白藜蘆醇抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖與p38 MAPK的關(guān)系研究

陳前昭，曾于樺，邵　英，李　洋，任文艷，周林云，周　益，劉榮興，何百成

(1. 重慶市生物化學(xué)與分子藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，2. 重慶醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室，重慶　400016)

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白藜蘆醇抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖與p38 MAPK的關(guān)系研究

陳前昭1，2，曾于樺1，2，邵英1，2，李洋1，2，任文艷1，2，周林云1，2，周益1，2，劉榮興1，2，何百成1，2

(1. 重慶市生物化學(xué)與分子藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，2. 重慶醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室，重慶400016)

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.08.016

目的研究白藜蘆醇(resveratrol, Res)抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用與p38 MAPK的可能關(guān)系。方法利用結(jié)晶紫染色、Western blot和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Res對(duì)LoVo細(xì)胞增殖的抑制作用； Western blot分析Res對(duì)LoVo細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用，以及Res對(duì)p38 MAPK磷酸化的影響；利用p38 MAPK抑制劑，通過(guò)結(jié)晶紫染色和Western blot實(shí)驗(yàn)，分析Res抑制結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞增殖的作用與p38 MAPK之間的關(guān)系。結(jié)果與對(duì)照組相比，Res在20 μmol·L-1時(shí)就能明顯抑制LoVo細(xì)胞增殖(P<0.05)，并促使細(xì)胞周期阻滯在S期，上調(diào)PCNA蛋白水平; Res能呈濃度依賴性增加Bad的蛋白水平，而抑制Bcl-2蛋白表達(dá)；Res對(duì)p38 MAPK總蛋白水平無(wú)明顯影響，但可明顯增加p38 MAPK的磷酸化水平；抑制p38 MAPK明顯促進(jìn)LoVo細(xì)胞增殖，并能減弱Res對(duì)LoVo細(xì)胞增殖的抑制作用、對(duì)Bad表達(dá)促進(jìn)作用和對(duì)Bcl-2表達(dá)的抑制作用。結(jié)論Res對(duì)LoVo細(xì)胞的增殖具有抑制作用并促進(jìn)凋亡，其機(jī)制可能與Res促進(jìn)p38 MAPK的磷酸化有關(guān)。

白藜蘆醇；結(jié)腸癌；LoVo細(xì)胞；增殖抑制；凋亡；p38 MPAK

結(jié)腸癌是常見(jiàn)的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其死亡率僅次于肺癌和肝癌，對(duì)人類的健康具有嚴(yán)重危害[1]。結(jié)腸癌的發(fā)病原因與多種信號(hào)傳導(dǎo)異常和相關(guān)抑癌基因發(fā)生突變有關(guān)，如Wnt/β-catenin信號(hào)異常，以及PTEN突變等[2-3]。近年來(lái)，隨著對(duì)結(jié)腸癌發(fā)病機(jī)制認(rèn)識(shí)的進(jìn)一步深入，臨床對(duì)結(jié)腸癌的治療水平已有較大提高。除傳統(tǒng)的手術(shù)與化療外，靶向治療也已成功用于治療結(jié)腸癌，如貝伐單抗和西妥昔單抗等，但其治療效果及預(yù)后仍不理想[4]。目前，治療結(jié)腸癌面臨的最主要挑戰(zhàn)包括傳統(tǒng)化療藥物的嚴(yán)重毒性與癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。從傳統(tǒng)中藥來(lái)源的單體成分及其有效衍生物在治療腫瘤中發(fā)揮著重要作用，是抗腫瘤藥物的重要來(lái)源之一，如長(zhǎng)春新堿已用于結(jié)腸癌的治療[5]。白藜蘆醇(resveratrol, Res)屬天然多酚類物質(zhì)，又名芪三酚，主要來(lái)源于虎杖、葡萄、花生、桑葚等植物[6]。Res因具有抗氧作用，所以臨床可用于防治動(dòng)脈粥樣硬化、高血脂、冠心病以及缺血性心臟病等疾病[7]。研究證明，Res還具有明顯的抗腫瘤作用，能有效地抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖并促進(jìn)其凋亡，如肺癌、肝癌、乳腺癌和結(jié)腸癌等[8-9]。我們的前期研究結(jié)果也證實(shí)Res對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞具有增殖抑制作用[3]。Res的抗腫瘤作用可能與抑制Wnt/β-catenin信號(hào)和促進(jìn)PTEN表達(dá)等多種機(jī)制有關(guān)[2-3]，但確切機(jī)制目前仍不十分清楚。本研究進(jìn)一步分析Res對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖抑制作用以及可能的分子機(jī)制，為將Res用于臨床治療和預(yù)防結(jié)腸癌提供相應(yīng)的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1試劑與細(xì)胞培養(yǎng)LoVo細(xì)胞購(gòu)自American Type Culture Collection(ATCC)。白藜蘆醇購(gòu)自西安昊軒生物科技有限公司, 實(shí)驗(yàn)所用抗體購(gòu)自Santa Cruz Biotechnology公司, p38 MAPK抑制劑(SB203580)購(gòu)于賽力克公司(Selleck)。LoVo細(xì)胞的培養(yǎng)條件為：DMEM培養(yǎng)基(高糖，含10%胎牛血清、100 kU·L-1青霉素和0.1 g·L-1鏈霉素)，5%的CO2及37 ℃。

1.2實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組將LoVo細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。采用二甲基亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)溶解Res，實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞采用不同濃度的Res處理，對(duì)照組的細(xì)胞則用相同體積的DMSO進(jìn)行處理。

1.3結(jié)晶紫染色實(shí)驗(yàn)將生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞消化，然后種于24孔板中。待細(xì)胞貼壁后用不同濃度Res(10、20、40、60、80 μmol·L-1)或DMSO處理，分別于24、48、72 h進(jìn)行結(jié)晶紫染色，檢測(cè)Res對(duì)LoVo細(xì)胞增殖的影響。方法簡(jiǎn)述如下：棄培養(yǎng)基，用PBS(4℃)小心將孔板清洗干凈。然后每孔加500 μL結(jié)晶紫飽和溶液(采用PBS緩沖的福爾馬林配制)，在室溫下染色20 min。移去結(jié)晶紫染液，用自來(lái)水小心清洗孔板。最后，將孔板置于室溫下晾干后掃描和進(jìn)行定量分析[2]。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.4流式細(xì)胞術(shù)周期分析實(shí)驗(yàn)用不含EDTA的胰酶將處于指數(shù)生長(zhǎng)期的LoVo細(xì)胞消化，然后均勻種于6孔板中，待細(xì)胞貼壁后(4～6 h)用不同濃度Res(20、40、60 μmol·L-1)或DMSO進(jìn)行處理。48 h后收集細(xì)胞，用冷的PBS(4℃)重懸并離心(800 r·min-1，5 min×2次)。然后用預(yù)冷的70%、50%以及30%乙醇進(jìn)行固定，并用PBS洗滌。加入1 mL PI(20 g·L-1)溶液(含RNA酶，1 g·L-1)孵育30 min。最后用流式細(xì)胞儀進(jìn)行周期分析。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5Western blot實(shí)驗(yàn)將處于指數(shù)生長(zhǎng)期的LoVo細(xì)胞種于6孔板中，按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)采用不同濃度Res(20、40、60 μmol·L-1)和DMSO處理。各處理組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)提取總蛋白，并采用BCA法測(cè)定樣品總蛋白濃度。按常規(guī)Western blot實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜和抗體孵育，最后利用化學(xué)發(fā)光試劑盒顯影并采集圖像。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2　結(jié)果

2.1Res對(duì)LoVo細(xì)胞增殖的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Res呈濃度依賴性抑制LoVo細(xì)胞增殖，并且抑制作用隨藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)而增強(qiáng)(Fig 1A)；Res在低濃度(20 μmol·L-1)時(shí)已能明顯抑制LoVo細(xì)胞生長(zhǎng)(P<0.05)。 周期分析結(jié)果顯示，Res明顯誘導(dǎo)LoVo細(xì)胞發(fā)生S期阻滯(Fig 1B)。Western blot分析結(jié)果顯示，Res明顯增加LoVo細(xì)胞PCNA表達(dá)(Fig 1C)，進(jìn)一步證實(shí)Res可誘導(dǎo)LoVo細(xì)胞發(fā)生S期阻滯。以上結(jié)果提示，Res對(duì)LoVo細(xì)胞的增殖具有明顯抑制作用。

2.2Res對(duì)LoVo細(xì)胞凋亡的影響誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是大多數(shù)抗腫瘤藥物的一個(gè)重要特點(diǎn)。Western blot分析結(jié)果顯示(Fig 2)，Res明顯呈濃度依賴性增加Bad的蛋白水平，但下調(diào)Bcl-2的蛋白水平。結(jié)果提示, Res能促進(jìn)LoVo細(xì)胞凋亡。

2.3Res對(duì)LoVo細(xì)胞中p38 MAPK的影響MAPKs信號(hào)的異常與結(jié)腸癌密切相關(guān)，其中p38 MAPK對(duì)細(xì)胞的增殖具有重要調(diào)控作用。Western blot分析結(jié)果顯示，Res對(duì)p38 MAPK總蛋白水平無(wú)明顯影響，但能明顯促進(jìn)p38 MAPK的磷酸化(Fig 3)。結(jié)果提示, Res抑制LoVo增殖和促進(jìn)LoVo細(xì)胞凋亡可能與促進(jìn)p38磷酸化有關(guān)。

Fig 1　Effects of Res on proliferation of LoVo cells

A:The quantification results of crystal violet staining show the effect of Res on proliferation of LoVo cells.*P<0.05,**P<0.01vscontrol;B:Flow cytometery analysis results show the effect of Res on cell cycle in LoVo cells;C:Western blot results show the effect of Res on the protein level of PCNA in LoVo cells

2.4p38 MAPK對(duì)Res抑制LoVo細(xì)胞增殖作用的影響結(jié)晶紫染色分析結(jié)果顯示，Res(40 μmol·L-1)能明顯抑制LoVo細(xì)胞增殖(P<0.05)， p38 MAPK抑制劑能促進(jìn)LoVo細(xì)胞增殖，并明顯減弱Res對(duì)LoVo細(xì)胞的增殖抑制作用(Fig 4)。結(jié)果提示，Res對(duì)LoVo細(xì)胞增殖的抑制作用至少與促進(jìn)p38 MAPK磷酸化有關(guān)。

Fig 2　Effects of Res on apoptosis of LoVo cells

Fig 3　Effect of Res on phosphorylation of p38 MPAK in LoVo cells

Fig 4　Effect of p38 MPAK on anti-proliferation effect of Res in LoVo cells

SB: SB203580，p38 MAPK inhibitor. Quantification results of crystal violet staining show the effect of p38 MAPK on the anti-proliferation effect of Res in LoVo cells.*P<0.05vscontrol;#P<0.05,##P<0.01vsRes.

2.5p38 MAPK對(duì)Res誘導(dǎo)LoVo細(xì)胞凋亡作用的影響Western blot分析結(jié)果顯示，Res(40 μmol·L-1)明顯增加Bad的水平，p38 MAPK抑制劑能減弱Res的這種作用；同時(shí)，Res明顯降低Bcl-2的蛋白水平， 而p38 MAPK抑制劑能增加Bcl-2的蛋白水平，并部分逆轉(zhuǎn)Res對(duì)Bcl-2表達(dá)的抑制作用(Fig 5)。結(jié)果提示，Res誘導(dǎo)LoVo細(xì)胞凋亡的作用也與促進(jìn)p38 MAPK磷酸化有關(guān)。

Fig 5　Effect of p38 MPAK on Res-induced apoptosis of LoVo cells

SB: SB203580，p38 MAPK inhibitor.

3　討論

結(jié)腸癌是臨床中常見(jiàn)的一種消化系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率和致死率均較高，僅次于肝癌、肺癌和胃癌，全球每年約有50萬(wàn)患者因結(jié)腸癌而死亡[1]。目前雖然對(duì)結(jié)腸癌的診斷技術(shù)和治療水平都已有較大提高，但其預(yù)后仍不太樂(lè)觀。因此，臨床急需開(kāi)發(fā)療效好而低毒性的抗腫瘤藥物。本研究表明，Res能明顯抑制人結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞增殖，并促進(jìn)其凋亡，這種作用可能與Res促進(jìn)p38 MAPK活化有關(guān)，但Res活化p38 MAPK的具體分子機(jī)制還不清楚。

結(jié)腸癌的發(fā)病原因目前仍不十分清楚，但研究報(bào)道其發(fā)生可能與多種信號(hào)異常或基因突變有關(guān)，如Wnt/β-catenin信號(hào)異常，以及PTEN、KRAS和RAF突變等[2-3,10]。除此之外，有絲分裂原活化激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)的功能失調(diào)可能也與結(jié)腸癌發(fā)生有關(guān)，MPAKs通過(guò)接受各種剌激，對(duì)細(xì)胞的多種生理功能發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。MAPKs包括JNK、p38 MAPK和ERK, 其中p38 MAPK受紫外線、滲透壓、熱休克和多種細(xì)胞因子等刺激而產(chǎn)生相應(yīng)效應(yīng)，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化、遷移、侵襲和死亡等，其功能異常與包括結(jié)腸癌在內(nèi)的多種腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展和患者的生存期明顯相關(guān)[11]。p38 MAPK可通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化與凋亡等過(guò)程，實(shí)現(xiàn)機(jī)體各組織相對(duì)穩(wěn)定，這種作用可能與其影響p53和PTEN等抑制基因有關(guān)[12-13]。文獻(xiàn)報(bào)道，姜黃醇可通過(guò)激活p38 MAPK抑制LoVo細(xì)胞增殖[14]。 本研究結(jié)果顯示，抑制p38 MAPK對(duì)LoVo細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用。提示，在結(jié)腸癌細(xì)胞中(或至少在LoVo細(xì)胞中)活化p38 MAPK能抑制結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)。p38 MAPK可能是治療結(jié)腸癌藥物的一個(gè)新靶點(diǎn)。

白藜蘆醇是來(lái)源于葡萄、虎杖、花生、桑葚等植物的一種天然多酚類物質(zhì)。近年研究表明，Res具有明顯抗腫瘤作用，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞增殖具有抑制作用，并能促進(jìn)其凋亡，如肺癌、肝癌、乳腺癌和結(jié)腸癌細(xì)胞等。Res的抗腫瘤作用可能與其增強(qiáng)p53的功能、誘導(dǎo)活性氧(reactive oxygen species，ROS)和抑制KRAS表達(dá)等有關(guān)。我們前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)Res對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖具有抑制作用，機(jī)制可能與促進(jìn)PTEN表達(dá)有關(guān)[3]。Res本身對(duì)p38 MAPK具有重要調(diào)節(jié)作用，而p38 MAPK功能的失調(diào)本身也與結(jié)腸癌有關(guān)[11],并且p38 MAPK可通過(guò)調(diào)節(jié)PTEN實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞增殖的調(diào)控[13]。因此，我們推測(cè)Res對(duì)LoVo細(xì)胞增殖的抑制作用可能也與調(diào)節(jié)p38 MAPK的活性有關(guān)。結(jié)果顯示，Res呈濃度依賴性方式抑制LoVo細(xì)胞增殖和促進(jìn)其凋亡，并且明顯增加p38 MAPK的磷酸化水平。提示，Res對(duì)LoVo細(xì)胞的增殖抑制作用很可能與促進(jìn)p38 MAPK磷酸化有關(guān)。進(jìn)一步分析表明，抑制p38 MAPK能減弱Res對(duì)LoVo細(xì)胞的增殖抑制和促進(jìn)凋亡的作用。以上結(jié)果證實(shí)，Res對(duì)LoVo細(xì)胞的增殖抑制作用至少與其促進(jìn)p38 MAPK磷酸化有關(guān)。但Res促進(jìn)p38 MAPK磷酸化的具體機(jī)制目前還不清楚。另有報(bào)道，抑制p38 MAPK能阻滯結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)[13]，即p38 MAPK對(duì)生長(zhǎng)的調(diào)控可能具有雙重作用。之所以產(chǎn)生不同的效應(yīng)，可能與細(xì)胞接受刺激的種類不同、細(xì)胞的種類不同以及腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境不同有關(guān)[15]。

本研究結(jié)果表明，Res能明顯抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖，這種作用可能與其促進(jìn)p38 MAPK磷酸化有關(guān)。因此，p38 MAPK可能是治療結(jié)腸癌藥物的潛在有效靶點(diǎn)。但是，Res促進(jìn)p38 MAPK磷酸化的詳細(xì)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。課題組將進(jìn)一步分析在結(jié)腸癌細(xì)胞中Res促進(jìn)p38 MAPK磷酸化可能機(jī)制，為將Res用于臨床治療結(jié)腸癌提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

(致謝:感謝研究生袁霜雪以及吳柯和孫文娟副教授對(duì)本實(shí)驗(yàn)的指導(dǎo)。)

[1]Tárraga López P J, Albero J S, Rodríguez-Montes J A. Primary and secondary prevention of colorectal cancer[J].ClinMedInsightsGastroenterol, 2014, 7:33-46.

[2]袁霜雪，王東旭，伍秋香，等. 白藜蘆醇抑制HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞增殖與Wnt/β-catenin的關(guān)系研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2015，31(4)：537-41.

[2]Yuan S X, Wang D X, Wu Q X, et al. Study on the relationship between anti-proliferation effect of resveratrol on HCT116 colon cancer cells and Wnt/β-catenin[J].ChinPharmacolBull, 2015, 31(4): 537-41.

[3]Liu Y Z, Wu K, Huang J, et al. The PTEN/PI3K/Akt and Wnt/β-catenin signaling pathways are involved in the inhibitory effect of resveratrol on human colon cancer cell proliferation[J].IntJOncol, 2014, 45(1):104-12.

[4]Dienstmann R, Salazar R, Tabernero J. Personalizing colon cancer adjuvant therapy: selecting optimal treatments for individual patients[J].JClinOncol, 2015, 33(16):1787-96.

[5]Sun Q L, Zhao C P, Wang T Y, et al. Expression profile analysis of long non-coding RNA associated with vincristine resistance in colon cancer cells by next-generation sequencing[J].Gene, 2015, 572(1):79-86.

[6]Wang K H, Lai Y H, Chang J C, et al. Germination of peanut kernels to enhance resveratrol biosynthesis and prepare sprouts as a functional vegetable[J].JAgricFoodChem, 2005, 53(2):242-6.

[7]Petrovski G, Gurusamy N, Das D K. Resveratrol in cardiovascular health and disease[J].AnnNYAcadSci, 2011, 1215:22-33.

[8]Singh C K, Ndiaye M A, Ahmad N. Resveratrol and cancer: challenges for clinical translation[J].BiochimBiophysActa, 2015,1852(6):1178-85.

[9]Carter L G, D′Orazio J A, Pearson K J. Resveratrol and cancer: focus oninvivoevidence[J].EndocrRelatCancer, 2014, 21(3):R209-25.

[10]Yoon H H, Shi Q, Alberts S R, et al. Racial differences in BRAF/KRAS mutation rates and survival in stage Ⅲ colon cancer patients[J].JNatlCancerInst, 2015,107(10).pii:djv186.

[11]Koul H K, Pal M, Koul S. Role of p38 MAP kinase signal transduction in solid tumors[J].GenesCancer, 2013, 4(9-10):342-59.

[12]Zheng F, Tang Q, Wu J, et al. p38α MAPK-mediated induction and interaction of FOXO3a and p53 contribute to the inhibited-growth and induced-apoptosis of human lung adenocarcinoma cells by berberine[J].JExpClinCancerRes, 2014,33:36.

[13]Cordero-Herrera I, Martín M A, Bravo L, et al. Epicatechin gallate induces cell death via p53 activation and stimulation of p38 and JNK in human colon cancer SW480 cells[J].NutrCancer, 2013, 65(5):718-28.

[14]Ittner A, Block H, Reichel C A, et al. Regulation of PTEN activity by p38δ-PKD1 signaling in neutrophils confers inflammatory responses in the lung[J].JExpMed, 2012, 209(12):2229-46.

[15]Igea A, Nebreda A R. The stress kinase p38α as a target for cancer therapy[J].CancerRes,2015, 75(19):3997-4002.

Anti-proliferation effect of resveratrol and p38 MAPK in human colon cancer cells

CHEN Qian-zhao1，2, ZENG Yu-hua1，2, SHAO Ying1，2,LI Yang1，2,REN Wen-yan1，2,ZHOU Lin-yun1，2, ZHOU Yi1，2,LIU Rong-xing1，2,HE Bai-cheng1，2

(1.ChongqingKeyLabrotoryofBiochemistryandMolecularPharmacology,Chongqing400016,China;2.DeptofPharmacology,PharmacySchoolofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China)

AimTo investigate the relationship between the anti-proliferation effect of resveratrol (Res) and p38 MAPK in colon cancer cells.MethodsCrystal violet staining, Western blot and flow cytometry were employed to analyze the effect of Res on the proliferation in LoVo cells. Western blot assay was used to detect the effect of Res on the apoptosis of LoVo cells and the phosphorylation of p38 MAPK. Crystal violet staining and Western blot assay were used to analyze whether p38 MAPK was involved in the Res-induced proliferation inhibition and apoptosis in LoVo cells.ResultsRes inhibited the proliferation, arrested cell cycle at S phase, and increased the protein level of PCNA in LoVo cells apparently. Res increased the level of Bad in LoVo cells, but decreased the level of Bcl-2. Although Res exerted no substantial effects on total level of p38 MAPK, it markedly increased the phosphorylation level of p38 MAPK in LoVo cells. p38 MAPK inhibitor promoted the proliferation, and decreased the anti-proliferation effect of Res on LoVo cells. Moreover, the effects of Res on the level of Bcl-2 and Bad were both reduced by the p38 MAPK inhibitor.ConclusionsRes can inhibit the proliferation of LoVo cells, which may be partly mediated by promoting the phosphorylation of p38 MAPK.

resveratrol; colon cancer; LoVo cells; anti-proliferation; apoptosis; p38 MAPK

2016-03-17,

2016-04-25

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81572226)

陳前昭(1990-)，女，碩士生，研究方向：分子藥理學(xué)；

何百成(1972-)，男，博士，教授，研究方向：分子藥理學(xué)和干細(xì)胞生物學(xué),通訊作者，E-mail: hebaicheng99@yahoo.com

A

1001-1978(2016)08-1110-05

R284.1；R329.24；R345.57；R735.35

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-7-19 10:43網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160719.1043.032.html