青蒿-鱉甲藥對配伍治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠的代謝組學研究

陳　娟，鄧　軍，周　佳，謝志軍，甘　靜，溫成平（.浙江中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，浙江杭州　30053；.浙江省醫(yī)學科學院安全性評價研究中心，浙江杭州　3003）

青蒿-鱉甲藥對配伍治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡小鼠的代謝組學研究

陳娟1，鄧軍2，周佳1，謝志軍1，甘靜1，溫成平1
（1.浙江中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院，浙江杭州310053；2.浙江省醫(yī)學科學院安全性評價研究中心，浙江杭州310013）

網(wǎng)絡出版時間：2016-4-26 11：06網(wǎng)絡出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160426.1106.052.html

目的研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）小鼠（MRL/lpr）經(jīng)青蒿-鱉甲藥對治療后血清代謝物的變化，探討SLE發(fā)病及藥物作用機制。方法采集對照組、SLE模型組和青蒿-鱉甲藥對治療組（低、高劑量組）小鼠的血清樣本，應用高效液相色譜-四級桿-飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)（HPLC-Q-TOF/ MS），對樣本進行代謝圖譜分析。應用Mass Hunter和MPP軟件處理數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)模式識別采用有監(jiān)督的偏最小二乘法-判別分析（PLS-DA）。結果代謝組學分析發(fā)現(xiàn)，SLE模型小鼠存在較明顯的脂代謝紊亂。與模型組相比，藥物組可以改善狼瘡鼠體內(nèi)脂質(zhì)代謝異常，影響SLE疾病血栓的發(fā)生發(fā)展；并且可以改善SLE小鼠急性期的炎癥反應，減少其病理損害。結論青蒿-鱉甲藥對通過調(diào)節(jié)SLE小鼠的脂質(zhì)代謝及炎癥反應對其發(fā)揮一定的治療作用。

青蒿-鱉甲藥對；系統(tǒng)性紅斑狼瘡；小鼠；血清；代謝組學；液相色譜-四級桿-飛行時間質(zhì)譜

藥對是中藥配伍形式中的一種，從某種角度上講，藥對的配伍與應用具有特別的意義。所謂中藥藥對又稱對藥、對子藥、姐妹藥，專指臨床上常用的相對固定的兩味藥物的配伍形式，是中藥配伍中的最小單位［1］。由于研究單味藥難以反映出其在復方中的真實作用，而復方由于藥味多，作用關系復雜，對其研究也難以得出準確結論。“藥對”作為藥配伍中的雛形，對其研究恰好可以彌補上述不足。復方中的核心藥對，在中藥理論中具有相互增效并調(diào)和藥性，引藥歸經(jīng)的作用。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種自身免疫性疾病。研究認為，SLE的發(fā)生主要由于先天腎陰虧虛，以致五臟之精生化乏源，形成以陰虛內(nèi)熱為本的狼瘡體質(zhì)［2］。根據(jù)病因病機特點，結合癥狀分析，及古代醫(yī)家選方用藥特點，辨證論治，范永升等［3］確立了解毒祛瘀滋陰療法，按照以法制方的原則，通過處方、藥物篩選及臨床經(jīng)驗，確立解毒祛瘀滋陰方，青蒿、鱉甲為該方的核心組分，兩藥相配，有“青蒿不能直入陰分，有鱉甲領之入也；鱉甲不能獨出陽分，青蒿領之出也”之妙。

代謝組學借助高通量、高靈敏度與高精確度的現(xiàn)代技術，分析生物樣本如血液、尿液中的內(nèi)源性代謝物，可以根據(jù)代謝物的變化，發(fā)現(xiàn)生物標志物，闡明藥物作用的整體效應，包括協(xié)同作用，其思想具有與中醫(yī)理論整體觀念相一致的特點。作為系統(tǒng)生物學的重要組成部分，代謝組學已被廣泛應用于各類復雜疾病的作用機制研究［4］。其中，超高效液相質(zhì)譜聯(lián)用（UPLC/Q-TOFMS）是目前用于分析的一種強有力的方法［5］。本實驗擬選擇解毒祛瘀滋陰方中的青蒿、鱉甲作為藥對配伍，應用代謝組學技術研究其干預狼瘡鼠后血清代謝標志物的變化規(guī)律，篩選、鑒定與疾病相關的代謝標記物，探討青蒿-鱉甲藥對對SLE的治療機制。

1　材料

1.1實驗動物2月齡C57BL/6小鼠12只，MRL/ lpr狼瘡鼠36只，由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2012-0002，實驗用基礎飼料由浙江中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供［6］。

1.2實驗藥品與試劑青蒿、鱉甲生藥材由浙江中醫(yī)藥大學飲片廠提供。青蒿鱉甲提取液由浙江中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院制劑室制備（濃度：含生藥量0.5 g每毫升），-20℃保存?zhèn)溆茫?］。甲酸（分析純，阿拉丁公司），甲醇（色譜級，美國Tedia公司），乙腈（色譜級，美國Tedia公司），質(zhì)譜參比液和校準液為美國安捷倫公司所提供。

1.3實驗儀器1260 infinity高效液相色譜儀，E-clipse Plus C18色譜柱，Agilent 6520 Q-TOF/MS質(zhì)譜系統(tǒng)，均購自美國Agilent公司；Centrifuge 5417R高速冷凍離心機（德國，Eppendorf公司）；Milli-Q Biocel純水儀（美國，Millipore公司）；Mass Hunter軟件（美國，Agilent Technologies公司）；Mass Profiler Professional（MPP）軟件（美國，Agilent Technologies公司）。

2　方法

2.1動物實驗36只MRL/lpr小鼠♀，12只C57BL/6小鼠♀，由浙江中醫(yī)藥大學動物實驗中心飼養(yǎng)（SPF級）。適應性喂養(yǎng)1周后，分為對照組（C57BL/6小鼠）、模型組及青蒿-鱉甲治療組（低、高劑量）。對照組及模型組每日灌胃生理鹽水1次，每只0.5 mL。低、高劑量組以相當于正常成人每日用量5、10倍劑量給藥，分別為0.1、0.2 mL· （10 g）-1（水煎液），每日1次，連續(xù)飼養(yǎng)用藥2個月。采血前小鼠禁食12 h，眼球取血，收集血液3 000 r·min-1離心15 min，分離血清，-80℃保存?zhèn)溆茫?］。

2.2血清樣本前處理血清樣本在室溫下解凍后，離心后取出100 μL，加入300 μL乙腈沉淀蛋白［7］，渦旋震蕩1 min，靜置10 min，然后4℃低溫高速離心10 min（12 000 r·min-1），400 μL血清樣品用0.22 μm微孔濾膜過濾，棄去初始濾液，樣品即可進行液相質(zhì)譜分析。從4個實驗組樣本中抽取等體積血清混合制成質(zhì)控樣本，前處理方法與待測樣本相同。

2.3色譜條件與質(zhì)譜條件依據(jù)本實驗室前期建立的條件進行優(yōu)化，最終確定的色譜條件：流動相A 為0.1%甲酸水溶液，B為0.1%甲酸乙腈溶液，采用梯度洗脫（0～2 min，20%B；2～13 min，20%～75%B；13～18 min，75% ～85%B；18～25 min，85%～95%B），后運行時間為5 min。自動進樣器溫度為4℃，柱溫為35℃。

對質(zhì)譜系統(tǒng)進行優(yōu)化，優(yōu)化后的主要參數(shù)是：采用電噴霧離子源ESI正離子模式。掃描范圍m/z 50 ～1 000，干燥氣為N2，干燥氣溫度為350℃，正離子模式毛細管電壓分別為4 000 V，碎裂電壓為170 V，錐孔電壓為65 V，霧化器壓力為275.8 kPa。使用Centroid模式保存質(zhì)譜數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)采集速率為2 spectrum·s-1。數(shù)據(jù)采集過程中，參比液實時監(jiān)測校準質(zhì)譜系統(tǒng)。二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集時，碰撞能分別設置為40 eV，二級質(zhì)譜采集速率為2 spectrum·s-1［8］。

2.4數(shù)據(jù)處理使用Agilent Mass Hunter分析軟

件中分子特征提取 （molecular feature extraction，MFE）處理代謝物信息。提取離子豐度閾值為200，基峰豐度閾值為1 000，正離子模式加和離子種類為［M+H］+。提取后代謝物信息包括保留時間、精確質(zhì)量數(shù)和豐度，將提取后的數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)存為CEF格式文件，利用MPP軟件進行數(shù)據(jù)預處理。使用PLS-DA的載荷圖篩選出對分類貢獻較大的化合物，進一步通過 VIP（variable importance in projection）值（＞1.5）確定生物標志物，利用方差分析對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。利用PLS-DA對數(shù)據(jù)矩陣進行模式識別。根據(jù)精確的質(zhì)量數(shù)和二級質(zhì)譜圖，利用METLIN、HMDB和PubChem等數(shù)據(jù)庫鑒定潛在標記物。

3　結果

3.1LC-MS分析如Fig 1所示，實驗得到各組血清樣本的TIC圖之間存在一定差異。為保證數(shù)據(jù)的可靠性，在采集過程中，每間隔8個樣本進樣一次質(zhì)控樣本，以監(jiān)測系統(tǒng)的穩(wěn)定性。分析質(zhì)控樣本的TIC圖，分保留時間（前、中、后），采用5個特征峰的離子精確質(zhì)量、保留時間和峰面積數(shù)據(jù)。結果顯示，所選特征峰的保留時間偏移＜0.01 min，各個峰面積RSD＜10%，精確質(zhì)量的數(shù)漂移值小于2 ppm。由此可見，在血清樣本數(shù)據(jù)采集過程中，系統(tǒng)穩(wěn)定，采集數(shù)據(jù)可靠。

3.2數(shù)據(jù)分析對4組小鼠的代謝圖譜進行PCA主成分分析（Fig 2），發(fā)現(xiàn)SLE模型組和對照組明顯地分離，說明2組小鼠血清中代謝物種類或者數(shù)量上存在一定差異。在此基礎上，我們進一步采用PLS-DA對各組數(shù)據(jù)進行分型，由得分圖結果可以看出（Fig 3），SLE組較對照組有明顯的向左偏移。青蒿-鱉甲配伍治療后，代謝圖譜偏移得到有效的緩解，治療組與對照組在得分圖中趨于靠近，表明代謝產(chǎn)物差異相對減小，說明青蒿-鱉甲藥對配伍對SLE小鼠有治療作用。

3.3差異代謝物的鑒定根據(jù)差異代謝物的精確相對分子質(zhì)量和二級質(zhì)譜圖，鑒定差異代謝物。其中10種差異代謝物得到鑒定（Tab 1），各個差異代謝物在各組中的峰面積變化如Fig 4所示。

3.4代謝物變化趨勢血清中代謝物的變化趨勢反映了機體代謝變化，SLE發(fā)病或藥物干預都可能會引起正常代謝圖譜的改變。對照組和SLE模型組的PLS-DA分析，鑒定出10個SLE的代謝標記物（Tab 1），分析這些代謝標記物在給藥前后相對含量的變化（Fig 4），發(fā)現(xiàn)在SLE模型組中代謝標記物含量與對照組相比差異有顯著性（P＜0.05），說明SLE對小鼠血清中代謝物含量有較大的影響。青蒿-鱉甲藥對治療組小鼠代謝標記物中，血小板活化因子（Lyso-PAF C-16，enantio-PAF C-16）、L-α-溶血卵磷脂（L-α-Lyso phosphatidylcholine）、G9a/ GLP組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑（UNC0638）、L-丁酰基肉堿（Butyryl-L-carnitine，C4）、前列腺素 B3 （PGB3）和乙烷磺酸［（Z）-2-tetracos-15-enamido ethanesulfonic acid］較SLE模型組含量差異有顯著性（P＜0.05），代謝標記物含量回調(diào)作用明顯。這些代謝標記物含量的回調(diào)，體現(xiàn)了青蒿-鱉甲藥對配伍對SLE模型小鼠疾病代謝的調(diào)節(jié)作用。

Tab 1　Identification results of differential metabolites

Fig 1　Representative TIC chromatograms of control group（A），SLE model group（B）and Qinghao-Biejia treatment group［low（C）and high（D）dose］

Fig 2　Score plots of PCA analysis in positive ion mode

Fig 3　Score plots of PLS-DA analysis in positive ion mode

4　討論

正常組小鼠、模型狼瘡鼠及給藥組狼瘡鼠的血清經(jīng)過PCA和PLS-DA分析，結合圖譜表明，與模型組相比，青蒿-鱉甲治療組可以降低狼瘡鼠體內(nèi)L-α-溶血卵磷脂（溶血磷脂1，LPC）的含量。溶血磷脂是磷脂的降解產(chǎn)物，由于最常用的磷脂為卵磷脂，因而溶血磷脂一般是指LPC，其具有高度細胞毒性，可破壞細胞膜的磷脂層。體內(nèi)卵磷脂代謝產(chǎn)生LPC的過程由磷脂酶A1和磷脂酶A2催化。磷脂酶A2可催化甘油磷脂的第2位酯鍵斷裂，生成溶血磷脂

Fig 4Charts of different metabolite peak area*P＜0.05，**P＜0.01 vs SLE model 1，即L-α-溶血卵磷脂。磷脂酶A2參與自身免疫病的病理損傷過程，它又與自由基的產(chǎn)生密切相關。有研究表明，SLE患者體內(nèi)磷脂酶A2活性較正常人升高，且活動期較非活動期增高，可能的機制為磷脂酶A2水解膜磷脂產(chǎn)生的LPC及其代謝產(chǎn)物，產(chǎn)生多器官損害［9-10］。本研究結果顯示，模型組血清中LPC含量較正常組明顯升高，結合以上觀點，可以判斷與SLE疾病的發(fā)展有密切關系，青蒿-鱉甲治療組干預后LPC水平明顯下調(diào)，說明該藥對的干預可以減弱LPC對細胞的毒性作用和對器官的損害，有助于SLE疾病的緩解和治療。

補體系統(tǒng)是機體免疫應答過程中的一個重要的效應系統(tǒng)，具有溶病毒、溶細胞、溶菌等免疫調(diào)節(jié)作用，并有清除免疫復合物以及炎癥介質(zhì)作用。C4是補體經(jīng)典激活途徑的一個重要組分。補體的各組分在不同激活物的作用下，可循經(jīng)典途徑或替代途徑被順序活化，參與機體的特異性和非特異性效應機制；同時，補體活化也可能導致對機體組織的損傷。研究發(fā)現(xiàn)，補體異常與SLE疾病的發(fā)生發(fā)展有密切的關系。無論臨床觀察還是動物實驗均證實，補體成分在SLE發(fā)病中的作用具有雙重性，一方面補體蛋白缺陷或水平低下個體易患SLE，補體的存在對抵抗SLE的發(fā)生提供一定的保護作用；另一方面，補體活化的直接作用和對免疫細胞功能的影響可加重SLE的病理損害，影響SLE病程的發(fā)展和臨床表現(xiàn)［11］。本研究結果表明，模型組小鼠C4表達水平升高，C4含量升高常見于風濕熱的急性期。經(jīng)典理論認為，自身抗原和抗體結合形成免疫復合物，進而激活補體，造成炎癥反應和組織損傷。提示可能與狼瘡鼠急性期炎癥相關，而青蒿-鱉甲治療組尤其是高劑量組明顯降低了C4的含量，提示青蒿鱉甲藥對可以改善SLE小鼠急性期的炎癥反應，減少其病理損害。該結果進一步證實了我們前期的研究成果［6］，發(fā)現(xiàn)青蒿-鱉甲藥對能抑制小鼠血清中炎性因子IL-6的分泌，明顯降低血清中IFN-γ的水平，從而減少了因自身免疫復合物的分泌而造成的病理性損害［12］。

血小板活化因子（platelet activating factor，PAF）主要由中性粒細胞、血小板和巨噬細胞等產(chǎn)生，是具有廣泛生物活性的磷脂類遞質(zhì)，參與人體多種生理、病理過程。PAF需和PAF受體結合才能產(chǎn)生生物活性。SLE患者經(jīng)常合并動、靜脈血栓形成，是血栓栓塞性疾病的高危因素。2009年，美國研究1 930例SLE病例的結果顯示，22%的SLE患者合并動、靜脈血栓。SLE發(fā)生血栓性疾病的危險性是其它風濕性疾病的9.6倍［13-14］。臨床和實驗證實，血栓形成的病理過程會伴有不同程度的血小板活化，活化的血小板釋放出許多生物活性物質(zhì)，這些活性物質(zhì)可以使SLE體內(nèi)的免疫復合物沉積于小血管內(nèi)膜、腎小球基底膜、關節(jié)等部位，激活補體引起炎癥等［13］。且有報道研究發(fā)現(xiàn)，PAF水平與SLE疾病活動性指數(shù)相關，可作為評估SLE病情活動性的指標之一［15］。本研究結果發(fā)現(xiàn)，高劑量藥物治療組可以明顯降低Lyso-PAF C-16和enantio-PAF C-16的水平，因此推測青蒿-鱉甲干預后可以抑制PAF的活化，從而影響SLE血栓的發(fā)生發(fā)展。

由必需脂肪合成而來的前列腺素，可以使細胞對激素變得敏感。必需脂肪的缺乏，或者將必需脂肪轉(zhuǎn)換成前列腺素的營養(yǎng)素（如維生素B3、維生素C和生物素等）的缺乏，都會造成與激素失調(diào)相關的癥狀。狼瘡鼠模型組前列腺素B3（PGB3）與正常對照組相比明顯降低，但藥物組干預后PGB3水平明顯升高，恢復正常，提示青蒿-鱉甲可以改善SLE引起的激素水平紊亂的狀況。

綜上所述，通過運用代謝組學技術鑒定疾病及用藥后狼瘡鼠血清差異代謝物，發(fā)現(xiàn)青蒿-鱉甲藥對配伍作用后影響了體內(nèi)一些疾病相關代謝物，尤其是脂質(zhì)代謝和免疫相關因子，推測其可能為藥物作用的關鍵靶點，為治療SLE疾病復方的開發(fā)和進一步研究奠定了理論基礎。

（致謝：本文實驗在浙江中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院中醫(yī)臨床基礎研究所完成，在整個研究完成過程中得到了溫成平教授、丁興紅教授、孔宏偉副研究員及謝志軍副研究員的悉心指導和熱忱幫助，在此深表謝意！）

［1］楊鴻珠，龔雨萍.中藥藥對的研究進展與研究［J］.中國中西醫(yī)結合雜志，2010，30（2）：218-20.

［1］Yang H Z，Gong Y P.Research progress and thinking of Chinese herbal medicine［J］.Chin J Integr Tradit West Med，2010，30 （2）：218-20.

［2］徐莉，季巾君，范永升，等.解毒祛瘀滋腎方對MRL/lpr狼瘡小鼠腎組織GRα的調(diào)控作用研究［J］.中國中西醫(yī)結合雜志，2011，31（11）：1527-30.

［2］Xu L，Ji J J，F(xiàn)an Y S，et al.Study on the regulation of Jiedu Quyu Zishen Recipe on glucocorticoid receptor α in the renal tissue of MRL/Ipr mice［J］.Chin J Integr Tradit West Med，2011，31 （11）：1527-30.

［3］范永升，溫成平，吳國琳，等.解毒祛瘀滋陰法對系統(tǒng)性紅斑狼瘡類固醇性骨質(zhì)疏松癥的防治作用研究［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2005，20（11）：667.

［3］Fan Y S，Wen C P，Wu G L，et al.Investigation into preventive and therapeutic effects of Jieduquyuziyin methods in treating corticosteroid osteoporosis in systemic lupus erythematosus［J］.China J Tradit Chin Med Pharm，2005，20（11）：667.

［4］盧偉，馬曉麗，蘭怡.兩色金雞菊醇提物對自發(fā)性高血壓大鼠尿液的代謝組學研究［J］.中國藥理學通報，2014，30 （9）：1311-5.

［4］Lu W，Ma X L，Lan Y.Effect of alcohol extract from Coreopsis tinctoria Nutt.on spontaneous hypertension rats by metabolomic methods［J］.Chin Pharmacol Bull，2014，30（9）：1311-5.

［5］Ma Y，Zhang P，Yang Y，et al.Metabolomics in the elds of oncology：a review of recent research［J］.Mol Biol Rep，2012，39：7505-11.

［6］甘靜，謝志軍，陳娟，等.青蒿-鱉甲藥對配伍對MRL/lpr狼瘡小鼠IL-6、IFN-γ分泌及狼瘡性腎炎病理改變的影響［J］.江西中醫(yī)藥大學學報，2015，27（4）：69-71.

［6］Gan J，Xie Z J，Chen J，et al.Effects of Qinghao-Biejia group on the production of IL-6，IFN-γ and pathologic change of lupus nephritis in MRL/lpr mice［J］.J Jiangxi Univ Tradit Chin Med，2015，27（4）：69-71.

［7］ 張璠璠，王宇光，梁乾德，等.基于UPLC-TOF-MS研究冰片對丹參酮ⅡA在大鼠體內(nèi)藥代動力學的影響［J］.中國藥理學通報，2014，30（6）：862-6.

［7］Zhang F F，Wang Y G，Liang Q D，et al.UPLC-TOF-MS based profiling approach in evaluation of effect of borneol on pharmacokinetics of Tanshinone IIA in mice［J］.Chin Pharmacol Bull，2014，30（6）：862-6.

［8］ 胡金波，谷恒存，丁興紅，等.基于HPLC-Q-TOF/MS的代謝組學方法用于解毒祛瘀滋陰方對系統(tǒng)性紅斑狼瘡干預作用的研究［J］.中國中藥雜志，2013，38（21）：3747-52.

［8］Hu J B，Gu H C，Ding X H，et al.Study on intervention effect of Jieduquyuziyinprescriptionsystemiclupuserythematosusby HPLC-Q-TOF/MS［J］.China J Chin Mater Med，2013，38（21）：3747-52.

［9］李翠奇，陳服文，饒漢珍.SLE患者血清過氧化脂質(zhì)和維生素E與磷脂酶A2活性的檢測［J］.中華皮膚科雜志，2000，33 （2）：125.

［9］Li C Q，Chen F W，Rao H Z.Detection of serum lipid peroxide and vitamin E and phospholipase A2 activity in SLE patients［J］. Chin J Dermatol，2000，33（2）：125.

［10］ Pruzangki W，Vadas P.Phospholipase A2-a mediator between proximal and distal effectors of inflammation［J］.Immunol Today，1991，12（5）：143-6.

［11］毛立群，郭小芹.補體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的作用［J］.國外醫(yī)學內(nèi)科學分冊，2006，33（4）：157-9.

［11］Mao L Q，Guo X Q.The role of complement in systemic lupus erythematosus［J］.Foreign Med Sci（Sect Intern Med），2006，33 （4）：157-9.

［12］張麗明，段姚堯，董小青.Th22細胞及其效應因子IL-22與炎癥性皮膚病關系的研究進展［J］.中國藥理學通報，2014，30 （7）：905-7.

［12］Zhang L M，Duan Y R，Dong X Q.Research progress of Th22 and IL-22 in inflammatory skin disorders［J］.Chin Pharmacol Bull，2014，30（7）：905-7.

［13］馬新駿，張愛華，李小亮，等.血小板活化和內(nèi)皮細胞損害對系統(tǒng)性紅斑狼瘡影響的臨床研究［J］.血栓與止血學，2013，19 （1）：9-11.

［13］Ma X J，Zhang A H，Li X L.The study on the activation of platelet and injury of endothelial cell effects on systemic lupus erythematosus［J］.Chin J Thromb Hemo，2013，19（1）：9-11.

［14］Kaiser R，Cleveland C M，Criswell L A.Risk and protective factors for thrombosis in systemic lupus erythematosus results from a large multi-ethnic cohort［J］.Ann Rheum Dis，2009，68（2）：238-41.

［15］徐祖森，蔡華華.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血漿血小板活化因子水平及其與血漿脂質(zhì)過氧化物水平關系的研究［J］.中國麻風皮膚病雜志，2005，21（6）：429-31.

［15］Xu Z S，Cai H H.The study of plasma level of platelet activating factor and its relationship with plasma lipid peroxidation in systemic lupus erythematosus［J］.China J Lepr Skin Dis，2005，21（6）：429-31.

Metabonomic study of traditional Chinese herb pair，
Qinghao-Biejia in treating systemic lupus erythematosus mice

CHEN Juan1，DENG Jun2，ZHOU Jia1，XIE Zhi-jun1，GAN Jing1，WEN Cheng-ping1
（1.College of Basic Medical Science，Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou310053，China；2.Safety Evaluation Research Center，Zhejiang Academy of Medical Sciences，Hangzhou310013，China）

AimsTo study the changes of serum metabolites in systemic lupus erythematosus（SLE）mice （MRL/lpr）by treatment of Qinghao-Biejia and to explore the pathogenesis of SLE and mechanism of drug action.MethodsThe serum samples of control group，SLE model group and Qinghao-Biejia treatment group （low and high dose）were collected，the metabolic profile of samples was analyzed by high performance liquid chromatography-quadrupole-time of flight mass spectrometry system（HPLC-Q-TOF/MS）.Software of Mass Hunter and Mass Profiler Professional（MPP）were used to process the data.A supervised mode of partial least squares-discriminant analysis（PLS-DA）was applied to recognize the data pattern.Results There were obvious disorders of lipid metabolism in SLE model.Compared with control group，Qinghao-Biejia treatment group improved lipid metabolism，affected the thrombosis development of SLE；and Qinghao-Biejia treatment group reduced the pathological damage by improving inflammatory acute phase of SLE in mice.ConclusionQinghao-Biejia treatment plays a therapeutic role in repairing the imbalance by multidimensional metabolic pathways in SLE mice.

traditional Chinese herb pair，Qinghao-Biejia；systemic lupus erythematosus；mice；serum；metabonomics；high performance liquid chromatography coupled with Q-TOF/MS

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.05.026

A

1001-1978（2016）05-0727-06

R-332；R282.74；R289.1；R344；R364.5；R446.11；R593.241.053.1

2016-01-08，

2016-02-06

國家公益性行業(yè)科研專項（No 2015468001）；國家自然科學基金資助項目（No 81373633，81273680）；浙江省重大科技專項（No 2014C03062-1）；浙江省科技廳公益性應用研究計劃項目（No 2013C37100）

陳娟（1984-），女，博士，講師，研究方向：中西醫(yī)藥理學，中醫(yī)藥系統(tǒng)生物學，E-mail：mytw_00@163.com；溫成平（1972-），男，博士，教授，博士生導師，研究方向：中醫(yī)防治風濕性免疫疾病，通訊作者，E-mail：wengcp@ 163.com