8-溴乙氧基大黃酸的合成及其對肝癌HepG2.2.15細胞乙肝病毒抑制作用的研究

潘智育,李　竟,陳云龍，王春苗,彭　政,粟正英,黎丹戎,侯華新

(1.廣西醫科大學藥學院，廣西 南寧　530021；2. 黑龍江省齊齊哈爾市第一醫院，黑龍江 齊齊哈爾　161005；3. 廣西醫科大學附屬腫瘤醫院，廣西 南寧　530021)

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8-溴乙氧基大黃酸的合成及其對肝癌HepG2.2.15細胞乙肝病毒抑制作用的研究

潘智育1,李竟1,陳云龍2，王春苗1,彭政1,粟正英1,黎丹戎3,侯華新1

(1.廣西醫科大學藥學院，廣西 南寧530021；2. 黑龍江省齊齊哈爾市第一醫院，黑龍江 齊齊哈爾161005；3. 廣西醫科大學附屬腫瘤醫院，廣西 南寧530021)

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.08.028

目的合成8-溴乙氧基大黃酸，探討8-溴乙氧基大黃酸對肝癌HepG2.2.15細胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的抑制作用和機制。方法以大黃酸為結構基礎，化學全合成8-溴乙氧基大黃酸，采用紅外光譜(IR)、核磁共振氫譜(1H-NMR)及碳譜(13C-NMR)對其結構進行表征；MTT法測定8-溴乙氧基大黃酸對細胞生長的抑制作用；ELISA檢測HepG2.2.15細胞分泌的HBsAg和HBeAg；Western blot法檢測細胞內乙肝病毒X基因(HBx)蛋白的表達；流式細胞儀分析細胞周期；激光共聚焦顯微鏡測定細胞內游離鈣離子濃度。結果IR、1H-NMR和13C-NMR的結果確證合成產物為8-溴乙氧基大黃酸，合成產物和大黃酸對HepG2.2.15細胞具有較好的抑制細胞生長的作用，作用72 h后IC50分別為14.29 mg·L-1和11.59 mg·L-1。采用無細胞毒劑量的8-溴乙氧基大黃酸處理細胞后，對細胞分泌的HBsAg和HBeAg有抑制作用，其抑制作用隨著濃度的增加，呈現劑量依賴性，且合成產物的抑制效果優于大黃酸；8-溴乙氧基大黃酸可降低HBx蛋白表達水平和細胞內鈣離子濃度，阻礙乙型肝炎病毒(HBV)復制，但不影響細胞周期。結論本研究合成的8-溴乙氧基大黃酸顯示了比大黃酸更為優越的抑制HepG2.2.15細胞HBsAg和HBeAg的分泌作用的活性，其作用機制可能是通過降低HBx蛋白表達、減少鈣離子濃度而實現。

8-溴乙氧基大黃酸；大黃酸；肝癌；乙型肝炎病毒；HBx；細胞內鈣離子

原發性肝癌是一種發病率高、發現晚、惡化程度高的消化系統惡性腫瘤，嚴重威脅人類的生命和健康。近年的流行病學調查顯示，我國肝癌死亡率在各種惡性腫瘤中居于第三位[1]，而廣西肝癌死亡率居惡性腫瘤之首位，且乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是誘導肝癌發生的重要病因[2]。因此，積極探究肝癌的發病機制、尋找有效抑制乙肝病毒感染的抗肝癌藥物具有重要的現實意義。

蒽醌類化合物廣泛存在于天然植物中，如大黃、何首烏、黃根等，隨著對蒽醌類物質研究的深入，發現其具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等重要的藥理作用。如今臨床上廣泛應用的阿霉素、米托蒽醌等化療藥物就屬于蒽醌類化合物。大黃酸是一種研究較多的蒽醌化合物，可通過阻滯細胞周期、增強半胱天冬氨酸蛋白酶活性等機制誘導肝癌細胞凋亡[3-4]。但其誘導細胞凋亡是否通過抑制乙肝病毒的復制、分泌作用尚不清楚，且大黃酸水溶性較差，與臨床抗腫瘤藥物相比存在特異性不高、功效低等問題，影響其生物活性的發揮。

為了進一步開發大黃酸及蒽醌化合物的藥用價值，減少乙型肝炎病毒誘發肝癌的可能，改善肝癌高發生率、高死亡率的現狀，尋找更理想的抗肝癌藥物，本文以大黃酸為原料合成了溶解度好、毒性小、抗腫瘤活性強且抑制病毒能力高的8-溴乙氧基大黃酸，并探討該合成產物對人肝癌HepG2.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg的影響及其作用機制。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1藥物與試劑大黃酸購自南京郎澤生物醫藥有限公司，含量大于98%；拉米夫定(3TC)為葛蘭素史克制藥(蘇州)有限公司生產；二甲基亞砜、丙酮、1，2-二溴乙烷、乙酸乙酯、石油醚(分析純，汕頭西隴化工)；噻唑藍(MTT，北京Solarbio公司)；MEM培養基(Hyclone)；小牛血清(Gibco)；胰酶(美國 Amersco 公司)； Fluo-3/AM(美國Biotium公司)；HBsAg和HBeAg ELISA 檢測試劑盒(上海科華生物工程有限公司)；周期檢測試劑盒(Bender Med system)；鼠抗HBx(Santa Cruz)；兔抗GAPDH(Abcam)；羊抗鼠lgG-HRP(Santa Cruz)；Goat pAb to Rb lgG-HRP(Abcam)；超敏ECL化學發光即用型底物(Boster Biological Technology)。

1.1.2儀器Set-laborata4000旋轉蒸發儀(德國 Heidolph 公司)；Axiovert 200熒光倒置相差顯微鏡(德國 Zeiss 公司)；化學發光成像工作站(FlourChem M)；Calibur流式細胞儀(美國BD公司)；激光共聚焦顯微鏡 NikonA1(日本尼康出品)；CO2培養箱(美國Thermo公司)；Multiskan MK3酶標儀(美國Thermo公司)；1H-NMR 和13C-NMR采用500兆核磁共振儀(美國 Vrain 公司)測定；紅外光譜由100FTIR光譜儀(美國 Perkin Elmer 公司)測定。

1.1.3細胞人肝癌HepG2.2.15細胞購自武漢大學保藏中心細胞庫。細胞在37℃、5% CO2培養箱內以含10%小牛血清的MEM培養液在培養瓶內單層傳代培養，取對數生長期細胞進行實驗。

1.2方法

1.2.18-溴乙氧基大黃酸的合成在100 mL三口瓶中依次加入500.0 mg大黃酸(1.76 mmol)，486.0 mg碳酸鉀(3.52 mmol)，35 mL DMF，混勻加熱到60℃， 恒溫攪拌30 min，緩慢滴加5.291 g(28.16 mmol)1,2-二溴乙烷，TLC點板檢測跟蹤反應進程，反應1.5 h后TLC點板，反應原料點消失。過濾除去碳酸鉀。加入丙酮，使DMF與丙酮形成共沸物，80℃減壓旋蒸除去大部分DMF，將濃縮的反應液倒入冰水中靜止，析出沉淀，過濾，用冰水洗滌多次，將殘留的DMF除去，得到粗品。采用硅膠柱層析，以石油醚 ∶乙酸乙酯(80 ∶1)為洗脫劑洗脫，除去溶劑，得到橙黃色固體，合成產物進行理化性質及結構鑒定。

1.2.2合成產物配制合成產物用DMSO溶解后配成10 g·L-1原液，0.2 μm有機系濾膜過濾除菌，避光保存。藥物使用時，采用無血清培養基配制成所需的濃度，并使DMSO 終濃度小于2%。

1.2.3MTT法測定8-溴乙氧基大黃酸對細胞生長的抑制作用取對數生長期的HepG2.2.15細胞，以6.8×107·L-1密度接種于96孔板，每孔100 μL，培養24 h后，分別加入100 μL濃度為40、20、10、5、2.5、0 mg·L-1的8-溴乙氧基大黃酸和大黃酸，每個濃度設3個復孔。連續培養72 h，每孔加入MTT 20 μL，繼續培養4 h后小心吸棄上清液，每孔加入DMSO 150 μL使結晶完全溶解。采用酶標儀在492 nm處檢測吸光度值(OD值)。按下列公式計算細胞生長的抑制率和半數抑制濃度IC50值。生長抑制百率/%=[1-(藥物組OD值/對照組OD值)]×100%，選擇對細胞數量及形態幾乎無影響的相應劑量作為后續研究的濃度。

1.2.4ELISA法定量檢測細胞HBsAg和HBeAg分泌情況將2.5×107·L-1的細胞懸液加入24孔細胞培養板，每孔1 mL，置 CO2孵箱中培養24 h后除去全部培養液。分別加入對細胞數量及形態幾乎無影響的IC15、IC10、IC53個終濃度的不同藥物溶液，每個濃度設3個復孔。空白對照組加入等量的完全培養液，參照文獻選擇100 mg·L-1拉米夫定為陽性對照[5]。連續培養72 h后，分別吸出細胞上清液置于1.5 mL滅菌離心管中，-20℃保存，統一待檢。采用ELISA試劑盒對上清HBsAg、HBeAg進行檢測，操作按試劑盒的使用說明書進行，結果以抑制率表示。藥物對抗原的抑制百分率(IR)/%=[1-(藥物組OD值/對照組OD 值)]×100%。

1.2.5流式細胞儀測定細胞周期將HepG2.2.15細胞接種于6孔板中24 h后，加入藥物濃度均為IC10的8-溴乙氧基大黃酸和大黃酸，以等量的完全培養液為空白對照，以拉米夫定為陽性對照藥。處理72 h后，胰酶消化后用PBS漂洗，調整細胞濃度為6×108·L-1。75%乙醇固定過夜， 加入RNase A、300 μL碘化丙啶(PI)，4℃避光下作用30 min。用流式細胞儀分析細胞周期的分布。

1.2.6Western blot法檢測細胞內HBx蛋白8-溴乙氧基大黃酸和大黃酸均以IC10的藥物濃度處理HepG2.2.15細胞，以等量的完全培養液為空白對照,含100 mg·L-1拉米夫定的等量完全培養液為陽性對照。細胞經藥物處理72 h后，提取蛋白,用 BCA 法檢測蛋白含量后,以相同的蛋白量上樣,經聚丙烯酰胺凝膠電泳,轉PVDF膜,5%脫脂奶粉封閉,鼠抗HBx(按1 ∶100稀釋)一抗稀釋液4℃孵育過夜，PBST洗滌3次，再用HRP標記的山羊抗鼠 IgG(按1 ∶1 000稀釋)二抗稀釋液常溫孵育2 h，PBST 洗滌3次，超敏ECL化學發光即用型底物反應后，用化學發光成像儀掃描結果。

1.2.7激光共聚焦檢測細胞內游離鈣離子濃度取對數生長期細胞，調整細胞濃度為1×108·L-1，接種于激光共聚焦顯微鏡專用培養皿中，每皿2 mL細胞懸液。培養24 h后，棄去原培養液，加入藥物濃度為IC10的8-溴乙氧基大黃酸和大黃酸，以等量的完全培養液為空白對照，以拉米夫定為陽性對照藥。處理72 h后用 HEPES緩沖液洗3遍，每皿加入8 μmol·L-1的 Fluo-3/AM熒光染料，37℃避光負載50 min，HEPES緩沖液洗3遍，于激光掃描共聚焦顯微鏡下，選擇激發波長488 nm，發射波長530 nm，激光強度9.0，光電倍增管電壓110 v條件下攝圖。記錄并分析熒光強度。

2　結果

2.18-溴乙氧基大黃酸的結構鑒定合成產物為橙黃色粉末，mp：156℃～158℃，純度為98.0%。IR、1H-NMR和13C-NMR數據見Tab 1。

2.28-溴乙氧基大黃酸對細胞生長的抑制作用從Tab 2可知,隨著8-溴乙氧基大黃酸和大黃酸濃度的增高,HepG2.2.15細胞抑制率相應增高，呈濃度依賴性。8-溴乙氧基大黃酸和大黃酸對HepG2.2.15作用72 h的IC50分別為14.29 mg·L-1和11.59 mg·L-1。結合細胞形態學觀察，當8-溴乙氧基大黃酸和大黃酸的抑制率小于15%時，HepG2.2.15細胞無論在形態上還是數量上與空白對照相同。因此,選擇8-溴乙氧基大黃酸IC15(6.76 mg·L-1)、IC10(5.02 mg·L-1)、IC5(3.16 mg·L-1)和大黃酸IC15(6.03 mg·L-1)、IC10(4.89 mg·L-1)、IC5(2.88 mg·L-1)作為后續研究濃度。

2.38-溴乙氧基大黃酸對HepG2.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg的影響經無細胞毒濃度IC15、IC10、IC5作用72 h后，8-溴乙氧基大黃酸和大黃酸對HepG2.2.15細胞分泌的HBsAg和HBeAg 有明顯的抑制作用，除了IC5濃度外，其他各組濃度對病毒抑制作用與陽性藥物拉米夫定相似。且抑制作用隨著濃度的增加，幾乎呈現劑量依賴性。同時在相同抑制率濃度下，8-溴乙氧基大黃酸對病毒HBsAg的抑制效果優于大黃酸(Tab 3)。

2.4流式細胞儀測定細胞周期與空白對照組相比，經藥物濃度為IC10的8-溴乙氧基大黃酸和大黃酸作用72 h后，細胞G1、G2和S期分布差異均無顯著性(P>0.05) ；而陽性對照組拉米夫定與空白對照組相比，G1、G2和S期差異均存在顯著性(P<0.01)。見Fig 1。

2.5Western blot法檢測8-溴乙氧基大黃酸對細胞內HBx蛋白表達的影響如Fig 2所示，人肝癌細胞HepG2.2.15細胞中HBx蛋白表達較高，與空白對照組比較，拉米夫定和8-溴乙氧基大黃酸均能夠明顯降低HBx蛋白的表達(P<0.05)，而未經結構修飾的大黃酸并不能降低HBx蛋白的表達。提示大黃酸經結構修飾后的8-溴乙氧基大黃酸具有更強的抑制肝癌病毒作用。

2.6激光共聚焦檢測細胞內游離鈣離子濃度細胞內鈣離子與Fluo-3/Am熒光染料結合后顯綠色熒光, 其熒光強度與細胞內鈣離子的濃度成正相關。研究發現，HBx可激活鈣離子刺激的轉錄因子，其在宿主細胞中調節HBV DNA復制與釋放線粒體內鈣引起的胞質鈣離子濃度升高密切相關。

從Tab 4結果可見，在正常情況下，HepG2.2.15細胞內有鈣離子存在，經藥物濃度為IC10的8-溴乙氧基大黃酸和大黃酸處理24 h后，大黃酸對鈣離子濃度影響不大；而8-溴乙氧基大黃酸使鈣離子濃度下降，與空白組比較，差異存在顯著性(P<0.05)。結果證明，8-溴乙氧基大黃酸與陽性對照拉米夫定作用相似，可降低HepG2.2.15細胞內鈣離子濃度。

3　討論

乙型肝炎病毒感染是我國肝癌發生的最主要原因，抗HBV在治療肝癌中具有舉足輕重的作用。目前，公認的抗HBV治療藥物主要有α干擾素和核苷類似物[6]。大多數核苷類藥物可抑制HBV DNA聚合酶活性進而抑制病毒,從而達到抗HBV療效；而α干擾素通過抑制HBV的復制和免疫調節機制,調節機體對HBV的免疫應答,二者協同抗病毒[7-8]。但干擾素不良反應較大，核苷類似物存在病毒耐藥問題，大多數患者在長期治療后仍不能徹底清除病毒。因此，開發篩選新型低毒的抑制乙肝病毒復制抗肝癌藥物，并探明其作用機制是目前研究的熱點和難點。

Tab 1　IR，1H-NMR and 13C-NMR spectrum of synthetic

Tab 2The inhibitory effect of 8-bromo-ethoxy

Drugconcentration/mg·L-1Inhibitoryrate/%8-bromo-ethoxyRheinRhein 4098.83±0.2595.81±1.61 2054.47±2.1580.87±2.09 1026.30±2.2231.55±2.90 58.67±1.7712.19±2.91 2.52.15±1.412.24±0.68IC50/mg·L-114.29±0.6711.59±1.34

Fig 1　Effect of 8-bromo-ethoxy Rhein on cell cycles in HepG2.2.15 cells

**P<0.01vscontrol

Fig 2　Effect of 8-bromo-ethoxy Rhein

*P<0.05，**P<0.01vscontrol

大黃酸等蒽醌類化合物具有抗病毒、保肝抗纖維化、抗肝癌等藥理活性，且藥理作用已被醫學界廣泛認可。蒽醌類化合物呈平面型的多芳香環結構[9], 這種結構可以嵌入到DNA 相鄰的堿基對之間, 以嵌入的形式與 DNA雙螺旋形成可逆的結合, 使DNA降解,并抑制 DNA拓撲異構酶II, 使DNA與拓撲異構酶II形成的復合物僵化,影響DNA的轉錄、合成，從而達到抗腫瘤的作用[10-13]。但是蒽醌環結構對DNA的嵌入作用是可逆的，通過側鏈結構的修飾可以提高蒽醌類藥物對DNA的嵌入作用, 提高蒽醌類藥物與肝癌細胞的親合力。為了增加蒽醌環對肝癌細胞的親合力，得到溶解性好、毒性小、抗腫瘤活性強且抑制病毒能力高的抗肝癌藥物，本研究在大黃酸的基礎上對側鏈進行修飾，合成了8-溴乙氧基大黃酸。結果表明，8-溴乙氧基大黃酸和大黃酸均可抑制人肝癌細胞HepG2.2.15的HBsAg 、HBeAg病毒的分泌，且8-溴乙氧基大黃酸的抑制病毒作用優于大黃酸。推測改變大黃酸的側鏈結構可以抑制蒽醌環結構對DNA的嵌入作用的可逆性，促進病毒DNA的降解。

HBV基因組含有 S 、C 、P 、X 4個開放讀碼框，其中X基因編碼HBx蛋白。HBx具有廣泛的反式激活功能，激活同源或異源基因的啟動子，促進病毒復制和正常肝細胞感染，對肝癌的發生、發展至關重要。實驗研究發現，將HBx導入小鼠的肝細胞中，可引起肝細胞的惡性轉化。將HBx基因轉入小鼠體內，可誘發轉基因小鼠肝癌形成，缺失X基因的乙型肝炎病毒不能有效地進行感染[14,15]。HBx表達越高，其感染能力就越強，通過抑制或減少HBx表達則可降低HBV感染能力，有利于肝癌的治療。此外，HBx涉及鈣信號途徑的介導，能夠上調細胞內鈣離子濃度來保持HBV復制能力[16]。如Bouchard等[17]指出，HBx蛋白對病毒復制的影響與細胞內鈣信號傳導通路有關，通過影響細胞內鈣離子濃度，激活Pyk2，進而通過Src影響HBV病毒的復制。故推測，減少細胞內鈣離子濃度可間接減少HBx的促HBV激活能力，同時可減少肝癌細胞轉化的機會。

DruganddoseHBsAginhibitoryrate/%IC15IC10IC5HBeAginhibitoryrate/%IC15IC10IC58-bromo-ethoxyRhein43.70±1.29*44.09±0.69*30.71±1.28**29.45±2.8224.96±2.3621.93±1.16*Rhein32.68±3.4825.59±1.5812.20±0.9130.03±2.1234.74±4.8813.17±1.553TC/100mg·L-127.17±3.0114.86±0.79

*P<0.05,**P<0.01 under the concentration at the same inhibitory rate, 8-bromo-ethoxy Rhein was compared with Rhein

Tab 4　Results of intracellular free calcium concentration in each ±s，n=3)

*P<0.05，**P<0.01vscontrol

HepG2.2.15細胞系是肝癌細胞HepG2穩定轉染4個全長HBV基因組而建立的,能夠穩定分泌HBsAg、HBeAg及Dane顆粒,可檢測到細胞內各種中間復制體,為研究HBV復制和調控的分子機制提供了一個有效的體外實驗模型[18-19]。本研究利用HepG2.2.15細胞模型證實,8-溴乙氧基大黃酸可明顯降低線粒體鈣離子通道中鈣離子濃度(P<0.01)，與Western blot法結果中HBx蛋白的表達降低(P<0.05)相輔相成, 共同說明8-溴乙氧基大黃酸可調節HepG2.2.15細胞內HBV DNA,降低HBx蛋白的表達,從而減弱HBV病毒的感染能力,最終提高抑制HBV病毒的抗腫瘤作用。此外，研究中還發現，經無細胞毒劑量8-溴乙氧基大黃酸、大黃酸作用HepG2.2.15細胞后，細胞周期各時相的分布與空白對照組比較無差異，其抑制HepG2.2.15細胞分泌病毒的作用機制與拉米夫定存在部分差異，8-溴乙氧基大黃酸有效發揮作用的分子機制仍有待進一步研究。

綜上所述, 8-溴乙氧基大黃酸具有調控細胞HBx蛋白的表達，影響細胞線粒體膜內鈣離子濃度變化,抑制細胞HBV病毒的復制、肝癌細胞的生長和分泌乙肝病毒的能力等活性，說明對具有蒽醌母環結構的化合物進行結構修飾，有可能獲得有應用前景的新型低毒抗肝癌藥物，為肝癌的臨床輔助治療研究提供了重要依據。

(致謝：本文實驗在廣西醫科大學醫學科學實驗中心完成，特此致謝。)

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Synthesis of 8-bromo-ethoxy Rhein and evaluation of its inhibition effect on hepatitis B virus in human hepatoma cells HepG2.2.15

PAN Zhi-yu1, LI Jing1, CHEN Yun-long2,WANG Chun-miao1, PENG Zheng1, SU Zheng-ying1, LI Dan-rong3, HOU Hua-xin1

(1.CollegeofPharmacy，GuangxiMedicalUniversity，Nanning530021，China；2.TsitsiharFirstHospitalofHeilongjiangProvince，TsitsiharHeilongjiang161005，China;3.AffiliatedTumorHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning530021，China)

AimTo synthesize 8-bromo-ethoxy Rhein and investigate its mechanisms and inhibition effect on hepatitis B surface antigen(HBsAg) and e antigen(HBeAg)in HepG2.2.15 cells.Methods8-bromo-ethoxy Rhein was synthesized based on the chemical structure of Rhein，and its structure was identified by IR，1H-NMR and13C-NMR spectra.MTT assay was used to test the inhibitory effect of 8-bromo-ethoxy Rhein on HepG2.2.15 cells. After the cells treatment by 8-bromo-ethoxy Rhein, the HBsAg and HBeAg in cell supernatant were detected by ELISA. The expression of hepatitis B virus X gene(HBx) was detected by Western blot. The cell cycles were examined with flow cytometry. The intracellular free calcium concentration was detected by laser scanning confocal microscopy.ResultsThe structure of 8-bromo-ethoxy Rhein was confirmed by IR，1H-NMR and13C-NMR.MTT results showed that synthetic product and Rhein could inhibit the cell proliferation in HepG2.2.15 cells. After treated with 8-bromo-ethoxy Rhein and Rhein for 72 h，the half inhibitory concentration 50%(IC50) was 14.29 mg·L-1and 11.59 mg·L-1, respectively. Using non-cytotoxic dose of 8-bromo-ethoxy Rhein, the inhibitory effect on HBsAg and HBeAg was gradually enhanced with increasing 8-bromo-ethoxy Rhein concentration.The inhibitory effect of synthetic product on hepatitis B virus was better than that of Rhein. 8-bromo-ethoxy Rhein could down-regulate the expression of HBx,intracellular calcium ion concentration and block the hepatitis B virus(HBV) replication. Flow cytometry results showed 8-bromo-ethoxy Rhein didn′t affect the cell cycle.ConclusionsCompare with Rhein, the synthesis of 8-bromo-ethoxy Rhein shows stronger inhibition on hepatitis B virus in HepG2.2.15, and its mechanisms may involve down-regulating the expression of HBx and reducing calcium ion concentration.

8-bromo-ethoxy Rhein;Rhein；human hepatoma cells; hepatitis B virus; HBx; intracellular calcium

2016-04-20,

2016-05-15

國家自然科學基金資助項目(No 81460561); 廣西高校重點實驗室-壯醫方藥基礎與應用研究重點實驗室(No 桂教科研〔2014〕6號)

潘智育(1991-)，女，碩士生，研究方向：分子藥理學，E-mail: panzhiyu123123@163.com；

侯華新(1960-)，男，教授，碩士生導師，研究方向：分子藥理學與藥物化學,通訊作者，E-mail:houhuaxin@163.com

A

1001-1978(2016)08-1175-06

R284.1；R392.11；R373.21；R735.7；R977.6

網絡出版時間：2016-7-19 10:43網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160719.1043.056.html