SIRT3通過Rb/p16途徑促進肝癌細胞衰老的研究*

宋春麗，黃　榮，李澤華，周義文△

(南方醫科大學深圳醫院：1.臨床檢驗醫學中心；2.燒傷整形科，廣東深圳 518100 )

?

SIRT3通過Rb/p16途徑促進肝癌細胞衰老的研究*

宋春麗1，黃榮1，李澤華2，周義文1△

(南方醫科大學深圳醫院：1.臨床檢驗醫學中心；2.燒傷整形科，廣東深圳 518100 )

目的探討沉默信息調節因子3(SIRT3)對肝癌細胞老化的作用，并初步研究其作用機制。方法通過轉染SIRT3基因，使其在肝癌細胞內過表達。用實時熒光定量PCR和Western blot技術驗證SIRT3基因的過表達效果；BrdU標記實驗檢測它對肝癌細胞增殖的影響；β-半乳糖苷酶染色檢測肝癌細胞的老化情況；Western blot檢測它對衰老相關基因Rb、p16、P53蛋白表達的影響。結果SIRT3過表達質粒使肝癌細胞中SIRT3的mRNA及蛋白水平明顯增加。SIRT3基因的過表達能抑制肝癌細胞的增殖，抑制率為40%～50%；同時，SIRT3基因過表達能顯著誘導肝癌細胞G2期周期阻滯：轉染pc-DNA3.1質粒的對照組細胞處于G2期比例為(22.83±1.58)%，而轉染SIRT3基因的實驗組處于G2期細胞為(35.65±1.55)%；SIRT3基因過表達使肝癌細胞中衰老相關的β-半乳糖苷酶染色較對照組顯著增高，陽性細胞占40%～50%，差異有統計學意義(P<0.05)，并伴隨衰老相關基因Rb、p16蛋白表達水平明顯增加。結論SIRT3基因過表達可能通過Rb/p16途徑促進肝癌細胞衰老。

沉默信息調節因子3；肝細胞癌；細胞衰老

肝細胞癌(HCC)占原發性肝癌的90%[1]。HCC起病隱匿,出現典型臨床癥狀時大多已處于中晚期,失去手術機會,自然生存期不超過半年[2]。sirtuin家族是一類依賴煙堿胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的第Ⅲ類組蛋白去乙酰化酶[3]，包括SIRT1～SIRT7,沉默信息調節因子3(SIRT3)是線粒體內主要的去乙酰化酶，一般存在于線粒體基質中，在成熟過程中它的N末端在線粒體基質容易被水解。……