孕早期母胎界面血管新生在稽留流產患者發病中作用

徐萍 周赤燕 鐘少平★

孕早期母胎界面血管新生在稽留流產患者發病中作用

徐萍 周赤燕 鐘少平★

目的 通過檢測微血管密度在正常早孕及稽留流產患者絨毛、蛻膜的表達情況及血管內皮生長因子（VEGF）在正常早孕及稽留流產患者體內濃度，探討血管新生障礙在稽留流產發病中的可能機制。方法 在2014年4月至2015年4月期間采用免疫組織化學染色法檢測18例正常早期妊娠及21例稽留流產患者絨毛及蛻膜中微血管表達情況。同時利用ELISA方法檢測比較VEGF在兩組孕婦體內的濃度水平。結果 高倍鏡視野下正常早孕絨毛、蛻膜微血管密度依次為（22.37±2.16）個/（×400）及（26.94±3.08）個/（×400），稽留流產患者絨毛、蛻膜微血管密度微血管密度（3.24±0.12）個/（×400）及（2.78±0.21）個/（×400），上述兩組孕婦中VEGF濃度依次為（100.75±9.13）pg/ml及（10.36±0.49）pg/ml。與正常早孕患者比較，稽留流產孕婦體內VEGF下降明顯（P＜0.05），并且伴母胎界面血管新生程度降低明顯（P＜0.05）。結論 孕期血管新生參與了胎盤形成，并在孕早期稽留流產發病中起到重要作用。

血管新生 稽留流產 胎盤 滋養細胞

稽留流產也稱過期流產，為一種特殊類型的自然流產，是指胚胎或胎兒已死亡滯留宮腔內未能及時自然排出［1］。妊娠后孕婦體內孕酮在8～10周主要由卵巢的妊娠黃體分泌，隨著妊娠孕周增加，胎盤逐漸形成，孕10周后主要由胎盤合體滋養細胞分泌，若兩者銜接不良，則容易導致孕酮水平相對低下，引發稽留流產的發生［2，3］。涉及胎盤滋養細胞功能，尤其是母胎界面血管新生導致滋養細胞功能異常，導致稽留流產的發生亦有報道［4］。CD34能對血管內皮細胞進行特異性染色，從而進行微血管數目的計數，常用于有關血管新生的研究。作者進行了稽留流產患者母胎界面血管新生的改變情況研究，現報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 （1）絨毛、胎盤組織：絨毛組織的選擇經醫院倫理委員會討論通過，并征得本人同意，隨機選擇2014年4月至2015年4月在本院婦科病房就診的正常早孕及稽留流產孕婦（5～10周），人流術后取得相應蛻膜及絨毛組織28例。其中正常早孕組孕婦及稽留流產組患者各14例。正常早孕組平均年齡（25±7）歲，平均體重（52±6）kg，平均妊娠時間（56±6）d。稽留流產組平均年齡（24±8）歲，平均體重（53±6）kg，平均妊娠時間（58±5）d。兩組孕婦的年齡、體重、妊娠時間等一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。均排除家族遺傳病史、既往高血壓、糖尿病等病史。同時采集對應孕婦的空腹肘靜脈血5ml，并行1500r/min離心10min，取出上清液放置-80℃冰柜中備用。絨毛及蛻膜取出后立即取壞死組織較少的部位取材，大小約0.5cm×0.5cm×0.5cm，行PBS緩沖液反復沖洗后，常規石蠟包埋切片后供免疫組化測定。（2）主要試劑：人VEGF ELISA Kit及鼠抗人CD34單克隆抗體（武漢博士德公司），SABC免疫組化試劑盒（北京中山生物技術有限公司）。

1.2 方法 （1）ELISA檢測孕婦血清中VEGF的濃度水平：按照人VEGF ELISA 試劑盒的具體操作步驟檢測孕婦血中VEGF的濃度水平。VEGF檢測靈敏度：15pg/ml。（2）常規SABC法進行免疫組織化學染色：細胞膜內有棕黃色沉淀表明染色陽性，染色程度明顯高于背景。在高倍鏡（×400）下，每張切片隨機取4個視野，行微血管數分析。將CD34染色陽性并有管腔樣結構，同時管腔內血細胞＜8個計入微血管范圍的標準并計數，分別由4位熟悉統計規則的不同工作者在同一視野下計數血管密度，將取得的平均值作為該張切片最后血管密度。

1.3 統計學方法 采用SPSS12.0統計軟件。計量資料以（±s）表示，各組之間差異采用單因素方差分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 正常早孕及稽留流產母胎界面微血管表達 常規SABC法進行免疫組織化學染色，并取正常早孕及稽留流產絨毛、蛻膜行HE染色對照。血管內皮細胞內的棕色顆粒及管腔，可考慮為新生血管的形成。正常早孕絨毛、蛻膜微血管密度依次為（22.37±2.16）個/（×400）及（26.94±3.08）個/（×400），稽留流產患者絨毛、蛻膜微血管密度依次為（3.24±0.12）個/ （×400）及（2.78±0.21）個/（×400），行統計分析發現：稽留流產孕婦蛻膜、絨毛微血管密度較早孕蛻膜及絨毛每高倍鏡下微血管密度均下降明顯（P＜0.05）。見圖1～6。

圖1 正常早孕蛻膜HE染色（×100）

圖2 正常早孕絨毛HE染色（×100）

圖3 正常早孕蛻膜微血管計數（×400）

圖4 稽留流產早孕蛻膜微血管計數（×400）

圖5 正常早孕絨毛微血管計數（×400）

圖6 稽留流產絨毛微血管計數（×400）

2.2 孕婦血清中VEGF的濃度水平 行ELISA檢測分析表明，正常早孕及稽留流產兩組中血管內皮生長因子（VEGF）濃度依次為（100.75±9.13）及（10.36±0.49）pg/ml。與正常早孕孕婦比較，稽留流產患者體內VEGF濃度下降明顯（P＜0.05）。

3 討論

隨著孕周的增加，子宮動脈的血流量持續增加，血流阻力下降；期間主要是妊娠期子宮動脈血流阻力進一步減少，良好子宮胎盤循環進一步構建所致，期間母體血管新生相關因子可能起到重要作用。VEGF是一種特異的內皮細胞有絲分裂原，其能增加血管通透性，具有促進內皮細胞生長及分化的能力。VEGF作為一種與血管新生密切相關的新生因子，被認為是最強大的血管生成啟動因子，但其濃度下降時，可導致血管新生程度嚴重下降，影響機體創傷愈合、腫瘤發生及器官形成。有研究發現早孕胎盤絨毛中VEGF在血管生成中起作用［5］及妊娠早期胎盤血管形成在VEGF的指導下進行［6］，亦有研究表明稽留流產中VEGF表達下降明顯［7］。

本資料中，與正常早孕孕婦比較，稽留流產患者體內VEGF濃度下降明顯，并且伴母胎界面血管新生程度降低明顯。妊娠早期的VEGF主要來源于血管內皮細胞及滋養細胞，胎盤局部的VEGF對內皮細胞產生作用，促進其增殖、遷移并影響其內分泌功能，同時亦影響滋養細胞發揮侵襲功能。有研究發現，VEGF水平在妊娠早期上升明顯，與妊娠時間基本呈正相關，一般在16周達到高峰，于妊娠晚期下降［7］。當孕早期血管新生欠活躍，且孕婦體內VEGF水平較低時，滋養細胞功能下降，導致滋養細胞分泌功能下降。母體內孕酮等激素水平受到滋養細胞功能影響較大，當滋養細胞分泌功能下降到一定程度時，母體孕酮水平不能有效抑制母體對胚胎的免疫耐受作用，母體排斥反應加強，導致流產，而在胚胎組織為排出之前，因為前期胚胎未受到有效母體血供而死亡，因此臨床上常表現為稽留流產。

1 謝幸，茍文麗.婦產科學.第八版.北京：人民衛生出版社，2013.49.

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3 Eskiciog1u F，La?in S，Ozbi1gin K，et a1.The ro1e of se1ectins in the first trimester pregnancy 1oss.Gineko1 Po1，2014，85（4）：287～293.

4 Takeda A，Koyama K，Imoto S，et a1.Conservative management of p1acenta increta after first trimester abortion by transcatheter arteria1 chemoembo1ization： a case report and review of the 1iterature.Arch Gyneco1 Obstet，2010，281（3）：381～386.

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浙江省衛生廳基金（2015KYB390）；浙江省嘉興市科技局基金（2012AY1073-1，2012AY1073-5）

314051 浙江省嘉興市婦幼保健醫院婦產科