外周血T細胞亞群檢測在惡性腫瘤中的應用及臨床意義研究

張國泰安市腫瘤防治院檢驗科，山東泰安　271000

外周血T細胞亞群檢測在惡性腫瘤中的應用及臨床意義研究

張國
泰安市腫瘤防治院檢驗科，山東泰安271000

目的 分析外周血T細胞亞群測定在惡性腫瘤患者中的臨床應用價值及及意義。方法 隨機收集該院2014年1月—2016年1月收治的患惡性腫瘤的100例患者進行研究，且將其分為研究組。同時選取同期于該院進行健康體檢的100名正常人群作為對照組進行對照研究。通過流式細胞術分別對兩組研究對象的外周血T細胞亞群水平進行檢測，主要包括T淋巴細胞（CD3+細胞）、輔助性T細胞（CD4+細胞）、抑制性T細胞（CD8+細胞）、CD4+/CD8+細胞等水平。結果 研究組患者的CD3+細胞（57.31±7.76）%，顯著低于對照組（72.34±6.78）%，差異有統計學意義（P＜0.05）。研究組患者的CD4+細胞（35.75±7.47）%，顯著低于對照組（45.23±5.49）%，差異有統計學意義（P＜0.05）。研究組患者的CD8+細胞（33.98±8.46）%，顯著高于對照組的（28.37±6.17）%，差異有統計學意義（P＜0.05）。研究組患者的CD4+/CD8+細胞（0.93±0.49），顯著低于對照組（1.57±0.59），差異有統計學意義（P＜0.05）。結論外周血T細胞亞群檢測可作為評估惡性腫瘤患者治療及預后情況的重要參考，值得進一步推廣應用。

外周血；T細胞亞群；惡性腫瘤；臨床價值

［Abstract］Objective To analyze the clinical application value and significance of T lymphocyte subsets in patients with malignant tumor.Methods Random selection 100 patients with malignant tumor in our hospital were collected from January 2014 to January 2016 called study group.100 healthy checking people were selected as control group.To compare and test the two groups of subjects peripheral blood T cell subsets levels by using of flow cytometry respectively,including T lymphocytes（CD3+cells,helper T cells（CD4+）cells,inhibition of T cells（CD8+cells,CD4+/CD8+cell levels.Results The CD3+cells（57.31±7.76）%in the study group were significantly lower than control group（72.34±6.78）%,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The CD4+cells（35.75±7.47）%in the study group were significantly lower than control group（45.23±5.49）%,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The CD8+cell（33.98+8.46）% of the study group was significantly higher than that of the control group（28.37±6.17）%,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.The CD8+CD4+/cells（0.93±0.49）in the study group were significantly lower than control group （1.57±0.59）,and the difference was statistically significant（P＜0.05）.Conclusion The detection of T lymphocyte subsets in peripheral blood can be used as an important reference for the evaluation of treatment and prognosis of patients with malignant tumor,and it is worth of promotion.

［Key words］Peripheral blood；T cell subsets；Malignant tumor；Clinical value

惡性腫瘤主要發生于機體免疫功能較低時，且會導致患者機體的免疫功能進一步受損，而免疫功能受損又是導致患者的腫瘤出現轉移的重要因素之一［1］。相關研究表明，T細胞亞群等細胞免疫在腫瘤的發生、發展、抗腫瘤中均發揮著非常重要的效果［2］。為了分析惡性腫瘤患者與健康體檢人群外周血T細胞亞群的差異性，旨在為惡性腫瘤患者的免疫生物學反應提供參考，該研究隨機收集該院2014年1月—2016年1月間收治的患惡性腫瘤的100例患者及同期的100名健康體檢人群進行臨床研究，通過流式細胞術分別對兩組研究對象的外周血T細胞亞群水平進行檢測，現總結報道如下。

1　對象與方法

1.1研究對象

隨機收集該院收治的患惡性腫瘤的100例患者進行研究，且將其分為研究組。入選標準：①所有患者均經臨床病理檢查明確診斷，且均經相關臨床檢查明確診斷；②均無合并其他嚴重免疫性疾病者；③患者及家屬均簽署知情同意書，且自愿參與該研究。研究組中，男性患者61例，女性患者39例；最低年齡31歲，最高年齡67歲，平均年齡（54.16±10.76）歲；腫瘤分類：胃癌患者25例，肺癌患者22例，肝癌患者13例，惡性淋巴瘤患者14例，乳腺癌患者11例，結直腸癌患者15例。同時選取同期于該院進行健康體檢的100名正常人群作為對照組進行對照研究，其中男性對象58名，女性對象42名；最低年齡26歲，最高年齡73歲，平均年齡（55.93±13.67）歲。兩組患者的性別、年齡等基線資料對比，差異均無統計學意義（P＞0.05），存在臨床可比性。

1.2研究方法

1.2.1儀器及試劑儀器選用Beckman Eepics XL型流式細胞儀、溶血素、流式試劑盒CD45-FITC/CD4-RD1/ CD8-ECD/CD3-PC5及CD3-FITC/CD16CD56-ECD。試劑選用Cy標記的鼠抗人 CD3和CD4單克隆抗體、FITC標記的鼠抗人CD8單克隆抗體、PE標記的鼠抗人CD16和CD56單克隆抗體。

1.2.2測定方法通過直接免疫熒光標記全血溶血法［3］檢測兩組對象外周血中淋巴表面抗原的表達情況，具體操作包括：抽取兩組對象的空腹靜脈血2 mL，放入具有抗凝劑的試管中，分別取經標記過的10 μL單克隆抗體CD45-FITC/CD4-RD1/CD8-ECD/CD3-PC5及CD3-FITC/CD16CD56-ECD放入試管中，再加入100 μL抗凝過的外周全血，搖勻，于室溫下進行染色15 min，且行同型對照。然后加入溶血素FACS 450 μL，搖勻后置于室溫避光下10 min，然后行溶血處理；細胞洗滌，常規進行1 500 rpm/5 min低速離心后去除上清液，加1 mL PBS，混勻后重復1次洗滌操作；再加入1mL PBS重選細胞，混勻，制成單細胞懸液。最后放置于流式細胞儀中進行測定，每個樣品中檢測的細胞需超過5 000個，通過軟件對細胞中各個標記細胞的比例進行計算。檢測指標包括T淋巴細胞（CD3+細胞）、輔助性T細胞（CD4+細胞）、抑制性T細胞（CD8+細胞）、CD4+/CD8+細胞等水平。

1.3統計方法

對該研究所得數據進行詳細記錄并構建數據庫，以SPSS 20.0統計學軟件進行處理和分析，計量資料采用t檢驗進行分析，以均值±標準差（±s）來表示，當P＜0.05時，則為差異有統計學意義。

2　結果

2.1惡性腫瘤患者與健康人群的外周血T細胞亞群水平對比

研究組患者的CD3+細胞（57.31±7.76）%，顯著低于對照組（72.34±6.78）%，差異有統計學意義（t=14.5856，P=0.0000）。研究組患者的CD4+細胞（35.75±7.47）%，顯著低于對照組（45.23±5.49）%，差異有統計學意義（t= 10.2261，P=0.0000）。研究組患者的CD8+細胞（33.98±8.46）%，顯著高于對照組的（28.37±6.17）%，差異有統計學意義（t=5.3577，P=0.0000）。研究組患者的CD4+/CD8+細胞（0.93±0.49），顯著低于對照組（1.57±0.59），差異有統計學意義（t=8.3448，P=0.0000）。見表1。

表1　惡性腫瘤患者與健康人群的外周血T細胞亞群水平對比（±s）

表1　惡性腫瘤患者與健康人群的外周血T細胞亞群水平對比（±s）

組別CD3+細胞（%）CD4+細胞（%）CD8+細胞（%）CD4+/CD8+細胞研究組（n=100）對照組（n=100）t P 57.31±7.76 72.34±6.78 14.5856 0.0000 35.75±7.47 45.23±5.49 10.2261 0.0000 33.98±8.46 28.37±6.17 5.3577 0.0000 0.93±0.49 1.57±0.59 8.3448 0.0000

2.2不同性別、年齡的惡性腫瘤患者的外周血T細胞亞群水平對比

不同性別、年齡的惡性腫瘤患者的外周血T細胞亞群水平對比，差異均無統計學意義（P＞0.05）。

表2　不同性別、年齡的惡性腫瘤患者的外周血T細胞亞群水平對比（±s）

表2　不同性別、年齡的惡性腫瘤患者的外周血T細胞亞群水平對比（±s）

調查內容　分類CD3+細胞（%）CD4+細胞（%）CD8+細胞（%）CD4+/CD8+細胞性別年齡（歲）男（n=61）女（n=39）31～41（n=32）42～53（n=30）54～67（n=28）58.52±9.41 58.16±9.15 58.74±10.36 57.78±9.16 58.03±8.46 33.41±8.42 34.16±9.24 33.75±6.49 33.95±8.42 34.09±8.31 33.72±7.62 32.94±6.75 32.74±8.12 33.14±7.86 33.34±9.26 0.97±0.39 0.96±0.42 0.98±0.36 0.99±0.32 0.96±0.38

3　討論

隨著近年來人們物質文化生活水平的不斷提高和飲食生活習慣的不斷變化，惡性腫瘤患者的發病例數亦在逐漸增加，嚴重影響了廣大患者的身體生命健康及生活質量。惡性腫瘤患者的病情進展時，患者機體的免疫功能下降是導致腫瘤細胞轉移的主要因素［4-5］。惡性腫瘤患者機體的免疫系統主要通過免疫應答來對腫瘤細胞的生長和發展進行抑制，而T淋巴細胞接到的細胞免疫是腫瘤免疫的主要方向，T淋巴細胞異常可導致患者機體中的腫瘤細胞避開機體免疫的監視進行增殖分化。惡性腫瘤患者的發生、發展過程中，其分泌的可溶性免疫抑制因子會阻止CD4+T細胞的出現及成熟，而誘導出現CD8+T細胞，進而導致患者的CD4+/CD8+比值和NK細胞所占的比例降低［6-7］。

楊德芬［8］研究表明，惡性腫瘤組患者的CD3+細胞水平（57.41±8.49）%、CD4+細胞水平（35.83±7.52）%均相對較低，且與正常人群的 CD3+細胞水平（72.28± 7.01）%、CD4+細胞水平（45.12±5.53）%比較差異有統計學意義，加強對外周血T細胞亞群的監測可為患者的腫瘤進展、治療及預后情況作出一定的預測，以便臨床進行針對性的預防治療，進而有效提高療效。該次研究結果顯示，研究組患者的CD3+細胞水平（57.31±7.76）%、CD4+細胞水平 （35.75±7.47）%、CD4+/CD8+細胞 （0.93± 0.49）均顯著低于對照組，差異有統計學意義（t=14.5856、10.2261、8.3448，P=0.0000）。研究組患者的CD8+細胞水平（33.98±8.46）%顯著高于對照組，差異有統計學意義（t= 5.3577，P=0.0000）。這提示惡性腫瘤患者與健康體檢人群的免疫功能存在明顯的差異，而惡性不同性別、年齡的惡性腫瘤患者的外周血T細胞亞群水平差異無統計學意義（P＞0.05），這提示患者的免疫紊亂為共性問題，不可因性別、年齡等差異而忽視。

綜上所述，外周血T細胞亞群檢測可作為評估惡性腫瘤患者治療及預后情況的重要參考，值得進一步推廣應用。

［1］蔡力力,楊波,盧學春,等.免疫功能檢測對評估細胞因子誘導的自體殺傷細胞治療老年血液腫瘤療效的研究［J］.中國實驗血液學雜志,2010,18（5）：1250-1255.

［2］嚴波,燕善軍.惡性腫瘤患者腹水及外周血中CD4+CD25+ CD127low調節性T細胞表達及其意義［J］.實用醫學雜志, 2010,26（9）：1570-1572.

［3］張瑞萍,徐冰心,王社論,等.惡性腫瘤患者外周血調節性T細胞及Th1、Th2細胞的檢測和臨床意義［J］.中國臨床醫學, 2012,19（6）：602-604.

［4］樊靜,任紅,張鳳春,等.不同TNM分期惡性腫瘤患者外周血CD4+CD25+CD127-調節性T細胞的研究［J］.中國醫刊,2011,46（9）：70-71.

［5］沈成龍.輔助性T細胞17相關細胞因子與結腸癌的研究進展［J］.醫學研究生學報,2013,26（4）：402-406.

［6］尹震宇,郭美姿,黃明敏,等.80歲以上老年惡性腫瘤患者外周血調節性T細胞檢測及其臨床意義［J］.實用老年醫學, 2011,25（6）：451-453.

［7］任林廣,張健,徐廣偉,等.肺癌患者外周血T細胞亞群與NK、NKT細胞檢測的臨床意義［J］.中國實驗診斷學,2013, 17（10）：1873-1874.

［8］楊德芬.外周血T細胞亞群檢測在惡性腫瘤中的應用及臨床意義［J］.海南醫學院學報,2013,19（10）：1390-1392, 1395.

Clinical Significance of Peripheral Blood T Cell Subsets Detection in Malignant Tumors

ZHANG Guo
Tai'an Tumour Prevention and Treatment Hospital,Tai'an,Shandong Province,271000 China

R730

A

1674-0742（2016）08（b）－0026-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.23.026

張國（1966.6-），男，山東泰安人，本科，主治醫師，研究方向：腫瘤、結核病相關臨床檢驗。

2016-05-16）