阿托伐他汀誘導肝臟Cyp7a1和時鐘基因的表達

李文楷，徐永吉，陸遠富，劉　杰（遵義醫學院基礎藥理教育部省部共建重點實驗室，貴州遵義　563003）

阿托伐他汀誘導肝臟Cyp7a1和時鐘基因的表達

李文楷，徐永吉，陸遠富，劉杰
（遵義醫學院基礎藥理教育部省部共建重點實驗室，貴州遵義563003）

網絡出版時間：2016-4-26 11：06網絡出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160426.1106.060.html

他汀類藥物是羥甲戊二酰輔酶A（HMGCR）選擇性抑制劑，是臨床防治冠心病的重要藥物［1-2］。研究表明，阿托伐他汀能升高肝臟中膽固醇7羥化酶（Cyp7a1）的表達，改變體內膽汁酸代謝［3］，并可能與其長期使用所致肝臟不良反應有關［4］。Cyp7a1表達受時鐘基因的調控，具有晝夜節律性［5］。本研究采用長期給予臨床劑量阿托伐他汀，觀察其對小鼠肝Cyp7a1基因和時鐘基因表達的影響。

Tab 1　Effect of atorvastatin on liver index，ALT，AST，TBA and inflammation-associated genes expression（±s，n=10）

Tab 1　Effect of atorvastatin on liver index，ALT，AST，TBA and inflammation-associated genes expression（±s，n=10）

*P＜0.05 vs control

Group　Liver index　ALT　AST　TBA　Egr1　mCK Control　49.2±1.28　36.7±0.48　44.4±0.68　22.9±0.19　100±30.7　100±10.5 Atorvastatin　49.3±1.42　35.3±0.84　55.3±0.61*23.3±0.20　178±56.4　128±11.2

Tab 2　Effect of atorvastatin on Cyp7a1，FXR and circadian rhythm-related genes expression（±s，n=10）

Tab 2　Effect of atorvastatin on Cyp7a1，FXR and circadian rhythm-related genes expression（±s，n=10）

*P＜0.05 vs control

Group　Cyp7a1　Bmal1　Clock　Cry1　Per2　Dbp　Nr1d1 Control　100.0±19.3　100.0±27.3　100.0±13.5　100.0±7.3　100.0±23.8　100.0±32.1　100.0±21.4 Atorvastatin　286.3±40.8*　300.4±54.5*　177.8±26.3*127.3±8.7　65.7±12.2　82.9±25.4　113.2±14.1

1　材料與方法

1.1藥品、試劑和實驗動物阿托伐他汀，Topfond Pharmaceutical Limited by Share Ltd；TRIzol、逆轉錄試劑盒，寶生物工程（大連）有限公司；SYBR Green，百樂中國公司。

♂昆明種小鼠，（20±2）g，由第三軍醫大學實驗動物中心提供，飼養于遵義醫學院SPF程控環境（許可證號：SYXK 黔2014-003），維持光照8∶00～20∶00。隨機分為對照組和阿托伐他汀組，阿托伐他汀組每天早上9∶00 ig給予10 mg ·kg-1阿托伐他汀，每天1次，連續90 d。最后1次給藥1 h后收集血和肝組織。

1.2肝毒性檢測血清中的谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）、總膽汁酸（TBA）用試劑盒測定。稱取肝濕重，計算肝指數。取肝大葉組織，切片，HE染色，光學顯微鏡下觀察肝組織的病理變化。

1.3實時熒光定量PCR檢測相關基因mRNA表達肝組織50 mg采用TRIzol提取總RNA，用Nanodrop測總RNA的濃度與質量，進行逆轉錄，用SYBR Green PCR擴增（40循環），以β-actin作為內參，用相對定量法進行分析。

2　結果

阿托伐他汀組小鼠體重、肝重、肝指數、ALT、總膽汁酸、肝臟病理切片均與正常對照組無明顯差異。AST有一定程度的升高，但屬正常范圍。阿托伐他汀組炎癥基因Egr1和mCK表達較對照組小鼠略有升高，但差異無統計學意義（Tab 1）。

阿托伐他汀組小鼠肝組織中Cyp7a1的表達明顯高于對照組（P＜0.05）。阿托伐他汀能夠增加核心基因Bmal1和Clock的表達（P＜0.05），但對負反饋基因Cry1、Per2以及與膽酸代謝相關的目標基因Dbp、Nr1d1的表達無明顯作用（Tab 2）。

3　討論

本實驗結果顯示，長期給予臨床劑量阿托伐他汀安全性較高，不引起明顯的肝功能異常，但可增加Cyp7a1的表達。

肝臟膽酸代謝和Cyp7a1基因的表達均呈現晝夜節律性［5-6］。時鐘基因調控的機制主要包括核心基因 Clock、Baml1的表達，負反饋基因Per、Cry和Nr1d1的反饋調節和目標基因Dbp的表達［7］。我們的實驗結果顯示，長期灌胃給予阿托伐他汀后能升高小鼠肝組織中核心基因Clock和Bmal1的表達，而對負反饋基因 Cry1、Per2以及目標基因Dbp、Nr1d1無明顯作用。

時辰藥理學是藥物作用的一個新靶點，為阿托伐他汀的藥理研究提供了一個新的關聯。

［1］張玲玲，金英，隋海娟.阿托伐他汀對Aβ1-42誘導的大鼠AD模型保護作用及其機制研究［J］.中國藥理學通報，2014，30（2）：270-4.

［1］Zhang L L，Jin Y，Sui H J.Protective effects of atorvastatinon Aβ1-42-induced AD model rats and its mechanism［J］.Chin Pharmacol Bull，2014，30（2）：270-4.

［2］李敏，孫玲，李紅玲，孫黔云.阿托伐他汀減輕氧化型低密度脂蛋白導致的人微血管內皮細胞活化和損傷［J］.中國藥理學通報，2014，30（5）：679-83.

［2］Li M，Sun L，Li H L，Sun Q Y.Atorvastatin attenuates activation and injury of human microvascular endothelial cells induced by oxidized low density lipoprotein［J］.Chin Pharmacol Bull，2014，30 （5）：679-83.

［3］Fu Z D，Cui J Y，Klaassen C D.Atorvastatin induces bile acidsynthetic enzyme Cyp7a1 by suppressing FXR signaling in both liver and intestine in mice［J］.J Lipid Res，2014，55（12）：2576-86.

［4］曾含清，張瓊，彭文興.阿托伐他汀致肝損傷的機制［J］.藥物不良反應雜志，2012，14（4）：232-6.

［4］Zeng H Q，Zhang Q，Peng W X.Mechanism of atrovastatin-induced liver injury［J］.Adverse Drug React J，2012，14（4）：232 -6.

［5］Noshiro M，Usui E，Kawamoto T，et al.Multiple mechanisms regulate circadian expression of the gene for cholesterol 7alpha-hydroxylase（Cyp7a），a key enzyme in hepatic bile acid biosynthesis［J］. J Biol Rhythms，2007，22（4）：299-311.

［6］Ma K，Xiao R，Tseng H T，et al.Circadian dysregulation disrupts bile acid homeostasis［J］.PLoS One，2009，4（8）：e6843.

［7］Dallmann R，Brown S A，Gachon F.Chronopharmacology：new insights and therapeutic implications［J］.Annu Rev Pharmacol Toxicol，2014，54：339-61.

Atorvastatin induces hepatic expression of Cyp7a1 and Bmal1 and Clock in mice

LI Wen-kai，XU Yong-ji，LU Yuan-fu，LIU Jie
（Dept of Pharmacology and Key Lab for Basic Pharmacology of Ministry of Education，Zunyi Medical College，Zunyi Guizhou 563003，China）

阿托伐他汀；安全性；膽汁酸代謝；Cyp7a1；生物鐘；Bmal1；Clock

atorvastatin；safety； bileacidmetabolism；Cyp7a1；circadian rhythm；Bmal1；Clock

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.05.030

2015-12-07，修稿日期：2016-01-22

國家自然科學基金資助項目（No 81160415）

李文楷（1990-），男，碩士生，研究方向：藥代動力學與藥物毒理學，E-mail：liwenkai1990@126.com；劉杰（1953-），男，博士，教授，碩士生導師，研究方向：藥物代謝與毒理學，通訊作者，E-mail：JieLiu@zmc.edu.cn

A

1001-1978（2016）05-0739-02中國圖書分類號：R-332；R322.47；R344.81；R394.2；R972.6