J]. 中國藥理學通報,2016,32(2)：159-62.

[15]Zhang Y Y,Lin C,Sun X,et al.Research progress of estrogen-mediated HSP27 in atherosclerosis[J].ChinPharmacolBull,2016,32(2):159-62.

[16]Wang H,Li M C,Yang J,et al.Estrogenic properties of six compounds derived from Eucommia ulmoides Oliv. and their differing biological activity through estrogen receptors α and β[J].FoodChem,2011,129(2):408-16.

[17]Shiau A K, Barstad D, Radek J T,et al.Structural characterization of a subtype-selective ligand reveals a novel mode of estrogen receptor antagonism[J].NatStructBiol,2002,9(5): 359-64.

[18]Koehler K F,Helguero L A,Haldosén L A,et al. Reflections on the discovery and significance of estrogen receptor beta[J].EndocrRev,2005,26(3):465-78.

Aucubin inhibited apoptosis of mouse cardiac progenitor cells induced by TNF-α through ERβ pathway

LI Chun-xiao,LI Hui-ying,WANG Hong,CHEN Lu,QIU Li-zhen,GENG Xiao,YOU Xing-yu

(TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine,TianjinStateKeyLaboratoryofModernChineseMedicine,KeyLaboratoryofPharmacologyofTraditionalChineseMedicalFormulae,MinistryofEducation,TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine,TianjinKeyLaboratoryofTraditionalChineseMedicinePharmacology,InstituteofTraditionalChineseMedicine,TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine,Tianjin300193,China)

AimAucubin(AU) is one of the effective ingredients of eucommia, plantain, rehmannia and other herbs.Modern pharmacological studies have shown that AU has protective effects on immunity, cardiovascular and nervous system, but its mechanism is unclear. Previous studies have confirmed that AU can activate estrogen receptor, suggesting that AU may play a role in cardiovascular protection through estrogen signaling pathway. In recent years, more and more evidence showed that cardiac progenitor cells(CPCs) play an important role in the repair of myocardial ischemic injury. MethodsTo further elucidate the mechanism, our study used mouse CPCs as cell model and elucidated the effect of AU on CPCs apoptosis induced by tumor necrosis factor alpha (TNF-α) and its mechanism by IncuCyte live cell imaging, TUNEL staining, Western blot and quantitative PCR. ResultsAU could reduce TNF-α-induced apoptosis of CPCs, decrease the expression of caspase-3 and up-regulate Bcl-2/Bax levels. Estrogen receptor beta(ERβ) antagonist could block the anti-apoptotic effect of AU, and AU treatment was able to increase the expression of ERβ. ConclusionAU could inhibit the apoptosis of CPCs induced by TNF-α, and its mechanism is the activation of ERβ pathway.

aucubin; cardiac progenitor cells; estrogen receptor β; tumor necrosis factor-α; cell apoptosis;tissue injury repair

2016-04-07,

2016-05-10

新世紀優秀人才支持計劃(No NCET-13-0935)；國家自然科學基金資助項目(No 81173592)；國家國際科技合作專項(No 2015DFA30430)；長江學者和創新團隊發展計劃資助項目(No IRT1276)

李春曉(1992-)，女，碩士，研究方向：中藥心血管藥理學，E-mail：1256665378@qq.com；

王虹(1974-)，女，博士，研究員，研究方向：中藥心血管藥理學，通訊作者，E-mail：wanghongsys@126.com

A

1001-1978(2016)08-1068-07

R-332；R284.1；R322.11；R329.24；R329.25；R392.11；R542.2

網絡出版時間：2016-7-19 10:43網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160719.1043.016.html