喘息患兒痰液基質(zhì)金屬蛋白酶-9測定的臨床意義

鄧?yán)蚶颍巍◎敚砥G輝（.郴州市第一人民醫(yī)院北院（兒童醫(yī)院）兒科，湖南43000；.郴州市第一人民醫(yī)院中心醫(yī)院，湖南43000）

喘息患兒痰液基質(zhì)金屬蛋白酶-9測定的臨床意義

鄧?yán)蚶?，何驍2，彭艷輝1
（1.郴州市第一人民醫(yī)院北院（兒童醫(yī)院）兒科，湖南423000；2.郴州市第一人民醫(yī)院中心醫(yī)院，湖南423000）

目的探討誘導(dǎo)痰液基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的表達(dá)變化在喘息兒童氣道中的作用及意義。方法選擇2013年11月至2014年11月郴州市兒童醫(yī)院收治的符合喘息性支氣管炎診斷標(biāo)準(zhǔn)的喘息性支氣管炎患兒90例，其中，按喘息發(fā)作次數(shù)分為喘息Ⅰ組（發(fā)作1次）30例和喘息Ⅱ組（發(fā)作3次或3次以上）60例，后者按喘息從首次至末次發(fā)作的時間長短分為喘息Ⅱa組（發(fā)作時間小于1年）及喘息Ⅱb組（發(fā)作時間大于或等于1年），各30例。另選取輕度支氣管哮喘患兒30例（哮喘組），同期健康體檢兒童30例（對照組）。采用誘導(dǎo)痰技術(shù)及雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測各組誘導(dǎo)痰液MMP-9。結(jié)果在喘息發(fā)作時，喘息各組痰液MMP-9水平明顯高于喘息停止后及對照組，且喘息Ⅰ組明顯低于喘息Ⅱ組和哮喘組，喘息Ⅱa組低于喘息Ⅱb組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。喘息發(fā)作時及停止后，喘息Ⅱb組與哮喘組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。在喘息停止后，喘息Ⅰ組MMP-9水平迅速下降，接近對照組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論MMP-9參與喘息性支氣管炎和哮喘的病理過程；結(jié)合臨床病史，動態(tài)觀察痰液MMP-9水平，可能會對喘息性支氣管炎發(fā)展成哮喘的早期診治有一定價值。

基質(zhì)金屬蛋白酶9；哮喘；支氣管炎；痰；兒童

由于嬰幼兒時期特殊的生理解剖和免疫特點，致喘因素較復(fù)雜。雖嬰幼兒喘息性疾病與支氣管哮喘關(guān)系密切［1］，但二者發(fā)病的內(nèi)在聯(lián)系尚不清楚。目前尚無一種確切方法可以預(yù)測哪些患兒會有持續(xù)性喘息，因此，對哮喘發(fā)生的正確預(yù)測及早期干預(yù)具有重要意義。本研究對收治的90例喘息性支氣管炎患兒誘導(dǎo)痰液基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）水平進(jìn)行檢測，并與同期哮喘者對照，旨在探討MMP-9對預(yù)測喘息性支氣管炎發(fā)展成哮喘的可能價值。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2013年11月至2014年11月郴州市兒童醫(yī)院收治的符合喘息性支氣管炎診斷標(biāo)準(zhǔn)［2］的喘息性支氣管炎患兒90例：按喘息發(fā)作次數(shù)分為喘息Ⅰ組（發(fā)作1次）30例，其中男15例，女15例，年齡13個月至3歲；喘息Ⅱ組（發(fā)作3次或3次以上）60例。后者按喘息從首次至末次發(fā)作的時間長短分為喘息Ⅱa組（發(fā)作時間小于1年）30例，其中男14例，女16例，年齡14個月至3歲；喘息Ⅱb組（發(fā)作時間大于或等于1年）30例，其中男16例，女14例，年齡15個月至3歲。另選取輕度支氣管哮喘患兒30例（哮喘組），其中男16例，女14例，年齡2～4歲，均符合兒童支氣管哮喘診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。對照組30例系同期健康體檢兒童，其中男14例，女16例；年齡2～3歲。以上各組在性別、年齡方面比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1痰液采集參照歐洲呼吸協(xié)會誘導(dǎo)痰液指導(dǎo)小組的指南［4］并加以改進(jìn)。對照組、哮喘組和喘息組急性期（入院24 h內(nèi)喘息發(fā)作時）及臨床緩解期（臨床癥狀停止及哮鳴音消失后5 d，即喘息停止后）進(jìn)行誘導(dǎo)痰，具體方法如下：受試者清潔口鼻后吸入200 μg沙丁胺醇，用醫(yī)用面罩式超聲霧化器，直接吸入3%高滲鹽水，流量為1 L/min，誘導(dǎo)30 min，誘導(dǎo)過程中隨時將痰咳出并置于干凈、無菌的帶刻度容器中。收集的痰液在1 h內(nèi)處理，處理前4℃冰箱保存。

1.2.2痰液處理挑取含黏液的痰栓（顯微鏡下觀察鱗狀上皮細(xì)胞小于5%并可見肺巨噬細(xì)胞時認(rèn)為是合格痰液［5］），加入2倍痰量的0.1%二硫蘇糖醇，在旋渦式混合器上混勻后置于37℃恒溫水浴箱孵育15 min，再加入2倍痰量的PBS后繼續(xù)水浴5 min，離心機(jī)2 000 r/min離心10 min，收集上清液，-70℃冰箱保存待測。

1.2.3MMP-9檢測采用雙抗體夾心ABC-ELISA法檢測各組痰上清液MMP-9。嚴(yán)格按說明書步驟操作（試劑盒由深圳晶美生物工程有限公司提供）。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗；計量資料以±s表示，比較前均進(jìn)行正態(tài)檢驗和方差齊性檢驗，兩樣本均數(shù)比較依據(jù)方差齊性結(jié)果采用t檢驗或t′檢驗，多個樣本均數(shù)比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)　果

在喘息發(fā)作時，喘息各組MMP-9水平明顯高于喘息停止后及對照組，且喘息Ⅰ組明顯低于喘息Ⅱ組和哮喘組，喘息Ⅱa組低于喘息Ⅱb組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。喘息發(fā)作時及停止后，喘息Ⅱb組與哮喘組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；在喘息停止后，喘息Ⅰ組MMP-9水平迅速下降，接近對照組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1　各組患兒痰液MMP-9水平比較（±s，ng/mL）

表1　各組患兒痰液MMP-9水平比較（±s，ng/mL）

注：與同組喘息停止后比較，aP＜0.01；與對照組同時間點比較，bP＜0.01；與喘息Ⅰ組比較，cP＜0.01；與喘息Ⅱa組比較，dP＜0.01；與哮喘組同時間點比較，eP＞0.05。

組別喘息Ⅰ組喘息Ⅱa組喘息Ⅱb組哮喘組對照組n 喘息發(fā)作時　喘息停止后3 0 3 0 3 0 3 0 3 0 7 2 . 5 1 ± 0 . 8 1ab1 0 2 . 2 0 ± 0 . 7 7abc1 3 2 . 8 9 ± 0 . 5 0abcde1 3 3 . 2 0 ± 0 . 8 0abc4 1 . 3 4 ± 0 . 9 5 4 1 . 8 3 ± 0 . 9 7b7 2 . 3 7 ± 0 . 7 2 1 0 3 . 2 6 ± 0 . 7 1e1 0 3 . 8 3 ± 5 . 3 8 4 1 . 3 4 ± 0 . 9 5

3　討　論

越來越多的流行病學(xué)資料顯示，喘息性支氣管炎與哮喘二者存在相似的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制，均存在不同程度的氣道非特異性炎癥及氣道高反應(yīng)性，在刺激因素的作用下氣道平滑肌過度收縮，造成支氣管狹窄，導(dǎo)致喘息發(fā)作，部分病例遠(yuǎn)期可能發(fā)展為支氣管哮喘［6］。哪些指標(biāo)能預(yù)測將來會發(fā)生哮喘，這是當(dāng)前研究中的熱點問題。近年來，MMPs在喘息性疾病中的研究頗為引人注目。

MMPs由20多種高度保守的鋅、鈣離子依賴性蛋白內(nèi)切酶所組成。作為可降解細(xì)胞外基質(zhì)的大多數(shù)蛋白，MMPs在介導(dǎo)細(xì)胞移行和細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)方面具有獨特的作用。MMP-9是呼吸系統(tǒng)疾病中主要的MMP，與哮喘的關(guān)系最密切［7-9］。其不僅能降解呼吸道及肺的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，而且可調(diào)節(jié)其他細(xì)胞因子及蛋白酶。MMP-9的增加，可導(dǎo)致氣道損傷，促進(jìn)炎癥細(xì)胞到達(dá)間質(zhì)和氣道壁，刺激、激活基質(zhì)的生長因子，促進(jìn)血管生成、成纖維細(xì)胞增生和分解呼吸道和肺內(nèi)的結(jié)構(gòu)復(fù)合物細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，因此參與呼吸道和肺的重建［10］。本研究結(jié)果顯示，在喘息發(fā)作時，喘息各組MMP-9水平明顯高于喘息停止后及對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），可知MMP-9水平升高是反映喘息急性發(fā)作及氣道炎癥變化較為客觀的指標(biāo)，與Belleguic等［11］研究一致。另外，支氣管哮喘作為慢性氣道炎癥，即使在無癥狀的穩(wěn)定期氣道炎癥仍存在，以致喘息反復(fù)發(fā)作和氣道重塑［12］。本研究結(jié)果顯示，喘息Ⅰ組MMP-9水平明顯低于喘息Ⅱ組和哮喘組，且喘息Ⅱa組低于喘息Ⅱb組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），而喘息Ⅱb組與哮喘組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明MMP-9作為氣道炎癥標(biāo)志物，參與了喘息的發(fā)病過程，其水平的高低可能與喘息發(fā)作頻率和發(fā)作的時間長短有關(guān)。在喘息停止后，喘息Ⅰ組MMP-9水平迅速下降，接近對照組，喘息Ⅱb組與哮喘組MMP-9水平也較接近，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明無論是喘息正在發(fā)作，還是喘息停止，氣道炎癥依然持續(xù)存在。同時也提示喘息發(fā)作3次以上、反復(fù)喘息發(fā)作時間長達(dá)1年以上的喘息性支氣管炎和支氣管哮喘之間可能存在某些共同的發(fā)病機(jī)制。或許是同一疾病在不同階段的表現(xiàn)，二者均有可能導(dǎo)致氣道重塑的發(fā)生。

綜上所述，檢測痰上清液MMP-9水平，可作為喘息性疾病氣道慢性炎癥特異性指標(biāo)之一。在喘息停止后，如喘息性支氣管炎的痰上清液MMP-9水平持續(xù)升高，可作為其發(fā)展成哮喘的指標(biāo)之一，同時應(yīng)進(jìn)行早期干預(yù)治療。

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1009-5519（2016）05-0759-02

（2015-12-28）