病毒滅活血漿殘余亞甲藍對人外周血單個核細胞免疫功能影響的體外研究*

陳志忠,李結敏,陳尚良,梁潔貞,盧少芬,陳超紅,陸倩文,張　綺

(廣東省肇慶市中心血站　526020)

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·論著·

病毒滅活血漿殘余亞甲藍對人外周血單個核細胞免疫功能影響的體外研究*

陳志忠,李結敏,陳尚良△,梁潔貞,盧少芬,陳超紅,陸倩文,張綺

(廣東省肇慶市中心血站526020)

目的利用人外周血單個核細胞(PBMC)研究用于血漿病毒滅活后殘余的亞甲藍是否對人體免疫細胞功能產生影響。方法采用Ficoll-Hypaque密度梯度離心法分離PBMC，在T細胞特異性刺激因子Anti-CD3/CD28存在的條件下，加或者不加不同濃度的亞甲藍共培養，培養至72 h，收集培養上清液，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測細胞因子分泌情況；培養66 h后，加入CCK-8染料繼續培養4～6 h，于A450處測定細胞增殖情況。結果高濃度劑量亞甲藍(1.25、2.5、5 μmol/L組)對Anti-CD3/28刺激PBMC的增殖均有明顯抑制作用(P<0.01)，其OD值由0.897±0.385分別降至0.632±0.334、0.524±0.254、0.445±0.287，呈一定的劑量依賴效應。高濃度亞甲藍(1.25、2.5、5 μmol/L組)可下調Anti-CD3/28誘導PBMC分泌細胞因子白細胞介素(IL)-17a、IL-10、γ-干擾素(IFN)-γ，且呈劑量依賴效應。1.25、2.5、5 μmol/L的亞甲藍影響PBMC分泌IL-17a，IL-17a水平由(406±57)pg/mL分別降至(276±38)、(192±31)、(134±24)pg/mL；影響PBMC分泌IL-10，IL-10水平由(184±15)pg/mL分別降至(132±13)、(110±12)、(42±8)pg/mL；影響PBMC分泌IFN-γ， IFN-γ水平由(4 512±187)pg/mL分別降至(2 876±143)、(2 234±153)、(1 988±112)pg/mL。結論高濃度亞甲藍(≥1.25 μmol/L)對人PBMC的增殖以及分泌細胞因子功能有顯著抑制作用，換而言之,血漿病毒滅活后殘余濃度(≤0.33 μmol/L)的亞甲藍對PBMC免疫功能無明顯影響，但該濃度的亞甲藍對人純T細胞免疫功能是否有影響需要進一步評估研究。

病毒滅活血漿；亞甲藍；人外周血單個核細胞； T淋巴細胞；免疫功能

亞甲藍光化學法滅活血漿中病毒的效果已被證實，輸注病毒滅活血漿成為國內外預防輸注血漿制品傳播疾病的有效措施[1-3]。亞甲藍光化學法滅活病毒最終血漿制劑中亞甲藍殘余濃度≤0.30 μmol/L[4]，即≤0.096 mg/L，與臨床的使用劑量(1～2)mg/kg體質量相比，濃度是非常低的。但考慮到大量輸注血漿的患者多為危重病，如多發性創傷、心臟手術、多器官衰竭、凝血功能紊亂等患者，本身功能較衰弱，同時大量輸血本身也存在輸血后免疫抑制的風險[5]，故有必要考慮亞甲藍對人體免疫功能的影響。亞甲藍毒理實驗證明其安全[6-7]，但體內、外基因毒性實驗結果尚不一致[8-9]。……