心絞痛與急性心梗患者血清HMGB1的臨床意義

彭海仙 陳明志 宋斌★ 廖金平 李晨 蔣旭超

心絞痛與急性心梗患者血清HMGB1的臨床意義

彭海仙 陳明志 宋斌★ 廖金平 李晨 蔣旭超

目的 研究高遷移率族蛋白B1（HMGBl）和冠狀動(dòng)脈病變程度的關(guān)系，以探討HMGBl在冠心病診斷和治療中的價(jià)值。方法 選取健康人群220例以及冠心病患者345例，其中心絞痛（AP）189例，急性心肌梗死（AMI）156例作為觀察對(duì)象。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清高遷移率族蛋白B1（HMGBl）、超敏C反應(yīng)蛋白（Hs-CRP）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）與白介素-6（IL-6）水平。結(jié)果 AP患者血清HMGBl、hs-CRP、TNF-α與IL-6水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）；AMI患者血清HMGBl、hs-CRP、TNF-α與IL-6水平顯著高于AP和對(duì)照組（P＜0.01）；血清HMGBl水平與hs-CRP、TNF-α、IL-6水平呈正相關(guān)。結(jié)論 血清HMGBl濃度變化對(duì)AP和AMI具有明確診斷的價(jià)值，HMGBl可作為動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的預(yù)測(cè)因子。

冠心病 心絞痛 急性心肌梗死 HMGBl

高遷移率族蛋白B1（high mobility group protein B1，HMGB1）于1973年由Coodwin等在牛胸腺中提取發(fā)現(xiàn)，因其在凝膠電泳中遷移率快而得名［1］。HMGB1是一種高度保守的核蛋白，能夠穩(wěn)定核小體結(jié)構(gòu)并參與調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄［2］。HMGB1由激活的免疫細(xì)胞主動(dòng)分泌或壞死細(xì)胞被動(dòng)釋放至胞外［2］，誘導(dǎo)腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、IL-1、C-反應(yīng)蛋白（CRP）等炎性因子的轉(zhuǎn)錄，引發(fā)大量炎癥介質(zhì)釋放［3］。這些炎性因子可以預(yù)測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的嚴(yán)重性［4］。本研究通過臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室以及冠狀動(dòng)脈造影結(jié)果對(duì)患者進(jìn)行分類，檢測(cè)各組患者血清HMGBl的表達(dá)水平，研究其變化特點(diǎn)以及HMGB1與致炎因子［超敏C反應(yīng)蛋白（Hs-CRP）、TNF-α、IL-6］的相關(guān)性，報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 2012年6月至2015年2月因胸悶、胸痛、心前區(qū)不適在經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影首次確診為冠心病患者345例，其中心絞痛（AP）189例，急性心肌梗死（AMI）156例。對(duì)照組（NC組）為同一時(shí)期行健康體檢的健康人群220例。所有病例診斷均符合1999年WHO關(guān)于冠心病的診斷標(biāo)準(zhǔn)（冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)≥1支冠脈狹窄≥50%，經(jīng)心電圖、生化及心肌酶檢查后明確診斷）。排除未控制的高血壓、糖尿病、風(fēng)濕性心臟病、惡性腫瘤、慢性結(jié)締組織疾病或自身免疫性疾病、甲狀腺疾病及周圍血管性疾病或栓塞性疾病、嚴(yán)重肝腎功能不全、電解質(zhì)紊亂、服用抗炎類藥物如非甾體類抗炎藥及糖皮質(zhì)激素、6個(gè)月內(nèi)手術(shù)或近期腦卒中患者。

1.2 方法 （1）冠狀動(dòng)脈造影：采用經(jīng)橈動(dòng)脈或股動(dòng)脈途徑穿刺，行左、右冠狀動(dòng)脈造影。左冠狀動(dòng)脈投照≥4個(gè)體位，右冠狀動(dòng)脈投照≥2個(gè)體位，必要時(shí)加其他體位。診斷標(biāo)準(zhǔn)為≥1支冠脈主要分支狹窄程度≥50%。（2）血清標(biāo)本采集：所有受試者（禁酒、禁食＞8h，排除冠脈造影禁忌證行冠脈造影前）采集肘靜脈血3ml，混勻后4℃ 12000r/min離心15min，分離血清，吸取上清液，標(biāo)本編號(hào)，放置于-80℃冰箱內(nèi)凍存。（3）血清指標(biāo)測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒測(cè)定血清HMGB1水平（日本Shino-Test公司）；采用雙抗體夾心ELISA試劑盒測(cè)定血清hs-CRP、TNF-α和IL-6水平（美國(guó)R&D公司）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，計(jì)數(shù)資料采用n或%表示。對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布及方差齊性的計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析（oneway ANOVA），兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)：反之，采用非參數(shù)檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料比較 各組年齡、性別、酗酒、血壓、UA、TG、LDL差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與NC組比較，AP組、AMI組的吸煙率以及空腹血糖（FBS）、白細(xì)胞（WBC）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌鈣蛋白I（c-TnI）、血清總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）濃度明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。此外，F(xiàn)BS、CK-MB、c-TnI水平在AP組、AMI組依次增高，組間差異顯著（P＜0.05）。見表1。

表1 一般資料比較（±s）

表1 一般資料比較（±s）

注：與NC組比較，*P＜0.05；與AP組比較，#P＜0.05

組別AP組（n=189）AMI組（n=156）NC組（n=220）年齡（歲）63.45±8.3465.32±8.1359.63±9.25性別（男/女）113/7695/61129/91吸煙（%）43.92 *55.77 *17.73酗酒（%）15.8717.3116.36 SBP（mmHg）124.85±12.18121.48±14.35122.43±10.26 DBP（mmHg）76.47±9.1276.89±8.6572.35±8.22 FBS（mmol/L）5.69±1.36 *6.48±2.26 *#4.93±0.58 UA（μmol/L）301.82±97.34294.67±91.25292.35±85.73 WBC（×109/L）6.37±1.59 *7.89±2.64 *3.83±0.78 CK-MB（U/L）32.48±5.72 *51.24±16.92 *#15.98±4.36 c-TnI（mg/L）1.73±0.54 *11.39±5.62 *#0.06±0.08血脂（mmol/L）TC4.38±1.03 *4.27±0.76 *3.65±0.89 TG1.52±0.971.75±1.431.47±1.16 LDL2.49±0.852.38±1.022.23±0.57 HDL1.32±0.28 *1.31±0.30*1.01±0.25

2.2 各組血清HMGB1、hs-CRP、TNF-α及IL-6比較 與NC組比較，AP組、AMI組患者血清HMGB1、hs-CRP、TNF-α以及IL-6水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與AP組比較，AMI組患者血清HMGB1、hs-CRP、TNF-α以及IL-6水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表2。

表2 各組血清HMGB1、hs-CRP、TNF-α及IL-6比較（±s）

表2 各組血清HMGB1、hs-CRP、TNF-α及IL-6比較（±s）

注：與NC組比較，*P＜0.01；與AP組比較，#P＜0.01

組別AP組AMI組NC組HMGB1（ng/ml）4.15±2.30*13.08±9.56*#2.38±1.35 hs-CRP（mg/L）3.22±1.98*4.95±3.27*#1.16±0.57 TNF-α（pg/ml）23.46±9.04*35.28±11.93*#16.07±2.45 IL-6（pg/ml）17.89±8.16*45.78±24.12*#4.35±2.24

2.3 血清HMGB1與其他指標(biāo)的相關(guān)性分析 對(duì)所有研究對(duì)象（n=565）血清HMGB1水平與心絞痛、急性心梗常見危險(xiǎn)因素及hs-CRP、TNF-α、IL-6行Pearson相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)HMGB1與TC、FBS、hs-CRP、TNF-α及IL-6呈正相關(guān)。對(duì)AP組、AMI組血清HMGB1與hs-CRP、TNF-α、IL-6行Pearson相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)HMGB1與hs-CRP、TNF-α、IL-6呈顯著正相關(guān)。

3 討論

HMGB1的促炎作用主要源于其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及衍生的細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)［5］。多種受體在HMGB1信號(hào)傳導(dǎo)通路中發(fā)揮作用，包括晚期非酶性糖基化終產(chǎn)物（AGEs）受體（receptor for advanced glycation end products，RAGE）［6］和Toll樣受體家族成員（Toll-like family of receptors，TLRs）［7］。AGEs與RAGE結(jié)合發(fā)揮放大炎癥反應(yīng)的作用，這是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的重要機(jī)制，而HMGB1是目前已知的唯一親和力最高的受體。Tsung等［8］通過HMGB1介導(dǎo)的小鼠肝臟缺血再灌注實(shí)驗(yàn)，證實(shí)TLR4在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。

Giallauria等［9］證實(shí)HMGB1和心肌缺血之間存在潛在聯(lián)系，HMGB1的高水平與組織受損密切相關(guān)。Goldstein等［10］研究發(fā)現(xiàn)急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者血清HMGB1水平較健康人群升高。Kohno等［11］發(fā)現(xiàn)ST段抬高型心肌梗死（STEMI）患者血清HMGB1水平的升高與心臟破裂的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)AP組、AMI組血清HMGB1水平較正常對(duì)照組顯著升高，。AMI組血清HMGB1及hs-CRP水平較AP組明顯升高，表明血清HMGB1水平與冠脈病變嚴(yán)重程度有一定關(guān)系，推測(cè)其表達(dá)水平與病情的不穩(wěn)定性呈正相關(guān)。Kohno等［11］研究發(fā)現(xiàn)心肌梗死患者血清HMGB1表達(dá)水平較高，與心梗早期的病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。在冠心病血管造影Gensini評(píng)分與血清HMGB1水平相關(guān)性研究中，血清HMGB1水平隨疾病進(jìn)展而升高，推測(cè)HMGB1是預(yù)測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病冠脈狹窄程度演變的新炎癥指標(biāo)［12］。

Andersson等［13］經(jīng)研究626例正常人血清HMGBl水平，發(fā)現(xiàn)HMGBl與WBC及hs-CRP水平呈正相關(guān)。本研究同樣發(fā)現(xiàn)冠心病患者血清HMGBl與hs-CRP、TNF-α、IL-6水平之間呈正相關(guān)。TNF-α及IL-6作為炎癥反應(yīng)的血清指標(biāo)，與HMGBl在冠心病患者中存在正相關(guān)關(guān)系，說明HMGBl作為一種新的炎癥因子，可反映冠心病患者體內(nèi)炎癥的活躍程度，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的病理進(jìn)展過程。此外，NC組、AP組、AMI組患者中各炎癥因子水平呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)，說明HMGBl不僅可能參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生，脂質(zhì)條紋的形成，斑塊破裂乃至血栓形成過程，也可能與斑塊的不穩(wěn)定性相關(guān)，有望成為預(yù)測(cè)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性的血清指標(biāo)之一。Liu等［14］研究發(fā)現(xiàn)血清HMGB1水平隨斑塊不穩(wěn)定性的增高而升高，推測(cè)HMGB1是患者存在不穩(wěn)定斑塊的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。

總之，血清HMGB1濃度的檢測(cè)對(duì)心絞痛和冠心病的早期診斷具有重要意義。HMGBl可作為動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的預(yù)測(cè)因子，也可成為冠心病早期干預(yù)和治療的新靶點(diǎn)。

1 Gensini GG.A more meaningful scoring system for determining the severity of coronary heart disease.Am J Cardiol，1983，51（3）：606.

2 Scaffidi P， T Misteli，ME Bianchi.Release of chromatin protein HMGB1 by necrotic cells triggers inflammation.Nature，2002，418（6894）：191～195.

3 Sparvero LJ，DAsafu-Adjei，RKang，et al.RAGE （Receptor for Advanced Glycation Endproducts），RAGE ligands，and their role in cancer and inflammation.J Transl Med，2009，7（3）：17.

4 Niccoli G，LMBiasucci，CBiscione，et al.Independent prognostic value of C-reactive protein and coronary artery disease extent in patients affected by unstable angina.Atherosclerosis，2008，196（2）：779～785.

5 Gotsman I，A Stabholz，D Planer，et al.Serum cytokine tumor necrosis factor-alpha and interleukin-6 associated with the severity of coronary artery disease：indicators of an active inflammatory burden？ Isr Med Assoc J，2008， 10（7）：494～498.

6 Dumitriu I.E，P Baruah，ME Bianchi，et al.Requirement of HMGB1 and RAGE for the maturation of human plasmacytoid dendritic cells.Eur J Immunol，2005，35（7）：2184～2190.

7 Park J.S，D Svetkauskaite，Q He，et al.Involvement of toll-like receptors 2 and 4 in cellular activation by high mobility group box 1 protein.J Biol Chem，2004，279（9）：7370～7377.

8 Tsung A， R Sahai， H Tanaka， et al. The nuclear factor HMGB1 mediates hepatic injury after murine liver ischemia-reperfusion.J Exp Med，2005，201（7）：1135～1143.

9 Giallauria F，P Cirillo，R Lucci，et al.Autonomic dysfunction is associated with high mobility group box-1 levels in patients after acute myocardial infarction.Atherosclerosis，2010，208（1）：280～284.

10 Goldstein RS，M Gallowitsch-Puerta，L.Yang，et al.Elevated highmobility group box 1 levels in patients with cerebral and myocardial ischemia.Shock，2006，25（6）：571～574.

11 Kohno T，T Anzai，K Naito，et al.Role of high-mobility group box 1 protein in post-infarction healing process and left ventricular remodelling.Cardiovasc Res，2009，81（3）：565～573.

12 Hu X，H Jiang，Q Bai，et al.Increased serum HMGB1 is related to the severity of coronary artery stenosis.Clin Chim Acta，2009，406（1～2）：139～142.

13 Andersson U，HWang，KPalmblad，et al.High mobility group 1 protein （HMG-1） stimulates proinflammatory cytokine synthesis in human monocytes.J Exp Med，2000，192（4）：565～570.

14 Liu M，Y Yu，H Jiang，et al.Simvastatin suppresses vascular inflammation and atherosclerosis in ApoE（-/-） mice by downregulating the HMGB1-RAGE axis.Acta Pharmacol Sin，2013，34（6）：830～836.

Objective In order to study the relationship between HMGBl and the severity of coronary lesions，and explore the value of HMGBl in the diagnosis and treatment of coronary heart disease. Methods 220 cases of healthy people and 345 cases of coronary heart disease were selected，including 189 angina pectoris（AP）patients and 156 acute myocardial infarction（AMI）patients. Serum concentrations of HMGB1，hs-CRP，TNF-α and IL-6 were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. Results Serum HMGBl，hs-CRP，TNF-α and IL-6 levels were obviously elevated in the AP group as compared with controls（P＜0.01）；those serum levels were significantly elevated in the AMI group as compared with the AP group and controls（P＜0.01）；serum HMGBl was positively correlated with hs-CRP，TNF-α and IL-6 levels. Conclusion The change in serum levels of HMGBl is of higher accuracy in the diagnosis of patients with AP and AMI，HMGBl can be used as a predictor of atherosclerotic heart disease.

Coronary heart disease Angina pectoris Acute myocardial infarction HMGBl

313000 中國(guó)人民解放軍第九八醫(yī)院急診科（彭海仙陳明志 宋斌 廖金平 李晨）

313000 中國(guó)人民解放軍73015部隊(duì)（蔣旭超）