冠狀動(dòng)脈結(jié)扎制備大鼠心肌梗死模型及評價(jià)實(shí)驗(yàn)研究*

胡　珍，陳景瑞，魏　靜，李　瀾，王玲燕，樊官偉

·實(shí)驗(yàn)研究·

冠狀動(dòng)脈結(jié)扎制備大鼠心肌梗死模型及評價(jià)實(shí)驗(yàn)研究*

胡珍，陳景瑞，魏靜，李瀾，王玲燕，樊官偉

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193）

［目的］探討建立穩(wěn)定可靠、易操作和高存活率的大鼠心肌梗死模型制備方法及其有效的評價(jià)手段。［方法］40只雄性SD大鼠腹腔麻醉后，開胸手術(shù)結(jié)扎其冠狀動(dòng)脈左前降支。術(shù)后24 h，超聲心動(dòng)圖觀察左室功能變化，左室導(dǎo)管術(shù)檢測大鼠血流動(dòng)力學(xué)，取出心臟，觀察心臟外形，切片進(jìn)行2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色，全自動(dòng)生化儀檢測血液心肌酶學(xué)指標(biāo)。［結(jié)果］該法的手術(shù)存活率高達(dá)91.67%，術(shù)后24 h取出心臟可見左心室梗死區(qū)心室壁顏色較周圍心肌淺，超聲心動(dòng)圖和血流動(dòng)力學(xué)結(jié)果顯示模型組大鼠左室功能及室壁運(yùn)動(dòng)情況明顯弱于假手術(shù)組。TTC染色顯示模型組大鼠心肌梗死明顯。［結(jié)論］該方法提高了大鼠急性心肌梗死模型的存活率，模型穩(wěn)定，重復(fù)性好，可滿足一次結(jié)扎或缺血再灌注的需求。

急性心肌梗死；動(dòng)物模型；超聲心動(dòng)圖；血流動(dòng)力學(xué)

據(jù)《中國心血管病報(bào)告2013》資料，中國心血管病患病率處于持續(xù)上升的階段。目前，估計(jì)中國有心血管病患者2.9億，其中心肌梗死患者約250萬。近年來，隨著中國國民經(jīng)濟(jì)的持續(xù)發(fā)展和人口的老齡化，急性心肌梗死（AMI）的發(fā)病率持續(xù)升高。為了更加全面的了解AMI的發(fā)生、發(fā)展及其對機(jī)體的影響，增加臨床診斷和治療手段的有效性，提高AMI患者的生存率和生活質(zhì)量，進(jìn)行AMI的基礎(chǔ)性研究對于臨床診療具有重要價(jià)值。制備和應(yīng)用動(dòng)物AMI模型是研究人類AMI病理過程和診斷治療的主要方法［1-2］。

自Johns等［3］報(bào)道了通過結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈建立大鼠心肌梗死模型的方法，由于心肌梗死（MI）動(dòng)物模型穩(wěn)定性好、重復(fù)性高可以較好地模擬臨床心肌梗死的病理狀態(tài)和病理生理過程倍受基礎(chǔ)研究人員的親睞，但是目前現(xiàn)有的MI模型制作方法普遍存在操作復(fù)雜，設(shè)備要求高，術(shù)后死亡率高等缺點(diǎn)。MI模型的制備多選擇Sprague-Dawley（SD）和Wistar兩個(gè)常用品種大鼠，雌雄不限［4］。故本實(shí)驗(yàn)選取成年健康的雄性SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈制備MI模型，采用及時(shí)有效的手段評價(jià)模型的成功與否，為開展有關(guān)實(shí)驗(yàn)研究奠定了較好的實(shí)驗(yàn)技術(shù)基礎(chǔ)。

1　材料與儀器

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物成年健康的雄性SD大鼠，體質(zhì)量為（220±20）g，SPF級(jí)，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)為SCXK（軍）2014-0001。大鼠采用標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)方式，明暗環(huán)境各12 h交替。

1.2試劑與儀器水合氯醛（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：Q/12HB 4218-2009），異氟烷（國藥準(zhǔn)字H19980141），2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，索萊寶），醫(yī)用生理鹽水等。蔡司解剖顯微鏡（STEMI2000-C，德國），BIOPAC多導(dǎo)生理記錄儀MP100-CE（美國），Millar壓力-容積系統(tǒng)（澳大利亞），Vevo2100超高分辨率小動(dòng)物超聲實(shí)時(shí)影像系統(tǒng)（加拿大），全自動(dòng)生化檢測儀（Microlab 300，荷蘭），恒溫電熱毯。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1動(dòng)物術(shù)前準(zhǔn)備適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，術(shù)前12 h禁食，自由飲水。隨機(jī)將大鼠分為假手術(shù)組（n＝10）和模型組（n＝30）。將大鼠稱質(zhì)量，用5%水合氯醛按6 mL/kg劑量腹腔注射麻醉。

2.2動(dòng)物模型制備大鼠麻醉后去毛，仰臥位固定，碘附消毒左側(cè)胸前及腋窩下皮膚，胸部備皮。將電極分別插入大鼠右上肢（負(fù)極）和左下肢（正極）記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖。沿左側(cè)第四肋間（或心臟搏動(dòng)最明顯處）做一斜行切口約1.5 cm，用止血鉗逐層分離皮下組織，少量鈍性分離肋間肌。在心臟搏動(dòng)最明顯處用止血鉗輕輕穿破胸膜，撐開胸廓（力度適中切忌撐斷肋骨）。在手術(shù)顯微鏡下，暴露心臟，剝開心包，輕壓右胸，將心臟輕輕擠壓出胸壁外，持5/0無創(chuàng)縫合針絲線，于肺動(dòng)脈圓錐與左心耳之間，平行左心耳下邊緣1～2 mm處進(jìn)針，深度為1.0～1.5 mm進(jìn)行結(jié)扎，結(jié)扎力度適中，以防將心肌和血管切斷。個(gè)別大鼠在冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后會(huì)出現(xiàn)短暫心律失常，絕大多數(shù)能夠自行恢復(fù)，快速心律失常發(fā)生時(shí)可直接在心臟表面滴少許利多卡因；當(dāng)心率過慢時(shí)可直接心臟按摩恢復(fù)。清理胸腔，擠出胸腔內(nèi)空氣，用3/0的縫合線逐層縫合肌肉，關(guān)閉胸腔并對切口消毒。手術(shù)過程中保持溫度。假手術(shù)組大鼠只穿針不結(jié)扎冠狀動(dòng)脈，其余操作步驟與模型組相同，正常組大鼠不做任何處理。

模型成功判斷標(biāo)準(zhǔn)：結(jié)扎后肉眼可見心臟表面相應(yīng)區(qū)域鮮紅色變成蒼白色，血管供應(yīng)范圍心肌紫紺，室壁活動(dòng)減弱；結(jié)扎后心電表現(xiàn)為ST段弓背抬高或（和）T波高聳或與其形成單向曲線，QRS波電壓增高或（且）波幅增寬均為心肌缺血標(biāo)志。

3　模型評價(jià)

3.1超聲評價(jià)左室功能變化術(shù)后24 h進(jìn)行大鼠心動(dòng)超聲。Vevo2100超高分辨率小動(dòng)物超聲實(shí)時(shí)影像儀（加拿大）開機(jī)后待用，將探頭MS-250固定，升降臺(tái)調(diào)節(jié)探頭高度，旋轉(zhuǎn)調(diào)節(jié)探頭方向。將大鼠稱重后標(biāo)記，用異氟烷麻醉（完全麻醉：1%氧氣+5%異氟烷于麻醉盒內(nèi)麻醉；持續(xù)麻醉：1%氧氣+2%異氟烷）。用膠帶將大鼠腹部向上固定于操作臺(tái)，設(shè)置溫度為37℃。在大鼠胸部均勻涂抹一層超聲耦合劑，將操作臺(tái)向右下傾斜30°～45°，并通過X、Y微調(diào)操作臺(tái)位置。胸骨旁長軸，B-型超聲長軸切面（二維成像），可見左心室，主動(dòng)脈和二尖瓣瓣葉，獲得圖像。位置不變，M-型超聲長軸切面，獲得M-mode圖像，取樣線位于最大腔徑處。對M-型超聲圖像進(jìn)行測量，選擇長軸測量包（PLAX）對大鼠收縮期和舒張期進(jìn)行測量，獲得左室前壁厚度（LVAW）、左室內(nèi)徑（LVID）、左室后壁厚度（LVPW）、左室射血分?jǐn)?shù)（EF）、左室短軸縮短率（FS）、左室容積（LV Vol）等參數(shù)。在B-Mode下記錄一段影像，測量左室面積變化分?jǐn)?shù)（FAC）。使用血流多普勒測量二尖瓣血流變化情況。所有數(shù)據(jù)均在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，采用超聲系統(tǒng)自帶軟件進(jìn)行分析。

3.2左室插管評價(jià)血流動(dòng)力學(xué)變化超聲結(jié)束后，用5%水合氯醛按6 mL/kg劑量腹腔注射麻醉，將大鼠固定在鼠板上，待大鼠平穩(wěn)后記錄心電圖。頸部皮膚去毛，碘酒消毒，取頸前正中縱行切口約2 cm，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈1.5 cm左右，用3/0縫合線結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，再用中號(hào)動(dòng)脈夾夾住頸總動(dòng)脈近心端。導(dǎo)管近端經(jīng)壓力換能器與微機(jī)相連，通過Millar壓力-容積系統(tǒng)進(jìn)行監(jiān)測。將1 mL注射器針頭尖端彎曲（自制）在結(jié)扎線處下方挑開一小斜口，導(dǎo)管自右頸總動(dòng)脈壁切口向近心端輕輕插入（同時(shí)慢慢放松動(dòng)脈夾），推入過程手法要輕，遇阻力時(shí)不可用力強(qiáng)行推進(jìn)，避免刺破血管而且可減少血管受刺激后的痙攣，推進(jìn)4～5 cm至主動(dòng)脈瓣處，稍加用力可產(chǎn)生輕微的突破感，再繼續(xù)伸入約0.5 cm，顯示屏上出現(xiàn)振幅較高，波寬較大的心室內(nèi)壓變化波形，舒張壓在0 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa，下同）左右表示導(dǎo)管已進(jìn)入左心室，停止插管，用絲線將導(dǎo)管固定在套管的側(cè)壁上。穩(wěn)定數(shù)分鐘后，分別記錄大鼠心率（HR）、左心室收縮壓峰值（LVSP）、左心室舒張末壓（LVEDP）及左心室收縮及舒張最大壓力變化速率（±dp/dt max）。

3.3血清心肌酶學(xué)：磷酸肌酸激酶（CK），肌酸激酶同工酶（CK-MB），乳酸脫氫酶（LDH）的檢測左室插管結(jié)束后，大鼠腹經(jīng)主動(dòng)脈取血，收集全血，置于37℃水浴30 min，3 000 r/min離心10 min，分離血清，收集上清液，分裝于1.5 mL EP管，全自動(dòng)生化分析儀檢測CK、LDH、CK-MB含量。

3.4心肌梗死TTC染色心臟樣本采集在取血后進(jìn)行，剪破右心耳，沿取血位置灌入50 mL左右生理鹽水，沖洗心臟。取心臟包裹于錫箔紙中，放入-80℃冰箱速凍30 min，置于大鼠腦切片槽中，將心臟切成1～2 mm厚度的切片，放入1%TTC溶液中，將盛有TTC溶液的避光容器放入37℃水浴，5～8 min后取出心臟切片放入10%甲醛溶液中固定，24 h后進(jìn)行拍照，觀察梗死范圍。梗死范圍以梗死心肌占缺血心肌重量百分比表示。

3.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4　結(jié)果

4.1大鼠心電圖及梗死面積變化術(shù)后24 h，二導(dǎo)聯(lián)心電圖結(jié)果顯示模型組大鼠ST段抬高，假手術(shù)組大鼠心電圖基本正常（圖1）。TTC結(jié)果顯示模型組大鼠較之假手術(shù)組心肌梗死明顯，假手術(shù)組基本沒有梗死區(qū)域（圖2）。模型組大鼠心肌梗死范圍達(dá)35.67%。

圖1　模型組與假手術(shù)組大鼠心電圖對比Fig.1　Comparison of the electrocardiograph in rats between model and sham group

圖2　模型組與假手術(shù)組大鼠心肌梗死面積對比Fig.2　Comparison of the myocardial infarct size in rats between model and sham group

4.2大鼠心肌酶學(xué)變化模型組大鼠血清中CK、LDH、CK-MB含量與假手術(shù)組大鼠CK、LDH、CK-MB水平比較均顯著增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1　模型組與假手術(shù)組大鼠LDH，CK及CK-MB的比較Tab.1　Comparison of LDH，CK and CK-MB between model and sham group（U/L

表1　模型組與假手術(shù)組大鼠LDH，CK及CK-MB的比較Tab.1　Comparison of LDH，CK and CK-MB between model and sham group（U/L

注：與假手術(shù)組比較，**P＜0.01。

組別　LDH　CK　CK-MB假手術(shù)組 1 405.50±472.28　0 784.67±108.94　1 333.67±259.90模型組　2 614.67±394.97**1 665.33±76.62**2 465.67±143.31**

4.3大鼠血流動(dòng)力學(xué)變化反映左室收縮功能的指標(biāo)LVSP和+dp/dtmax和反映舒張功能的指標(biāo)-dp/dtmax，模型組大鼠明顯低于假手術(shù)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與假手術(shù)組相比，模型組LVEDP和HR沒有明顯變化，而模型組左室發(fā)展壓（LVDP＝LVSP-LVEP）較之假手術(shù)組則顯著降低（P＜0.01），對于左心室舒張末壓和心率，兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表2　模型組與假手術(shù)組大鼠LVSP，LVEDP，LVDP，HR及±dp/dtmax的比較（Tab.2　Comparison of LVSP，LVEDP，LVDP，HR and ±dp/dtmax between model and sham group

表2　模型組與假手術(shù)組大鼠LVSP，LVEDP，LVDP，HR及±dp/dtmax的比較（Tab.2　Comparison of LVSP，LVEDP，LVDP，HR and ±dp/dtmax between model and sham group

注：與假手術(shù)組比較，**P＜0.01。

組別　LVSP（mmHg）　LVEDP（mmHg）　LVDP（mmHg）假手術(shù)組　118.93±4.35**　28.19±3.66　90.74±2.67**模型組　096.94±4.09**　24.57±3.24　72.37±2.73**組別　HR（bmp）　+dp/dtmax（mmHg） -dp/dtmax（mmHg）假手術(shù)組　440.33±18.05　5 734.30±298.74**-6 275.38±556.92**模型組　422.46±28.11　3 416.72±627.89**-3 323.06±399.54**

4.4大鼠左室功能變化與假手術(shù)組相比，模型組大鼠左室前壁和后壁收縮末期厚度（LVAWs和LVPWs）均明顯變薄（P＜0.05），舒張末期左室前壁厚度（LVAWd）略有變薄但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，同時(shí)模型組大鼠左室舒張末內(nèi)徑（LVIDd）和收縮末內(nèi)徑（LVIDs）較之假手術(shù)組顯著增加（P＜0.01），見表3。模型組大鼠左室EF、FS及FAC與假手術(shù)組比較均勻明顯下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），見表4。模型組較假手術(shù)組E/A和射血時(shí)間（ET）顯著下降，而等容舒張時(shí)間和心肌做功指數(shù)（Tei指數(shù)）則明顯變大，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。見表5。

表3　模型組與假手術(shù)組大鼠左室壁厚度和內(nèi)徑的比較（x±s）Tab.3　Comparison of left ventricular wall thickness and inner diameter between model and sham group（mm

表3　模型組與假手術(shù)組大鼠左室壁厚度和內(nèi)徑的比較（x±s）Tab.3　Comparison of left ventricular wall thickness and inner diameter between model and sham group（mm

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　LVAWd　LVAWs　LVIDd　LVIDs　LVPWs假手術(shù)組1.34±0.02 2.06±0.22*5.32±0.51**2.93±0.50**2.34±0.22*模型組　1.11±0.28 1.55±0.44*6.80±0.67**5.31±0.79**1.91±0.26*

表4　模型組與假手術(shù)組大鼠FAC，EF及FS的比較（x±s）Tab.4　Comparison of FAC，EF and FS between model and sham group（%

表4　模型組與假手術(shù)組大鼠FAC，EF及FS的比較（x±s）Tab.4　Comparison of FAC，EF and FS between model and sham group（%

注：與假手術(shù)組比較，**P＜0.01。

組別　FAC　EF　FS假手術(shù)組　64.10±7.44**　75.65±5.91**　45.07±5.41**模型組　36.33±6.04**　43.47±8.86**　22.23±5.04**

表5　模型組與假手術(shù)組大鼠E/A，等容收縮時(shí)間（ICT），等容舒張時(shí)間（IRT），ET及Tei指數(shù)的比較（Tab.5　Comparison of E/A，ICT，IRT，ET，and Tei index between model and sham group

表5　模型組與假手術(shù)組大鼠E/A，等容收縮時(shí)間（ICT），等容舒張時(shí)間（IRT），ET及Tei指數(shù)的比較（Tab.5　Comparison of E/A，ICT，IRT，ET，and Tei index between model and sham group

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別　E/A　ICT（ms）　IRT（ms）　ET（ms）　Tei指數(shù)假手術(shù)組1.91±0.20　14.45±3.22 18.92±2.76　60.81±5.84 0.55±0.06模型組　1.32±0.15**15.56±1.24 24.47±2.36**53.72±4.78*0.75±0.08**

圖3　模型組與假手術(shù)組左心室二尖瓣血流頻譜示意圖對照Fig.3　Comparison of left ventricular mitral inflow schematic diagram in rats between model and sham group

5　討論

實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠急性心肌梗死模型，術(shù)后24h后結(jié)合心電圖、超聲心動(dòng)圖、左心室插管術(shù)及心肌酶學(xué)指標(biāo)和TTC染色，全面評價(jià)模型的成功與否。

心肌梗死或受損后，心肌細(xì)胞膜通透性增加，心肌細(xì)胞中CK、LDH、CK-MB泄露，血液中含量急劇上升，其表達(dá)水平為心肌梗死的指示性指標(biāo)之一［5］。由于開胸及穿針不可避免的會(huì)對肌肉和心肌造成輕微的損傷，各種類型的的心臟手術(shù)都會(huì)引起血清CK-MB等心肌酶活性的增加，且心肌梗死發(fā)生后其活性在12～36 h達(dá)峰，但這并不表明這些反應(yīng)心肌梗死變化的指標(biāo)沒有意義，CK-MB作為傳統(tǒng)的心肌標(biāo)志物也有它的應(yīng)用價(jià)值，臨床上血清CK-MB測定的意義在于診斷急性心肌梗死。本研究也采用心肌酶學(xué)來作為評價(jià)急性心梗模型成功的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。

血流動(dòng)力學(xué)測定評價(jià)心功能的方法，以其結(jié)果直接可靠和客觀的特點(diǎn)，已成為評價(jià)左室心功能的一種重要手段［6］。實(shí)驗(yàn)采用左室插管術(shù)這種直接的血流動(dòng)力學(xué)檢測方法，初步探討了大鼠急性心肌梗死24 h后血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的變化，結(jié)果顯示模型組大鼠LVSP、LVDP和左心室收縮及舒張最大壓力變化速率（±dp/dt max）明顯低于假手術(shù)組，標(biāo)志著大鼠急性心肌缺血模型的成功，結(jié)果與文獻(xiàn)［7］報(bào)道的結(jié)果相似。

一直以來，左室功能都是急性心肌梗死后的一項(xiàng)重要預(yù)后及評價(jià)指標(biāo)，超聲心動(dòng)圖可以客觀直接的評價(jià)大鼠急性心肌梗死后左心功能改變［8］。近年來國外也有采用超聲心電圖評價(jià)大鼠梗死后左心室功能變化的研究［9］，實(shí)驗(yàn)采用超聲心動(dòng)圖及多普勒成像技術(shù)結(jié)合Tei指數(shù)對大鼠急性心肌梗死后24 h左室功能進(jìn)行全面的評價(jià)。檢查結(jié)果顯示模型組大鼠射血分?jǐn)?shù)，左室面積變化，短軸縮短率，E/A較之假手術(shù)組均明顯下降，反映心臟整體功能的Tei指數(shù)，左室收縮末期內(nèi)徑顯著高于假手術(shù)組。這些反映左心室功能指標(biāo)的改變，進(jìn)一步表明了大鼠急性心肌梗死模型建立成功。

Tei指數(shù)是一個(gè)綜合評價(jià)心臟收縮與舒張功能的指標(biāo)［10］。隨著心肌梗死的發(fā)生，左室功能的下降，Tei指數(shù)逐漸增大［11］。通過Tei指數(shù)不僅可以評價(jià)大鼠急性心肌梗死后的心臟的整體功能變化情況，根據(jù)其計(jì)算公式Tei指數(shù)＝（ICT+IRT）/ET還可以了解心功能障礙的時(shí)相，從而更加準(zhǔn)確深入地分析急性心肌梗死早期的心功能變化情況［12-13］。ST段抬高是急性心肌梗死早期最重要的心電圖表現(xiàn)［14］，Tei指數(shù)與LVEF值、ICT與心電圖ST段抬高程度相關(guān)性良好，且測量方法重復(fù)性高，甚至有學(xué)者認(rèn)為Tei指數(shù)還可作為急性心肌梗死的獨(dú)立預(yù)測因子［15-16］。因此，將Tei指數(shù)及相關(guān)參數(shù)結(jié)合超聲心動(dòng)圖、多普勒成像技術(shù)等傳統(tǒng)直觀的評價(jià)指標(biāo)進(jìn)行綜合分析，可以進(jìn)一步完善基礎(chǔ)研究中對大鼠急性心肌梗死早期的評價(jià)，同時(shí)也能更為準(zhǔn)確地評估大鼠心梗后心功能變化。

有研究表明超聲心動(dòng)圖在診斷急性心肌梗死的特異性、陽性預(yù)測值高于心電圖，而心電圖假陽性率高于超聲心動(dòng)圖［17］。在急性心肌梗死早期應(yīng)用超聲心動(dòng)圖檢測左室功能異常是評價(jià)及診斷的重要手段之一。超聲心動(dòng)圖具有無痛苦，安全，方便，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，可以提供準(zhǔn)確客觀的評價(jià)結(jié)果。因此，超聲心動(dòng)圖對于左室功能的無創(chuàng)性評估已成為急性心肌梗死后危險(xiǎn)分層的重要方法［18］。

目前，大鼠心肌梗死模型制備有多種方法，主要分為手術(shù)造模和藥物誘導(dǎo)建模［19-20］。手術(shù)造模主要有冠狀動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)，冠狀動(dòng)脈阻塞術(shù)和冠狀動(dòng)脈夾閉術(shù)等手術(shù)方法；藥物造模主要用到的藥物為異丙腎上腺素和垂體后葉素，給藥方式一般為腹腔注射。本研究造模方法為手術(shù)結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，運(yùn)用此類方法的主要優(yōu)點(diǎn)為周期短，梗死心肌定位準(zhǔn)確，操作簡便、迅速。同時(shí)也可以觀察梗死后再灌注對心肌細(xì)胞的變化及損傷、恢復(fù)情況。冠狀動(dòng)脈左前降支結(jié)扎造成心肌梗死的病理生理、生化改變與臨床心肌梗死的契合度度更高，可以人為反復(fù)造成心肌梗死或缺血后再灌注，模型的穩(wěn)定性以及可重復(fù)性好［21］。因此，冠脈左前降支結(jié)扎制備心肌梗死模型是目前各種心肌梗死模型中最有價(jià)值、最易于推廣的方法。

在諸多報(bào)道中，采用手術(shù)方法制備心肌梗死模一般會(huì)采用氣道插管。經(jīng)口氣管插管和氣管切開插管是當(dāng)下最為常見的兩種氣道插管方法。氣管切開插管雖然比較準(zhǔn)確直觀，但在切開氣管時(shí)易造成氣道內(nèi)分泌物過多導(dǎo)致窒息，術(shù)后肺感染的可能性也大，在縫合時(shí)容易造成氣管塌陷，氣管狹窄或氣管瘺，這些都嚴(yán)重影響術(shù)后大鼠的存活率。經(jīng)口氣管插管要求技巧性和精細(xì)程度都較高，也會(huì)在頸部造成創(chuàng)傷增加術(shù)后感染率，拉舌、插管需多次訓(xùn)練，對手法的要求較高，多次插管失敗可造成喉頭黏膜水腫，導(dǎo)致窒息。有證據(jù)表明經(jīng)口氣管插管的方式會(huì)影響大鼠的心率，使大鼠心率明顯下降，且在手術(shù)中常有心臟驟停死亡現(xiàn)象的發(fā)生，這可能與反復(fù)刺激大鼠咽喉部，導(dǎo)致興奮迷走神經(jīng)引起竇性停搏有關(guān)［4］。

鑒于上述原因，本實(shí)驗(yàn)造模方法不使用氣管插管和呼吸機(jī)，簡化了手術(shù)操作過程，盡管在一定程度增加了手術(shù)難度，也對實(shí)驗(yàn)者提出了較高的要求，但是避免了不必要的損傷術(shù)后并發(fā)癥減少，術(shù)后存活率增加，同時(shí)通過反復(fù)訓(xùn)練可降低術(shù)中死亡率，這也是一個(gè)科研作者應(yīng)該追求的。本實(shí)驗(yàn)的手術(shù)存活率高達(dá)91.67%，且綜合上述評價(jià)結(jié)果及結(jié)合二導(dǎo)聯(lián)心電圖和TTC染色，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)方法操作簡單迅速，創(chuàng)傷輕，模型成功率高，結(jié)果穩(wěn)定可靠。

綜上所述，實(shí)驗(yàn)通過超聲、血流動(dòng)力學(xué)、TTC染色、心肌酶學(xué)等指標(biāo)客觀評價(jià)了急性心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ停瑸檫M(jìn)一步的基礎(chǔ)研究提供了穩(wěn)定可靠、重復(fù)性好的動(dòng)物模型制備方法。為從事心肌梗死及相關(guān)方面研究的研究者在模型建立和評價(jià)中提供了借鑒。

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（本文編輯：馬英，高杉）

《天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)》新增DOI全文上網(wǎng)服務(wù)

《天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)》獲得了中國科技信息研究所的立項(xiàng)資助，免費(fèi)開通了自1982年創(chuàng)刊以來所有文章的DOI全文上網(wǎng)服務(wù)，讀者可以通過輸入有效的DOI標(biāo)志符（例如DOI：10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.01），即可解析到原始資源，從而實(shí)現(xiàn)在本編輯部網(wǎng)站下載全文。包括兩種方法：1）直接登陸中文DOI標(biāo)志符的網(wǎng)址http://www.chinadoi.cn/，或者IDF的網(wǎng)址http://dx. doi.org/，輸入某篇文章的DOI號(hào)10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.01，直接檢索。2）IDF的網(wǎng)址http://dx.doi.org/轉(zhuǎn)換成可以直接訪問的URL地址，例如：http://dx.doi.org/10.11656/j.issn.1673-9043.2014.01.01，從而實(shí)現(xiàn)文章檢索和下載。

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Establishment and evaluation experimental study of acute myocardial infarction in rats

HU Zhen，CHEN Jing-rui，WEI Jing，LI Lan，WANG Ling-yan，F(xiàn)AN Guan-wei
（Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］To explore the establishment of a stable and reliable，easy operation and high survival rates of rats with acute myocardial infarction model preparation and effective evaluation methods.［Methods］The 50 male SD rats were anesthetized，thoracotomy left anterior descending coronary artery ligation.After 24 h，observed with echocardiograph changes in left ventricular function and left ventricular catheterization rat blood dynamics.Remove the heart，TTC sections were stained；automatic biochemical analyzer to detect blood serum creatine kinase indicators.［Results］This method of surgery survival rates as high as 91.67%.After 24 h，remove the cardiac left ventricle infarcted ventricular wall visible color of light than the surrounding myocardium.In the model group，echocardiographic and hemodynamic showed left ventricular function and wall motion was obviously weaker than the sham group.TTC staining showed significant myocardial infarction in the model group.［Conclusion］This method improves the survival rate of rats with acute myocardial infarction model，the model is stable，reproducible，and can meet once ligation or ischemia-reperfusion needs.

acute myocardial infarction；animal model；echocardiography；hemodynamic

R541.4

A

1672-1519（2016）02-0090-06

10.11656/j.issn.1672-1519.2016.02.08

國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃）項(xiàng)目（2012CB518404）；國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（81273891）。作者簡介：胡珍（1986-），女，博士，主要從事中藥干預(yù)內(nèi)皮祖細(xì)胞治療缺血性心臟病的臨床及藥理研究工作。

樊官偉，E-mail：fgw1005@hotmail.com。

（2015-10-17）