OX40L和ICAM-1在子癇前期患者外周血中的表達水平及意義

苗露楊海瀾韓方馬惠靜秦靜

OX40L和ICAM-1在子癇前期患者外周血中的表達水平及意義

苗露①楊海瀾②韓方②馬惠靜②秦靜②

目的：通過檢測子癇前期患者外周血中協同刺激分子（OX40L）和細胞間黏附分子（ICAM-1）的水平，探討OX40L和ICAM-1在子癇前期發生機制中的作用。方法：選擇本院2014年4月-2014年8月收治的40例重度子癇前期（重度子癇前期組）和35例正常孕婦（對照組）為研究對象，采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定其血清中OX40L和ICAM-1的水平，比較兩組患者細胞因子水平。結果：重度子癇前期組OX40L、ICAM-1在外周血的表達與對照組比較均有所增強，差異均有統計學意義（P＜0.05）。結論：重度子癇前期組OX40L、ICAM-1的表達增強可能與子癇前期的發生、發展有關。

OX40L； CAM-1； 外周血； 重度子癇前期； 發病機制

The Expression Levels and Significances of OX40L and ICAM-1 in Peripheral Blood of Preeclampsia Patients

First-author's address：Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

子癇前期是妊娠期特有的高血壓疾病，是指妊娠20周后出現收縮壓≥140 mm Hg和/或舒張壓≥90 mm Hg伴蛋白尿≥0.3 g/24 h，或隨機尿蛋白（+）的癥狀。血壓和尿蛋白持續升高，發生母體臟器功能不全或胎兒并發癥時即發展成為重度子癇前期。重度子癇前期涉及孕婦的各個系統，是嚴重危害母嬰健康的妊娠期并發癥，其病因與發病機制尚未闡明。免疫學病因與發病機制是近年來國內外學者關注的重點［1］。近年來，有部分學者將免疫系統疾病的研究重點集中于協同刺激分子（OX40L）與細胞間黏附分子-1（ICAM-1）在免疫機制中的作用，研究發現OX40L在乳腺癌、原發性干燥綜合征、狼瘡、過敏性紫癜及Graves病等眾多免疫疾病中起重要作用［2-13］。ICAM-1是細胞內信號轉導中

重要分子，是免疫機制中不可或缺的角色［14］。免疫系統疾病患者體內OX40L與ICAM-1的表達水平高于正常人，由此推測OX40L與ICAM-1可能參與了免疫系統疾病的發生與發展。由于眾多理論研究認為重度子癇前期的發生與免疫因素有關，OX40L 與ICAM-1可能也參與了重度子癇前期的發生與發展。目前尚未有文獻報道OX40L與重度子癇前期的關系。本研究利用已建立的特異性檢測人OX40L 和ICAM-1的ELISA試劑盒檢測40例重度子癇前期患者和35例正常妊娠孕婦外周血中OX40L和ICAM-1的水平，探討OX40L和ICAM-1在子癇前期發生發展中的作用。

1　資料與方法

1.1一般資料 選取2014年4月-2014年8月山西醫科大學第一醫院產科收治的重度子癇前期患者40例為重度子癇前期組，同期正常妊娠晚期孕婦35例為對照組。重度子癇前期組的納入標準為：單胎妊娠，診斷為重度子癇前期，無妊娠合并癥，既往無高血壓史、腎病史與糖尿病史。重度子癇前期的診斷標準參照《婦產科學》（第8版）［15］。對照組的納入標準為：單胎、足月妊娠，無妊娠并發癥與合并癥，新生兒體重正常、無窒息。兩組孕婦的年齡、孕周比較差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法 所有研究對象均空腹取靜脈血3 mL，所得樣本以2000 r/min、15 min離心分離血清后將血清保存于-4 ℃冰箱待測。本試驗采用雙抗體夾心ELISA檢測法：用抗人sICAM-1單克隆抗體預包被酶標板，加入適度稀釋的樣本和標準品。其中的sICAM-1會與其單抗結合，洗去游離成分；加入生物素化的sICAM-1抗體，抗人sICAM-1抗體與結合在單抗上的人sICAM-1結合而形成免疫復合物，洗去游離成分；加入辣根過氧化物酶標記的親和素，生物素與親和素特異性結合，洗去未結合的酶結合物；加入顯色劑，若反應孔中有sICAM-1，辣根過氧化物酶會使無色的顯示劑現藍色；加終止液變黃。在450 nm下檢測OD值，sICAM-1濃度與OD 450值之間呈正比，可通過繪制標準曲線計算出標本中sICAM-1濃度。同理測定血清中OX40L。試劑由上海西唐生物科技有限公司提供。

1.3統計學處理 采用SPSS 17.0軟件對所得數據進行統計學分析，計量資料以（）表示，組間比較采用t檢驗，相關性分析采用Pearson積差相關，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

在重度子癇前期組和對照組中均檢出了OX40L和ICAM-1，這兩個因子在兩組中均有表達。重度子癇前期組的OX40L和ICAM-1水平較對照組均明顯增加，差異均有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1　兩組OX40L、ICAM-1的比較（） ng/L

表1　兩組OX40L、ICAM-1的比較（） ng/L

組別　OX40L　ICAM-1對照組（n=35）　409.5±73.8　877.1±642.9重度子癇前期組（n=40）　673.7±193.2　1304.8±288.4 t值　14.6　40.7 P值　＜0.05　＜0.05

3　討論

OX40/OX40L是一對重要的協同刺激分子，在機體的免疫應答和多種疾病中，其相互作用能促進CD4+T細胞的活化、增殖、遷移，延長其壽命，并促進生發中心的形成和DC的分化成熟［16］，OX40L協同刺激T細胞的活化，促進B細胞產生高效價抗體和類別轉換，介導OX40+T細胞向炎性反應部位浸潤。OX40/OX40L在機體的免疫應答和多種疾病中起重要作用，通過干預其相互作用所進行的免疫治療已在許多動物模型上取得非常好的療效。OX40屬于腫瘤壞死因子受體超家族，它的作用僅限于激活T細胞和它的表達方式。OX40對于T細胞與DC細胞間相互作用及T細胞與記憶性T細胞的增殖有至關重要的作用。OX40的配體（OX40L）的表達不僅在樹突狀細胞，而且在其他細胞，如B細胞、血管內皮細胞、自然殺傷細胞和肥大細胞。OX40L廣泛分布的病理生理意義需要進一步研究，特別是血管內皮上表達的OX40L可能在炎癥性血管炎及動脈粥樣硬化中發揮作用。最近的研究及動物模型表明OX40L可能參與了許多疾病的病理生理過程。封閉OX40/OX40L的相互作用已被證明可以預防、治愈或改善這些疾病。相反，激活OX40可能打破機體對腫瘤細胞的耐受進而導致腫瘤的發生。許多研究表明OX40L在乳腺癌、原發性干燥綜合征、狼瘡、過敏性紫癜、支氣管哮喘、皮膚病及Graves病等眾多免疫疾病中都有升高趨勢。ICAM-1（intercellular cell adhesion molecule-1，即細胞間黏附分子-1），又叫做CD54，屬于黏附分子中免疫球蛋白超家族（IGSF）中的成員，是介導黏附反應重要的一個黏附分子［17］。ICAM-1在靜息的血管內皮細胞（VEC）上呈低水平表達，通過與血管內皮細胞表面上的特異性受體結合而發揮其生物學活性。ICAM-1在穩定細胞間相互作用起到重要作用，并促進白細胞和內皮細胞的遷移。ICAM-1不但可以促進炎癥部位的粘連，還可以控制腫瘤惡化和轉移，并且在調節機體免疫反應中起到重要作用。ICAM-1與其受體特異性的結合，促使了白細胞、炎癥細胞和腫瘤細胞等與內皮細胞間的黏附作用增強，促進內皮細胞活化，使得它們變得更容易穿透內皮。細胞間黏附分子介導細胞與細胞間或細胞與基質間相互接觸和結合，從而參與了細胞的信號轉導與活化、細胞組織生長及分化、免疫應答、炎癥反應、血管生成及腫瘤轉移等生理病理過程。

在本研究中重度子癇前期組OX40L水平明顯高于對照組，比較差異有統計學意義（P＜0..05），說明OX40L可能參與重度子癇前期的發病。重度子癇前期患者體內產生OX40L與OX40結合形成抗原抗體反應，通過促進CD4+T細胞的活化、增殖、遷移，延長其壽命，并促進生發中心的形成和DC的分化成熟，OX40L協同刺激T細胞的活化，促進B細胞產生高效價抗體和類別轉換，介導OX40+T細胞向炎性反應部位浸潤，導致重度子癇前期患者機體的炎癥免疫過度激活，從而對機體產生損害。OX40L通過上調T細胞表面的OX40來早期激活T細胞。輔助性T細胞T17細胞產生的IL-17通過誘導多種炎癥因子及趨化因子在炎癥性疾病中發揮重要作用。OX40/OX40L的相互作用促進IFN-γ和IL-4的分泌，而IFN-γ和IL-4可以抑制IL-17的產生。在沒有IL-4的微環境中OX40L對IL-17的抑制作用完全被IFN-γ逆轉，在缺乏IL-23的情況下OX40L仍然對IL-17有抑制作用。通過中斷IFN-γ來研究在IL-23及OX40L存在下IL-17的表達，發現IL-23可以促進IFN-γ的表達，而X40L可以增強IL-23的這種作用。在IL-23存在下，增加IFN-γ不僅可以逆轉OX40L對IL-17的抑制作用，反而增強IL-17的表達。

重度子癇前期組ICAM-1水平與對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05），說明ICAM-1可能參與重度子癇前期的發病。妊娠期高血壓疾病的病理生理變化是全身小血管痙攣，內皮損傷及局部缺血。重度子癇前期患者ICAM-1的表達明顯增強，可能是受到血管內皮細胞損傷的刺激，通過與其受體的特異性結合，使白細胞、炎癥細胞和腫瘤細胞等與內皮細胞間的黏附作用增強，從而促進內皮細胞活化，使得它們更容易穿透內皮。

正常妊娠是一種“特殊Th2現象”，即妊娠期母體是趨向于Th2型細胞因子參與的體液免疫，而避免了Th1型細胞因子參與的細胞免疫［18］。而重度子癇前期患者機體內Th1/Th2免疫狀態失衡，表現為Th1/Th2免疫狀態向Th1漂移［15］。OX40/OX40L是一組雙向信號，主要通過影響其介導產生的細胞因子，進而影響CD4+T細胞的分化。對CD4+T初始T細胞，在中性環境下，它促進CD4+T初始細胞向輔助T細胞2（Th2）方向分化，然而在抗原刺激下，它促使CD4+T初始細胞分泌IL-12、IFN-α，可促進其向Th1方向分化，抑制向Th2方向分化［19-21］。處于可逆期的單核細胞來源MΦDC，在OX40/OX40L信號作用下使MΦDC細胞膜分子CD80、CD86、CD54、CD40表達上調。OX40/ OX40L除發揮共刺激信號作用之外，還介導了T細胞和內皮細胞間的黏附［22-23］。在重度子癇前期患者體內OX40/OX40L受到抗原的刺激，促使CD4+T初始細胞分泌IL-12、IFN-α，促進其向Th1方向分化。在其信號作用下并促進了MΦDC細胞膜分子CD54（ICAM-1）的表達，進而介導Th1細胞與內皮細胞的黏附，促進內皮細胞活化，使其通透性增強，進而使Th1細胞向炎性部位游走發揮作用。

子癇前期的治療目前僅局限于對癥支持治療，延長患者孕周，病情加重時終止妊娠，尚無一種從根本上控制其發病的手段，所以研究清楚子癇前期的發病機制是為子癇前期患者及其胎兒帶來莫大希望及幫助的辦法。在未來的研究中，可以增加輕度子癇前期組及子癇組進一步研究這兩種因子在此種疾病中的作用；可以通過阻斷OX40與OX40L抗原抗體反應或阻斷ICAM-1介導的信號轉導，甚至在高水平層次敲除OX40L和ICAM-1的基因，負調控其轉錄水平等來延緩或阻止子癇前期的發病。許多因子已被證實與子癇前期的發生有關，如Th1/Th2的比例平衡、Th17細胞與Treg細胞的免疫調節、Foxp與T-bet均與子癇前期有關，或許這些因子以及OX40L與ICAM-1之間有著內在的聯系，然而目前尚無此類文獻報道，或許在未來的子癇前期機制研究中可以明確這些因子相互之間的作用，進而指導臨床工作中子癇前期的檢驗與治療。

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MIAO Lu，YANG Hai-lan，HAN Fang，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（14）：086-089

Objective：To discuss the role of OX40L and ICAM-1 in the pathogenesis of preeclampsia by examining OX40L and ICAM-1 levels in peripheral blood of patients with preeclampsia.Method：Forty cases of severe preeclampsia（the severe preeclampsia group） and thirty-five cases of normal pregnancy women（the control group） admitted to our hospital from April 2014 to August 2014 were selected as the objects，then whose OX40L and ICAM-1 levels were detected and compared by ELISA method.Result：The OX40L and ICAM-1 values of the severe preeclampsia group were significantly increased compared with the control group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion：The expression of OX40L and ICAM-1 increased in severe preeclampsia group may be associated with the pathogenesis and development of preeclampsia.

OX40L； ICAM-1； Peripheral blood； Severe preeclampsia； Pathogenesis

①山西醫科大學 山西 太原 030001

②山西醫科大學第一醫院

楊海瀾

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.14.022

2015-11-20） （本文編輯：劉蕾）