HPLC法測定注射用雷貝拉唑鈉含量

王淑玲，倪　輝，蘇　梅，周玉香，李敬芝，何　楊（江蘇柯菲平醫藥股份有限公司，江蘇南京210016）

HPLC法測定注射用雷貝拉唑鈉含量

王淑玲，倪輝，蘇梅，周玉香，李敬芝，何楊（江蘇柯菲平醫藥股份有限公司，江蘇南京210016）

目的建立一種高效液相色譜（HPLC）法，測定注射用雷貝拉唑鈉的含量。方法采用HPLC法，以0.01mol/L磷酸氫二鉀緩沖液（pH 7.0）-甲醇（53∶47）作為流動相，檢測波長為284 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為25℃，測定注射用雷貝拉唑鈉的含量。結果雷貝拉唑鈉濃度在19.968～199.680 μg/mL時線性關系良好［Y=21.803 5X-17.373 4，相關系數（r）=1.000 0］，注射用雷貝拉唑鈉高、中、低3種濃度平均回收率（n=9）為99.9%［相對標準偏差（RSD）為0.08%］，中間精密度試驗的RSD為0.30%（n=6），重復性和耐用性良好。HPLC法測得3批（S28-140101、S28-140102、S28-140103）注射用雷貝拉唑鈉的含量分別為101.3%、99.7%、100.1%。結論HPLC法簡便、靈敏、準確，可作為注射用雷貝拉唑鈉含量的檢驗方法。

苯咪唑類；藥用制劑；色譜法，高壓液相；質量控制；雷貝拉唑鈉

雷貝拉唑鈉為苯并咪唑類化合物［1-3］，是日本衛材公司發現和開發的質子泵抑制劑［4］，1997年在日本首先上市，1999年在美國和瑞典上市。雷貝拉唑鈉與第一代質子泵抑制劑相比具有明顯的優點［5-9］。注射用雷貝拉唑鈉由印度Eisai公司開發，于2004年5月在印度上市［10］，批準適應證為不適合口服雷貝拉唑的患者。注射用雷貝拉唑鈉可以用于：（1）口服雷貝拉唑的序貫性療法，如以前口服本品，現在由于某種原因不能口服的患者；（2）出血性或糜爛性活動性十二指腸潰瘍；（3）出血性或糜爛性活動性胃潰瘍；（4）腐蝕性和潰瘍性胃食管反流病（GERD）的短期治療；（5）預防酸增多；（6）重癥黏膜損傷的急性治療；（7）卓-艾氏（Zollinger-Ellison）綜合征。本文旨在建立一種高效液相色譜（HPLC）法，以測定注射用雷貝拉唑鈉的含量。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1儀器Agilent1260液相色譜儀（安捷倫公司，VWD紫外檢測器）；XS105、XS3DU型電子天平（梅特勒-托利多公司）；PHS-3C pH計（雷磁-上海儀電科學儀器股份有限公司）。儀器1：Agilent-1260（紫外檢測器，工作站：OpenLAB）；儀器2：島津LC-20AVP（泵LC-20AT，檢測器SPD-20A，工作站：LCSolution）。

1.1.2試劑雷貝拉唑鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100658-201203，含量：100%）；注射用雷貝拉唑鈉（自制，批號：S28-140101、S28-140102、S28-140103）；雷貝拉唑鈉（自制，批號：RL-131201）；甲醇為色譜純；水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.2方法

1.2.1色譜條件［11-12］色譜柱：AgilentExtend-C18150.0mm× 4.6 mm，3.5 μm（安捷倫公司）；色譜柱1、2、3分別為不同批號的Agilent Extend-C18柱。以0.01 mol/L磷酸氫二鉀緩沖液（調節pH值至7.0）-甲醇（53∶47）為流動相；檢測波長為284nm；流速為1.0mL/min；柱溫為25℃。

1.2.2溶液的配制

1.2.2.1系統適用性溶液取雷貝拉唑鈉與雜質D（過氧化物砜）適量，用溶劑［0.001 mol/L氫氧化鈉溶液-甲醇（1∶1）］溶解并稀釋制成每毫升約含雷貝拉唑鈉100 μg，至少含雜質D 1 μg的混合溶液。

1.2.2.2對照品溶液雷貝拉唑鈉對照品適量，精密稱定，定量稀釋制成每毫升約含100 μg的溶液。

1.2.2.3供試品溶液取本品5瓶，將其內容物混合均勻，精密稱取適量（約相當于雷貝拉唑鈉2 mg），置于20 mL容量瓶中，加溶劑［0.001 mol/L氫氧化鈉溶液-甲醇（1∶1）］溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.2.2.4空白對照溶液取除雷貝拉唑鈉外其他組分，按處方工藝制成空白樣品，按1.2.2.3項下方法制成空白對照溶液。

1.2.3波長選擇稱取雷貝拉唑鈉對照品及本品適量，分別用溶劑溶解并稀釋制成約20 μg/mL溶液，根據《中華人民共和國藥典》紫外-可見分光光度法［13］附錄23，掃描范圍200～400 nm，掃描間隔為0.2 nm，同法對空白溶劑進行掃描，記錄最大吸收波長。

1.2.4系統適用性試驗精密量取1.2.2.1項下的系統適用性溶液20 μL，注入液相色譜儀，考察理論板數、分離度。精密量取系統適用性溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，理論塔板數按雷貝拉唑鈉計算應不低于2 000，雷貝拉唑與雜質D峰分離度應不小于1.5。

1.2.5空白干擾專屬性試驗取1.2.2.1項下的系統適用性溶液，分別取溶劑及空白輔料溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.6線性與范圍［14］取雷貝拉唑鈉對照品適量，精密稱定，加溶劑溶解并稀釋制成每毫升約含雷貝拉唑鈉1 mg的溶液作為貯備液，分別精密量取貯備液1、2、4、5、6、10 mL置50 mL容量瓶中，加溶劑稀釋至刻度，搖勻得線性溶液1、2、3、4、5、6。在1.2.1色譜條件下，精密量取上述溶液各10 μL，注入液相色譜儀（儀器1），記錄色譜圖。以雷貝拉唑鈉濃度為X軸、峰面積為Y軸進行回歸計算，繪制回歸曲線，得出回歸方程。

1.2.7進樣精密度取1.2.6項下的溶液4作為對照品溶液，連續進樣6針，計算峰面積的相對標準偏差（RSD），測定進樣精密度。

1.2.8準確度試驗［14］按處方量（規格：10 mg）的80%（低）、100%（中）、120%（高）分別精密稱取3個濃度梯度的雷貝拉唑鈉（批號：100658-201203）和空白輔料（相當于處方量100%的雷貝拉唑鈉），混勻。精密稱定3個濃度梯度的混合樣品各3份，分別相當于雷貝拉唑鈉原料約8、10、12 mg，按含量測定方法進行測定，按外標法以峰面積計算回收率。

1.2.9精密度試驗

1.2.9.1重復性試驗按1.2.2.3項下方法制備供試品溶液。同法操作6份。同時，制備雷貝拉唑鈉對照品溶液。精密量取上述溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.9.2中間精密度試驗按含量測定方法，由不同分析人員在不同時間分別測定的含量，考察隨機變動因素對精密度的影響。

1.2.10樣品溶液穩定性取1.2.9.2項下的供試品溶液，于4℃放置33.0 h，分別于放置0.0、6.0、10.5、15.0、18.5、24.0、33.0 h 7個時間點各進樣10 μL，記錄色譜圖，計算峰面積的相對標準偏差（RSD），以測定對照品溶液的放置穩定性。

1.2.11濾膜吸附試驗（1）供試品貯備液配制：取本品適量（約相當于雷貝拉唑鈉2 mg），精密稱定，置20mL容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。（2）供試品溶液1：取供試品貯備液10 mL，離心，取上清液即得。供試品溶液2：取供試品貯備液濾過，棄去初濾液2 mL，取續濾液即得。供試品溶液3：取供試品貯備液濾過，棄去初濾液5 mL，取續濾液即得。（3）測定方法：精密量取供試品溶液1，供試品溶液2和供試品溶液3各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計算含量RSD，考察濾膜吸附對測定結果的影響。

1.2.12耐用性試驗［13］附錄194為考察測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度，對含量測定方法進行系統耐用性試驗。考察的變動因素有：流動相比例、流速、柱溫、流動相pH、波長、色譜柱等。標準方法：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱（如Agilent Extend-C18色譜柱，150.0mm×4.6mm，5.0μm）；以0.01 mol/L的磷酸氫二鉀緩沖液（pH 7.0）-甲醇（53∶47）為流動相；流速1.0 mL/min；柱溫35℃；檢測波長284 nm。分別取1.2.2.3項下供試品溶液和1.2.2.2項下對照品溶液各10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.13樣品檢測取不同批號的樣品，分別按1.2.2.3項下方法制成供試品溶液，精密量取上述溶液各10μL，分別注入液相色譜儀，測定3批（S28-140101、S28-140102、S28-140103）注射用雷貝拉唑鈉的含量。

2　結　果

2.1波長選擇結果對照品及本品在（284±2）nm均有較強吸收，空白溶劑無干擾，故選擇284 nm作為雷貝拉唑鈉含量測定波長。見表1。

表1　檢測波長選擇結果

2.2系統適用性試驗結果雷貝拉唑鈉理論塔板數為8 733，分離度為8.88。試驗結果表明該色譜條件良好，可以作為雷貝拉唑鈉含量測定的色譜條件。

2.3空白干擾專屬性試驗空白干擾專屬性試驗結果表明空白溶劑、空白輔料對本品含量測定無干擾。

2.4線性與范圍試驗結果線性方程：Y=21.803 5X-17.373 4，相關系數（r）=1.000 0，雷貝拉唑鈉在19.968～199.680μg/mL時與其峰面積呈線性關系。見表2、圖1。

表2　線性與范圍試驗結果

圖1　含量測定線性關系

2.5進樣精密度結果采用HPLC法，連續進樣6次，RSD為0.10%，小于2.00%，儀器進樣精密度良好。見表3。

表3　進樣精密度結果

2.6準確度試驗結果HPLC法含量的平均回收率為99.9%，RSD為0.08%，表明該法的準確度高、可靠性好。見表4。

表4　含量測定回收率試驗結果（n=9）

2.7精密度試驗

2.7.1HPLC法重復性試驗結果采用HPLC法測定雷貝拉唑鈉的含量，RSD為0.35%，重復性較好。見表5。

表5　HPLC法重復性試驗結果（n=6）

2.7.2中間精密度試驗結果測定結果的RSD為0.30%，中間精密度較好。見表6。

表6　中間精密度試驗結果

2.8樣品溶液穩定性結果注射用雷貝拉唑鈉溶液于4℃放置33.0 h峰面積的RSD為1.01%，溶液在4℃33.0 h內穩定。見表7。

表7　樣品溶液的放置穩定性

2.9濾膜吸附試驗結果供試品溶液未經濾膜濾過與經濾膜濾過含量RSD為0.24%，無明顯變化，濾膜吸附量可忽略不計，不影響本品含量的測定。見表8。

表8　濾膜吸附試驗結果

2.10系統耐用性試驗流動相比例、流速、柱溫、流動相pH、波長、色譜柱等因素的微小變化均可引起保留時間的改變，但不同條件下主峰分離度均大于1.5，同條件下含量測定結果平均值為101.5%，RSD為0.55%，不同條件下含量測定結果未見明顯變化，說明色譜條件的微小變化，對本品含量的測定影響不大。不同條件下樣品含量測定結果見表9。

表9　耐用性試驗結果

續表9　耐用性試驗結果

2.11樣品測定HPLC法測得3批（S28-140101、S28-140102、S28-140103）注射用雷貝拉唑鈉的含量分別為101.3%、99.7%、100.1%。

3　討　論

本研究建立了一種采用HPLC法測定注射用雷貝拉唑鈉含量的方法，雷貝拉唑鈉的濃度在19.968～199.680 μg/mL時線性關系良好（Y=21.803 5X-17.3734，r=1.000 0），注射用雷貝拉唑鈉低、中、高3種濃度平均回收率（n=9）為99.9%（RSD=0.08%），中間精密度試驗RSD=0.30%（n=6），重復性和耐用性良好；HPLC法測得3批（S28-140101、S28-140102、S28-140103）注射用雷貝拉唑鈉的含量分別為101.3%、99.7%、100.1%。HPLC法準確度高、方便快捷，能有效控制該品種的質量，可作為注射用雷貝拉唑鈉含量的檢驗方法。根據實測3批樣品含量測定結果，并考慮實際生產的復雜性，將注射用雷貝拉唑鈉含量測定標準暫定為雷貝拉唑鈉含量應為標示量的95.0%～105.0%。

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ContentdeterminationofRabeprazoleSodiumforInjectionbyHPLC

WangShuling，NiHui，SuMei，ZhouYuxiang，Li Jingzhi，He Yang（Jiangsu Carephar Pharmaceutical Scientific and Technology Co.，Ltd.，Nanjing，Jiangsu 210016，China）

ObjectiveTo establish a HPLC method for the content determination of Rabeprazole Sodium for Injection. MethodsThe high-performance liquid chromatography（HPLC）was adopted with 0.01 mol/L dipotassium hydrogen phosphate buffer solution（pH7.0）-methanol（53∶47）as the mobile phase，the detection wave length was 284 nm，the flow rate was 1.0 mL/min，the column temperature was 25℃.The content of Rabeprazole Sodium for Injection was detected.ResultsThe rabeprazole sodi um concentration in the range of 19.968-199.680 μg/mL has a good linear relationship（Y=21.803 5X-17.373 4，r=1.000 0），the average recovery rates of high，middle and low concentrations（n=9）were 99.9%［relative standard deviation（RSD）=0.08%］；the intermediate precision RSD was 0.30%（n=6），the repeatability and durability were good.The contents of 3 batches of Rabeprazole Sodium for Injection（S28-140101，S28-140102，S28-140103）detected by HPLC were 101.3%，99.7%and 100.1%respectively. ConclusionThe establishedHPLC method is simple，sensitive and accurate，which is suitable for the content determination of Rabeprazole Sodium for Injection.

Benzimidazoles；Pharmaceutical preparations；Chromatography，high pressure liquid；Quality control；Rabeprazole Sodium

10.3969/j.issn.1009-5519.2016.15.011

A

1009-5519（2016）15-2306-04

王淑玲（1983-），主要從事藥物分析方面的工作。

（2016-04-11）