青黛新三萜物質合劑抗高危HPV病毒臨床療效觀察

帥麗華，胡志堅，李婷，王敏，黎美仁，周英棠，鄒志梅，陳萍

（1、九江學院附屬醫院檢驗科，江西 九江33200；2、九江學院附屬醫院病理科，江西 九江33200；3、九江學院省重點實驗中心，江西 九江33200；4、九江學院附屬醫院婦產科，江西 九江33200）

青黛新三萜物質合劑抗高危HPV病毒臨床療效觀察

帥麗華1，胡志堅1，李婷2，王敏1，黎美仁2，周英棠3，鄒志梅4，陳萍4

（1、九江學院附屬醫院檢驗科，江西 九江33200；2、九江學院附屬醫院病理科，江西 九江33200；3、九江學院省重點實驗中心，江西 九江33200；4、九江學院附屬醫院婦產科，江西 九江33200）

目的 觀察青黛新三萜物質合劑抗高危HPV病毒的治療效果及其在預防宮頸癌病變發展中的作用。方法 高頻超聲提取青黛新三萜物質，將其與枯礬、冰片聯合制成合劑，觀察其抗高危HPV病毒效果及對宮頸上皮內瘤變（CIN）及宮頸糜爛治療的有效率并與干擾素對比。結果 青黛新三萜物質合劑組及干擾素組治療3月后HPV-DNA轉陰率分別為87.5%、71.4%，對CIN治療有效率分別為75.0%、44.0%，對宮頸糜爛治療有效率90.6%、47.1%。青黛新三萜物質合劑組高危HPVDNA轉陰患者，治療結束后3個月、6個月、12個月再復查高危HPV-DNA均為陰性。結論 青黛新三萜物質合劑是抗高危HPV病毒安全有效的中藥制劑，它在預防宮頸癌的發生、治療宮頸糜爛方面有確切的臨床價值。

青黛新三萜物質；高危HPV病毒；宮頸上皮內瘤變；宮頸癌；治療；預防

宮頸癌是一種嚴重危害婦女健康和生命的生殖系統惡性腫瘤，宮頸上皮內瘤變（CIN）和宮頸癌的發病與人乳頭瘤病毒（HPV）感染密切相關，持續的高危型HPV感染是CINⅢ和宮頸癌發病的必要條件［1］。HPV病毒有一百多種血清型，導致宮頸癌的是HPV16，18，31，33，45，51，52，56，58，59，68等血清型，我們統稱為高危HPV病毒。文獻報道：隨CIN病變程度的加重，高危HPV感染率增高，且病毒含量越高，患高度病變的可能性越大［2］。因此有效的預防和治療生殖道高危HPV病毒感染是預防宮頸癌的有效方法。目前臨床上都是用干擾素治療高危型HPV感染，也有用中藥榆柏散聯合干擾素栓治療高危型HPV感染慢性子宮頸炎的報道［3］，其HPV轉陰率為70.5%。青黛是中藥復方中常用的一味藥，具有止血、解熱、抗炎、抑菌和抗病毒作用。《本草綱目》記載青黛：“去煩熱，癍瘡，陰瘡，殺惡蟲。”青黛外敷能斂濕、消腫痛、解瘡毒、拔毒外出。常被外用于口舌生瘡、外陰潰瘍、濕疹、帶狀皰疹等疾病［4］。本研究從青黛中分離純化出一個新的三萜化合物，觀察其抗高危HPV病毒效果，希望在中醫藥領域中尋求一個有效易行治療宮頸高危HPV病毒感染，阻斷向宮頸癌病變發展的新途徑。

1　資料與方法

1.1病例選擇宮頸炎、宮頸癌等臨床診斷標準符合2008年《婦產科學》（第7版）診斷標準［5］。細胞學診斷采用目前國際統一的TBS診斷系統［6］。納入病例：⑴年齡20～59歲有性生活史的女性。⑵臨床檢查符合炎癥、CIN分級診斷標準并且高危HPV陽性者。⑶就診前2月宮頸局部未進行物理治療，前2周內未進行藥物及其他相關治療。排除標準：⑴合并霉菌性陰道炎或嚴重的盆腔炎患者。⑵合并嚴重的心、肝、腎、血液系統疾病及精神病患者。⑶妊娠期或哺乳期婦女。

1.2病例資料研究對象為2014年1月至2015 年3月我院婦科患者97例，均為高危HPV-DNA陽性，經宮頸液基細胞學檢查（LPT）報告為炎癥、非典型鱗狀上皮意義不明（ASCUS）或低度鱗狀上皮內病變 （LSIL），并行病理組織學檢查診斷為炎癥、CINⅠ、CINⅡ的病例。按就診順序隨機分為青黛新三萜物合劑組、干擾素組和未治療的高危HPV陽性組。青黛新三萜物合劑組32例，其中24例為CIN患者，32例均合并有不同程度宮頸糜爛，年齡（36.4±11.3）歲。干擾素組35例，其中25例為CIN患者，34例均合并不同程度宮頸糜爛，年齡（35.6±10.8）歲。對照組：未治療的高危HPV陽性組30例患者，其中CIN者19例，25例均合并宮頸糜爛，年齡（35.1±10.6）歲。三個組一般資料比較，差異無統計學意義。

1.3研究方法

1.3.1實驗步驟宮頸分泌物高危HPV-DNA檢測（Hybrid CaptureⅡ簡稱：HC2）陽性，同時進行宮頸液基細胞學檢查（TCT）異常或炎癥的患者，行陰道鏡檢查，對醋白試驗陽性 （5%冰醋酸作用下持續3～5min呈瓷白色混濁不透明）及可疑部位進行宮頸活檢，經病理報告為不典型鱗狀上皮細胞（ASCUS）或CINⅠ、CINⅡ者入選，并給予相應治療，完成療程后3個月采取同樣方法復查。

1.3.2檢查項目 ⑴宮頸液基細胞學檢查LPT，TBS分級系統進行診斷報告。⑵高危HPV-DNA檢測：采用原位雜交捕獲HPV-DNA檢測技術，HC2（美國QIAGEN Gaither-sburg公司產品，獲得美國FDA認證，歐洲CE認證，中國藥監局認證產品），該實驗能同時檢測 13種高危型 HPV（16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68）病毒。（3）病理組織學檢查：在電子陰道鏡輔助下對宮頸局部醋白試驗陽性部位及可疑處取組織活檢，制成3μm厚切片，蘇木素伊紅染色（HE染色）后由病理學專家診斷。

1.3.3青黛新三萜物質合劑的配制與儀器青黛粉、枯礬、冰片三味藥材購自九江開心人大藥房，將青黛粉以95%乙醇超聲提取3次，每次15min，合并三次提取液濃縮至浸膏，得到青黛新三萜物質。將枯礬、冰片研成極細末，由青黛新三萜物質、枯礬、冰片按5：2：1的比例配制后加75%酒精浸泡1h，再55℃烘烤1h，室溫自然冷卻，然后冷凍干燥制成青黛新三萜物質合劑。儀器：摩爾實驗室超純水設備（重慶摩爾生物技術有限公司），立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫療器械廠），西門子冰箱，高頻數控超聲波提取儀KQ-500TDV（昆山市超聲儀器有限公司），旋轉蒸發儀 （萊伯泰科EV341），真空冷凍干燥機（北京松源華興科技發展有限公司）。

1.4治療方法

1.4.1藥物和使用方法、注意事項⑴青黛新三萜物質合劑：于月經干凈3d開始，每晚睡前先清潔會陰部，戴無菌手套用帶線無菌棉球醮青黛新三萜物質合劑0.3～0.4g涂敷于宮頸口及其周圍，有宮頸糜爛者，無菌棉球放置一晚第二起床時再用線拉出，每晚一次，每個月經間期中的20d為一療程。⑵重組人干擾素α2b陰道泡騰膠囊（辛復寧）：有效成分為重組人干擾素α2b，每粒80萬IU，月經干凈3d開始于睡前1粒置入陰道后穹隆處，每日一次，每次一粒，10次為一療程，每月連續治療二個療程，上海華新生物高技術有限公司生產。二組治療患者治療期間禁止坐浴和性生活，月經期停止上藥。治療組每晚清潔貼身內褲，并用2%優氯凈浸泡1晚，消毒清洗處理。對患者配偶尿道口分泌物進行高危HPV-DNA檢查，若有陽性者，徹底清潔外生殖器及會陰部，并碘伏消毒處理，由泌尿科醫生治療處理。

1.4.2觀察指標及療效判定用藥治療的二組患者，每月于下次月經干凈3d來院復查1次，HC2復查高危HPV-DNA，以3月為限。觀察患者白帶情況，宮頸局部糜爛的好轉情況，有無過敏情況，血、尿常規，肝、腎功能。定期電話隨診觀察其白帶情況及臨床反應。根據病理組織學診斷判定CIN的療效；參照《中藥新藥臨床研究指導》［7］判定宮頸糜爛療效。對照組于3月后復查高危HPV-DNA陽性情況。

1.4.3觀察復發情況青黛新三萜物質合劑組于治療結束后3個月、6個月、12個月，取宮頸上皮細胞HC2再復查高危HPV-DNA，觀察高危HPV是否復發。

1.5統計學方法應用SPSS 17.0統計軟件進行統計分析。計數資料用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1臨床療效⑴青黛新三萜物質合劑組及干擾素組HPV-DNA轉陰率分別為 87.5%（28/32）、71.4%（25/35）（χ2=2.612，P=0.106）。見表1。⑵以治療后CINⅡ轉為CINⅠ或ASCUS，或者CINⅠ轉為ASCUS或炎癥或無上皮內病變等，由高級向低轉化為對CIN治療有效，青黛新三萜物質合劑組及干擾素組對CIN治療有效率分別為75.0%（18/24）、44.0%（11/25）（χ2=4.873，P＜0.05）。⑶青黛新三萜物質合劑組及干擾素組對宮頸糜爛治療有效率90.6% （29/32）、47.1%（16/34）（χ2=14.422，P＜0.001）。見圖1。

表1　治療組及對照組HPV-DNA轉陰率比較

2.2青黛新三萜物質合劑組28例高危HPV-DNA轉陰患者，于治療結束后3個月、6個月、12個月，取宮頸上皮細胞 HC2再復查高危HPV-DNA，結果均為陰性。

圖1　二類藥治療不同疾病的有效率

2.3不良反應二組治療組患者均未發現肝、腎功能異常者，血、尿常規亦均在正常范圍內。也未發現青黛新三萜物質合劑有過敏反應及其他任何不良反應。

3　討論

近年來，生殖道HPV感染日益增加，其臨床感染與宮頸上皮內瘤變和宮頸癌的相關性已成為倍受醫學界關注的焦點之一。國內有報道高危HPV、液基薄層細胞學配合陰道鏡檢查對宮頸癌前病變篩查的必要性及診斷價值［8］及類似報道［9，10］。由于女性生殖道生理解剖結構特殊，因此是HPV易感部位，同時也是其他婦科病原菌的寄生之處［11］。也有報道淋病奈瑟菌、沙眼衣原體或解脲支原體陽性是高危型HPV感染的獨立危險因素［12］，說明高危型HPV感染是建立在宮頸炎癥基礎之上的，而不是孤立存在的。青黛有清熱解毒、抗病毒、涼血散結消腫功效，有用青黛與重樓、冰片一起外敷用于抗流行性腮腺炎病毒的報道［13］，亦有用青黛散治療復發性口腔潰瘍的報道［14］，青黛含靛藍、靛玉紅等成分，靛玉紅已證實可抑制多種細胞的DNA合成，對角質形成細胞的增殖分化起調控作用［15］。而且我們還發現近幾年來在臨床上有口服復方青黛膠囊治療重癥牛皮癬的情況，可見青黛的功用在臨床上越來越受到重視。本研究為了觀察青黛新三萜物質抗高危HPV病毒的治療效果并加速宮頸糜爛等瘡面的愈合，以阻斷向宮頸癌發展的途徑，由醫療與實驗中心多部門聯合，超聲提取青黛新三萜物質，并將青黛新三萜物質與枯礬、冰片聯合制成合劑，用于感染高危HPV病毒、宮頸低級別病變患者的治療，經過3個月的臨床觀察，青黛新三萜物質合劑治療組高危HPV轉陰率達到87.5%，其療效雖然與目前治療HPV感染常用藥物干擾素（總有效率71.4%）比較無明顯差異，但都可用于高危型HPV病毒的治療，且青黛新三萜物質合劑可加速宮頸糜爛等瘡面的愈合，其療效甚至更好。28例高危HPV-DNA轉陰患者，于治療結束后3個月、6個月及12個月再復查高危HPV-DNA，結果均為陰性，療效確切，同時，青黛新三萜物質合劑治療CIN的總有效率也達到75%，效果與干擾素比較有明顯差異（P＜0.05）。治療CIN的有效與高危HPV-DNA陰轉聯合阻斷了向宮頸癌病變發展的途徑，說明青黛新三萜物質合劑的使用對預防宮頸癌的發生有確切的臨床價值。藥方中三種中藥成分的作用相輔相成，青黛新三萜物質在抗病毒、散結消腫和抗細胞間變方面起主要作用，而枯礬起燥濕、止血、解毒、殺蟲的作用，冰片具有涼血斂瘡、散熱宣毒、消腫止痛、防腐生肌，促進傷口愈合的效用。

10例干擾素治療失敗者，改用本研究組方法青黛新三萜物質合劑治療三月，9例高危HPVDNA轉陰，效果顯著。

上述研究也表明：青黛新三萜物質合劑作為中藥制劑，對于宮頸糜爛治療3月的總有效率達90.6%，與干擾素比較有顯著的差異（P＜0.001）。可見干擾素在治療宮頸糜爛的療效顯然不如青黛新三萜物質合劑。

綜上所述，我們選擇青黛新三萜物質合劑治療高危型HPV感染和輕度CIN取得良好的效果，同時取得了青黛新三萜物質合劑對宮頸糜爛的明顯療效，治療期間未見肝、腎功能、血細胞等異常，是較為安全的中藥制劑。尤其對干擾素治療失敗者，它是很好的替代藥物。

近年來，宮頸癌發生率有所下降，與通過高危HPV檢測來篩查宮頸癌及癌前病變的廣泛應用是分不開的［16］。對于CINⅠ合并有高危HPV病毒持續陽性患者，臨床在抗HPV治療同時常選用利普刀手術治療；CINⅡ合并有高危HPV病毒持續陽性患者，臨床可選用利普刀手術或宮頸錐切術進行治療；對于CINⅡ級累及腺體或CINⅢ級及以上病變的治療，臨床常采用宮頸錐切術，宮頸次全切除術等外科手術進行干預治療，青黛新三萜物質合劑作為抗高危HPV病毒的較有效藥物，進行術后或放化療的聯合應用，不失為一種好的治療措施。

本研究由于所檢測試驗復雜，加上病人依從性和自愿的原則所限，樣本例數有限，還需要更大樣本量的支持。

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The observation of clinical therapeutic effect of the indigo naturalis new triterpene substances against high-risk HPV virus

SHUAI Lihua1，HU Zhijian1，LI Tin2，WANG Min1，LI Meiren2，ZHOU Yingtang3，ZOU Zhimei4，CHEN Ping4.1.Department of Clinical Laboratory，Jiujiang University Hospital，Jiujiang Jiangxi 332000，China；2.Department of Clinical Pathology，Jiujiang University Hospital，Jiujiang Jiangxi 332000，China；3.Key Laboratory of Provincial Experiment Center，Institute of Medicine and Life Science of Jiujiang University，Jiujiang Jiangxi 332000，China；4.Department of gynaecology and obstetrics，Jiujiang University Hospital，Jiujiang Jiangxi 332000，China.

Objective To observe the effect of the indigo naturalis new triterpene substances against high-risk HPV virus and the function in preventing the occurrence and development of cervical cancer.Methods We extracted the indigo naturalis new triterpene substances by high frequency ultrasound and made mixture with dried alum and bomeol.Then we observed its role against high-risk HPV virus and the effective rates of treatment to cervical intraepithelial neoplasias（CIN）and cervical erosion，with comparison of treatment by interferon.Result The seroconversion rate of high-risk HPV DNA，when treated by Indigo naturalis new triterpene substances 3 months later was 87.5%，and the rate was 71.4%when treated by interferon 3 months later；The effective rate of CIN，when treated by Indigo naturalis new triterpene substances 3 months later was 75.0%，and the rate was 44.0% when treated by interferon 3 months later；The therapeutical effective rate of cervical erosion，when treated by Indigo naturalis new triterpene substances 3 months later was 90.6%，and the rate was 47.1%when treated by interferon 3 months later.The patients who were positive for high-risk HPV DNA，were treated by indigo naturalis new triterpene substances，then turned to negative.3 months，6 months and 12 months later，the results of the high-risk HPV DNA were still negative.Conclusion Indigo naturalis new triterpene substances which are traditional Chinese medicine，can effectively treat against high-risk HPV virus.It has a precise clinical value to prevent cervical cancer，and to treat cervical erosion.

Indigo naturalis new triterpene substances；High-risk HPV virus；Cervical intraepithelial neoplasias（CIN）；Cervical cancer；Treatment；Preventation

R737.33，R730.231+.2

A

1674-1129（2016）04-0442-04

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.04.010

九江市科技支撐計劃項目九財教〔2013〕64號：130

帥麗華，女，1972年4月出生，學士，副主任技師/講師，主要從事病原微生物檢測和抗感染治療。Tel：0792-2180124，E-mail：liwa33@163.com。

周英棠，男，1981年10月出生，博士，研究方向為分子生物學及蛋白質組學Tel：18607922163，E-mail：18607922163@163. com。

（2016-05-11；

2016-07-28）