魚藤素對食管癌EC-109細胞增殖的抑制作用及部分機制

白美玲,劉星亮,張林西,李海軍

(河北北方學院 1.基礎醫學院、2.附屬第一醫院神經內科、3.生命科學研究中心，河北 張家口　075000)

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魚藤素對食管癌EC-109細胞增殖的抑制作用及部分機制

白美玲1,劉星亮2,張林西3,李海軍1

(河北北方學院 1.基礎醫學院、2.附屬第一醫院神經內科、3.生命科學研究中心，河北 張家口075000)

Inhibitory effect of deguelin on esophageal cancer EC109 cells and its mechanism

BAI Mei-ling1，LIU Xing-liang2, ZHANG Lin-xi3, LI Hai-jun1

(1.BasicMedicalCollege, 2.DeptofNeurologyoftheFirstAffiliatedHospital, 3.LifeSciencesResearchCenter,HebeiNorthUniversity,ZhangjiakouHebei075000,China)

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.08.029

氧化應激；魚藤素； Keap1-Nrf2通路; HO-1；食管癌；流式細胞術

氧化和抗氧化失衡在腫瘤發生發展過程中的作用被越來越多的學者所關注[1-2]。本實驗擬通過安全有效的體外實驗來觀察魚藤素在食管癌細胞中的作用效果，同時觀察慢性氧化應激相關通路在其中的作用機制。

1　材料與方法

1.1藥物與試劑魚藤素(deguelin)購自Sigma公司，p-Akt兔抗人單克隆抗體、Nrf2兔抗人單克隆抗體、HO-1鼠抗人單克隆抗體均購自美國Santa Cruz公司。

1.2細胞培養人食管癌細胞株EC-109由河北北方學院生命科學研究中心惠贈。將復蘇后的EC-109細胞分為對照組和魚藤素組(濃度為20、40、80、160 nmol·L-1)進行實驗。

1.3細胞增殖抑制的檢測采用CCK-8法，各組分別設4個復孔，每組選取1×106個細胞作用24、48 h 后，波長為490 nm酶標儀測光密度值(OD)。

1.4檢測細胞周期收集藥物作用24h的各組細胞1×106個，離心，并按照說明書步驟通過流式細胞儀檢測細胞周期。

1.5瓊脂糖凝膠電泳觀察細胞凋亡用對照組和不同濃度魚藤素藥物組提取的DNA樣品觀察凋亡情況。

1.6蛋白質印跡法檢測p-Akt、Nrf2和HO-1的表達各組加入蛋白裂解液提取總蛋白，分別加入一抗和二抗，DAB顯色觀察。

2　結果

各組作用24 h后，各藥物組均可明顯抑制EC-109細胞的增殖，且兩者有協同作用。由Tab 1可見，對照組細胞的生長主要阻滯在S期，而魚藤素組主要阻滯在G0/G1期，差異有統計學意義(P<0.05)。不同濃度的魚藤素作用24 h后可見凋亡率隨著藥物濃度的升高而增加。Western印跡法分析顯示，p-Akt 、Nrf2和 HO-1蛋白條帶的光密度均低于對照組(P<0.05)。

Tab 1　Cell cycle of different groups in 24 h

*P<0.05,**P<0.01vscontrol

3　討論

本實驗結果表明，隨著魚藤素的濃度增高，能明顯地抑制EC-109癌細胞的增殖，并在誘導細胞凋亡的過程中也發揮重要作用，具有濃度-時間效應(P<0.05)。已有研究表明[3-4]，通過細胞生長周期的調控來減緩細胞增殖速度、加快細胞凋亡。本實驗結果表明魚藤素阻滯了細胞周期，抑制了EC-109細胞的增殖過程。

在本實驗中，通過Western blot檢測發現，魚藤素組較對照組的p-Akt蛋白量略減少，Nrf2和HO-1蛋白的表達量亦下降。推測魚藤素發揮抗氧化作用是通過抑制磷酸化Akt(p-Akt)的激活，即PI3K/Akt通路的失活，從而降低了p-Akt磷酸化Nrf2，抑制了內源性抗氧化物質生成通路的激活，失活后的Nrf2引發其下游靶基因人血紅素加氧酶1(HO-1)的表達量下降，整個過程為一個連續的級聯反應。而在此過程中，PI3K/Akt通路和Keap1-Nrf2通路呈正向調節作用，也為魚藤素在臨床上的應用推廣奠定了理論基礎。

(致謝：本文實驗在河北北方學院生命科學研究中心完成。)

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[2]Vrana J A, Boggs N, Currie H N. Amelioration of an undesired action of deguelin[J].Toxicon, 2013,74(7):83-91.

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[3]Chu Z H, Liang X H, Zhou X L, et al. Effects of deguelin on proliferation and apoptosis of MCF-7 breast cancer cells by phosphatidylinositol 3-kinase/Akt signaling pathway[J].JChinIntegrMed, 2011, 9(5):533-8.

[4]王艷華，張慧萍，田玨，等.NO水平下降通過氧化應激引起人胎盤滋養細胞凋亡[J].中國藥理學通報，2014,30(9):1287-92.

[4]Wang Y H, Zhang H P, Tian J, et al. The levels of no decrease induced apoptosis in human placental trophoblast cells through oxidative stress[J].ChinPharmacolBull, 2014,30(9):1287-92.

oxidative stress; deguelin; Keap1-Nrf2 pathway; HO-1; esophageal cancer; flow cytometry

2016-04-15,

2016-05-15

河北省高等學校科學技術研究青年基金項目(No QN2014217)；河北省醫學科學研究重點課題(No ZD20140202)；河北北方學院青年基金項目(No Q2014033)

白美玲(1979-)，女，碩士，講師，研究方向:消化系統腫瘤，通訊作者，E-mail：blxiaobai2013@163.com

A

1001-1978(2016)08-1181-02

R329.24；R349.1；R735.102.2；R979.1

網絡出版時間：2016-7-19 10:43網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160719.1043.058.html

◇研究簡報◇