血清轉化生長因子β1、血管內皮生長因子在布-加綜合征患者中的表達研究

丁曉帆，張端強，陸召軍，石　月，祖茂衡，徐　浩，高修銀

血清轉化生長因子β1、血管內皮生長因子在布-加綜合征患者中的表達研究

丁曉帆1，張端強1，陸召軍1，石月1，祖茂衡2，徐浩2，高修銀1

目的 研究血清轉化生長因子β1（TGF-β1）、血管內皮生長因子（VEGF）在布-加綜合征（BCS）患者中的表達，探討其在BCS病情進展中的作用。方法 選取101例BCS患者作為實驗組，選取健康體檢者125例作為對照組。采用ELISA法檢測兩組人群血清TGF-β1、VEGF表達水平。結果實驗組血清TGF-β1、VEGF的含量高于對照組血清TGF-β1、VEGF的含量，差異均有統計學意義（P＜0.001）。實驗組中單純BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表達水平比較，差異均有統計學意義（P＜0.001），其中，BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF水平高于BCS合并淤血性肝硬化患者，BCS合并淤血性肝硬化患者血清TGF-β1、VEGF水平高于單純BCS患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。BCS患者血清TGF-β1與VEGF呈正相關性（r=0.30，P=0.01）。結論 隨著BCS患者病情的進展，患者血清TGF-β1、VEGF表達水平增高，兩因子的協同作用可能會加快病情的發展進程。

布-加綜合征；轉化生長因子β1；血管內皮生長因子；肝纖維化

網絡出版時間：2016-5-9 15：43：11 網絡出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160509.1543.052.html

在我國，布-加綜合征（Budd-Chiari syndrome，BCS）表現為一種慢性疾病［1］，常由下腔靜脈和（或）肝靜脈阻塞導致肝纖維化，進一步形成淤血性肝硬化，最終發展為肝癌［2］。近年來，在對肝臟疾病的研究中，細胞因子的作用越來越受關注。研究［3］表明，血清轉化生長因子β1（transforming growth factor beta1，TGF-β1）、血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是與肝臟纖維化發生、發展密切相關的細胞因子。但以往多應用于慢性肝炎導致的肝纖維化、肝硬化的研究，較少應用于BCS的研究。該研究通過對血清TGF-β1、VEGF在BCS患者中表達的檢測，探討其在BCS病情進展中的作用。

1　材料與方法

1.1病例資料 實驗組為2013年11月～2014年11月徐州醫學院附屬醫院介入放射科收治的101例BCS患者，所選患者經下腔靜脈和（或）肝靜脈造影確診，排除標準：病毒性肝炎、酒精性肝炎及其他肝病患者或其他肝纖維化病變者；肝癌以外的其他惡性腫瘤患者。對照組為同期該院體檢中心體檢的健康者125例，入選標準：肝、腎功能等血清學指標正常，無酗酒史，無病毒性肝炎、免疫性肝炎等相關疾病。排除標準：合并肝纖維化相關疾病者；合并血栓、冠心病、糖尿病、腎病綜合征及腫瘤者。

1.2試劑與方法 實驗組患者在介入手術前抽取下腔靜脈血液5 ml，置于5 ml分離膠-促凝管中，室溫靜置30 min，在4℃條件下以3 000 r/min離心15 min，將上層血清裝入1.5 ml EP管中，置于-80℃冰箱中冷藏保存。冷藏過程中避免反復取出血清樣本，反復凍融。采集符合入選條件的健康體檢者肘靜脈血5 ml于5 ml分離膠-促凝管中，血清分離方法同實驗組。血清制備后，3個月內采用ELISA法檢測TGF-β1、VEGF含量，實驗過程嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.3統計學處理 采用SPSS 16.0軟件進行分析，呈正態分布的計量資料以±s表示。進行方差齊性檢驗，若方差齊，則兩組間指標比較采用獨立樣本t檢驗，否則采用Satterthwaite近似t檢驗；多組間比較方差齊時采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗，否則采用Welth法，組間兩兩比較采用Dunnet′s T3檢驗；相關性分析采用Pearson直線相關。

2　結果

2.1一般資料比較 101例BCS患者，男51例，女50例；年齡26～71（46.6±10.9）歲，其中，單純BCS患者53例，BCS合并淤血性肝硬化39例，BCS合并肝癌9例。125例正常對照者中，男67例，女58例；年齡28～77（46.4±8.8）歲。兩組在性別（Χ2= 0.216，P=0.642）、年齡（t=0.153，P=0.879）上具有可比性，差異無統計學意義。

2.2ELISA標準曲線方程 TGF-β1、VEGF兩種因子ELISA標準曲線方程的r2分別為0.997 1、0.996 1（r2＞0.99），提示各標準品濃度與吸光度值呈高度相關性，試劑盒良好，符合實驗要求。

2.3兩組TGF-β1、VEGF表達水平比較 實驗組血清TGF-β1、VEGF含量均高于對照組，兩組差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1　實驗組和對照組血清TGF-β1、VEGF表達水平比較（ng/L，±s）

表1　實驗組和對照組血清TGF-β1、VEGF表達水平比較（ng/L，±s）

項目實驗組（n=101）對照組（n=125）t值P值TGF-β1618.8±105.1471.6±61.813.1＜0.001 VEGF981.4±151.5684.1±71.819.4＜0.001

2.4實驗組中單純BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表達水平比較 血清TGF-β1、VEGF在單純BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者中比較，差異均有統計學意義（P＜0.001）。其中，BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF水平均高于BCS合并淤血性肝硬化患者，BCS合并淤血性肝硬化患者血清TGF-β1、VEGF水平均高于單純BCS患者，差異均有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.5相關性分析 對實驗組血清TGF-β1、VEGF水平進行相關性分析得出：TGF-β1和VEGF呈正相關性（r=0.30，P=0.01）。

3　討論

BCS患者因下腔靜脈、肝靜脈以及副肝靜脈的不同程度阻塞，導致其肝臟呈不同程度的淤血狀態。長期的淤血狀態引起肝臟局部發生慢性缺血低氧，進而導致肝細胞變性壞死，纖維組織和再生結節代替壞死肝細胞，逐漸發展為肝纖維化和淤血性肝硬化，最終導致肝癌的發生［4-5］。研究［6］表明BCS是發生淤血性肝硬化和肝癌的獨立危險因素，而且大多數的BCS患者并沒有病毒性肝炎、酒精性肝炎、中毒等其他直接損傷肝臟的因素存在［7］，因此肝臟的長期淤血、肝細胞的低氧狀態是BCS發生淤血性肝硬化甚至肝癌的重要危險因素。TGF-β1和VEGF作為肝纖維化發展至肝硬化乃至肝癌的重要細胞因子，目前較少用于BCS導致的淤血性肝硬化及肝癌研究中，因此，本研究主要分析BCS患者不同病程階段的血清TGF-β1和VEGF表達水平，探討其在BCS病情發展中的作用。

李曉虹等［3］對乙肝患者、乙肝導致的肝纖維化及肝硬化患者進行血清TGF-β1水平的研究，結果顯示：隨著病情的發展，患者血清TGF-β1水平逐漸升高。也有學者實驗［8］顯示，增加TGF-β1的表達可顯著加快肝纖維化的發展進展，相反，若抑制TGF-β1的合成或阻斷其信號通路可預防并減少各種肝纖維化模型的形成。本研究結果顯示：BCS患者隨著單純BCS、淤血性肝硬化至肝癌的發展，血清TGF-β1水平逐漸升高，且高于正常人群。分析其原因可能是，因下腔靜脈和肝靜脈的阻塞，BCS患者的肝臟表現為慢性缺血低氧，肝細胞發生持續性損傷和炎癥反應，進一步導致肝星狀細胞（hepatic stellate cell，HSC）、庫普弗（Kupfffer）細胞產生TGF-β1。隨著BCS患者病情進一步加重，肝組織呈現為更嚴重的缺血低氧，促使存活的肝細胞和HSC合成分泌更多的TGF-β1，HSC的持續活化，使細胞外基質不斷沉積，最終推進BCS病情發展。

VEGF在血管再生中發揮著重要的作用，能夠特異性地促進血管內皮細胞分裂、增殖，增加血管的通透性，是目前為止最受重視的血管生成因子之一［9］。有關于VEGF與肝纖維化發生、發展的相關報道很多，隨著肝纖維、肝硬化、肝癌病程的不斷發展，VEGF的表達逐漸增強，這點在醫學界已達成共識。本研究結果顯示：BCS患者隨著淤血性肝硬化乃至肝癌的不斷發展，血清VEGF水平逐漸升高，且高于正常人群，與以往研究［10-11］結果一致，分析其原因可能是：BCS患者肝靜脈和（或）下腔靜脈不同程度的阻塞，使肝靜脈回流壓力逐漸增大，導致肝臟呈現淤血狀態并出現缺血低氧刺激活化HSC，進而通過自分泌和旁分泌的途徑產生細胞因子，從而引起VEGF表達增高。至淤血性肝硬化階段，肝組織缺血低氧進一步加重，肝細胞壞死進一步增多，釋放更多的炎性介質，刺激HSC合成分泌更多的VEGF。這些結果表明，VEGF參與BCS患者淤血性肝硬化甚至肝癌的發生，提示從BCS患者肝臟纖維結締組織增生到腫瘤的形成過程，血管形成起著推動作用。

表2　單純BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表達水平比較（ng/L，±s）

表2　單純BCS患者、BCS合并淤血性肝硬化患者、BCS合并肝癌患者血清TGF-β1、VEGF表達水平比較（ng/L，±s）

與單純BCS比較：*P＜0.05，與BCS合并淤血性肝硬化比較：#P＜0.05

項目單純BCS（n=53）BCS合并淤血性肝硬化（n=39）BCS合并肝癌（n=9）F值P值TGF-β1585.7±118.3636.4±67.6*737.3±27.2*#10.6＜0.001 VEGF898.1±121.11031.7±121.6*1224.5±71.9*#15.7＜0.001

本研究的相關性分析得出：BCS患者血清TGF-β1和VEGF呈正相關性，這與李曉虹等［3］的研究結果一致。李東等［12］也指出：肝纖維化患者血清VEGF與TGF-β1水平呈正相關性，兩者聯合檢測可作為診斷及判斷病情的血清學指標。結合BCS血清TGF-β1和VEGF隨著病情進展逐漸升高，可以推斷這兩種因子的協同作用可能加快了BCS病情的發展。

綜上所述，隨著BCS患者病情的進展，患者血清TGF-β1、VEGF表達水平增高，兩因子的協同作用可能會加快病情的發展進程。因此，在臨床診療中，及早發現BCS患者血清TGF-β1、VEGF表達異常，在進行介入治療的同時，應盡早結合抗肝纖維化治療，及時解除肝臟的淤血性損傷，對延緩患者肝臟的損傷，減少BCS患者淤血性肝硬化甚至肝癌的發生有重要意義。

［1］ Cheng D，Xu H，Lu Z J，et al.Clinical features and etiology of Budd-Chiari syndrome in Chinese patients：a single-center study［J］.J Gastroenterol Hepatol，2013，28（6）：1601-7.

［2］ Kew M C，McKnight A，Hodkinson J，et al.The role of membranous obstruction of the inferior vena cava in the etiology of hepatocellular carcinoma in Southern African blacks［J］.Hepatology，1989，9（1）：121-5.

［3］ 李曉虹，楊蒲芳，戚紅霞，等.血清TGF-β1及VEGF在慢性乙肝、肝纖維化、肝硬化患者的臨床變化及其意義［J］.臨床消化病雜志，2011，23（3）：144-5，162.

［4］ Ferral H，Behrens G，Lopera J.Budd-Chiari syndrome［J］.AJR Am J Roentgenol，2012，199（4）：737-45.

［5］ 張慶橋，祖茂衡，徐 浩，等.布加綜合征合并肝細胞癌的介入治療［J］.中華放射學雜志，2010，44（8）：852-5.

［6］ Shrestha S M.Liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma in hepatic vena cava disease，a liver disease caused by obstruction of inferior vena cava［J］.Hepatol Int，2009，3（2）：392-402.

［7］ Darwish Murad S，Plessier A，Hernandez-Guerra M，et al.Etiology，management，and outcome of the Budd-Chiari syndrome［J］. Ann Intern Med，2009，151（3）：167-75.

［8］ Schnur J，Oláh J，Szepesi A，et al.Thioacetamide-induced hepatic fibrosis in transforming growth factor beta-1 transgenic mice［J］. Eur J Gastroenterol Hepatol，2004，16（2）：127-33.

［9］ Yoshiji H，Kuriyama S，Yoshii J，et al.Vascular endothelial growth factor and receptor interaction is a prerequisite for murine hepatic fibrogenesis［J］.Gut，2003，52（9）：1347-54.

［10］韓新強，祖茂衡.VEGF在下腔靜脈隔膜型布-加綜合征患者中異常表達的意義分析［J］.當代醫學，2010，16（35）：672-4.

［11］孫玉嶺，許培欽.VEGF在布加綜合征患者肝臟中的表達及其臨床意義［J］.實用診斷與治療雜志，2005，19（5）：333-4.

［12］李 東，李新宇，龔鈺清，等.血清血管內皮生長因子及轉化生長因子β1在肝纖維化患者中的表達及其意義［J］.中國綜合臨床，2013，29（2）：161-3.

Analysis of the expression of transforming growth factor-β1 and vascular endothelial growth factor in Budd-Chiari syndrome

Ding Xiaofan，Zhang Duanqiang，Lu Zhaojun，et al
（School of Public Health，Xuzhou Medical College，Xuzhou 221004）

Objective To study the expression of transforming growth factor-β1（TGF-β1）and vascular endothelial growth factor（VEGF）in Budd-Chiari syndrome，and to explore whether serum TGF-β1 and VEGF play important roles in the progression of Budd-Chiari syndrome.Methods There were 101 cases of Budd-Chiari syndrome in the experimental group.During the same period，125 controls were recruited from the medical examination center.The serum concentrations of TGF-β1 and VEGF were detected by ELISA.Results The serum concentrations of TGF-β1 and VEGF in the experimental group were higher than those in the control group（P＜0.001）.In the BCS group，the serum concentrations of TGF-β1 and VEGF were different significantly between pure BCS patients，BCS with stasis cirrhosis patients and BCS with hepatic carcinoma patients（P＜0.001）.Among them，the serum concentrations of the two factors of BCS with hepatic carcinoma patients were higher than BCS with stasis cirrhosis patients，and the latter was higher than the pure BCS patients（P＜0.05）.The serum TGF-β1 and VEGF were positive correlated in the BCS group（r=0.30，P=0.01）.Conclusion The serum concentrations of TGF-β1 and VEGF increase with the progression of BCS，and the synergistic effect between TGF-β1 and VEGF may accelerate the development of BCS.

Budd-Chiari syndrome；transforming growth factor β1；vascular endothelial growth factor；liver fibrosis

R 575

A

1000-1492（2016）06-0877-04

2016-03-04接收

國家自然科學基金資助項目（編號：81172604）

1徐州醫學院公共衛生學院，徐州 2210042徐州醫學院附屬醫院介入放射科，徐州 221002

丁曉帆，女，碩士研究生；高修銀，男，教授，碩士生導師，責任作者，E-mail：xzgxy888 @163.com