Sebia Minicap全自動毛細管電泳儀檢測糖化血紅蛋白的性能評價

羅燕芬，李有強，區頌邦，肖　倩，鄧光遠，許振杰，王麗娜，李　沫，陳　茶△

(1.廣東省中醫院檢驗科，廣州 510000；2.中山大學孫逸仙紀念醫院，廣州 510000)

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Sebia Minicap全自動毛細管電泳儀檢測糖化血紅蛋白的性能評價

羅燕芬1，李有強1，區頌邦2，肖倩1，鄧光遠1，許振杰1，王麗娜1，李沫1，陳茶1△

(1.廣東省中醫院檢驗科，廣州 510000；2.中山大學孫逸仙紀念醫院，廣州 510000)

目的評價Sebia Minicap Flex Piercing全自動毛細管電泳儀檢測糖化血紅蛋白(HbA1c)的檢測性能。方法根據美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)的相關文件及其他相關標準對該檢測系統檢測HbA1c的精密度、準確度、攜帶污染率和參考區間指標進行評價，同時與Premier Hb 9210糖化血紅蛋白儀檢測結果進行一致性驗證。結果該檢測系統檢測高低兩個濃度的HbA1c的批內精密度分別為1.2%和0.74%；準確度驗證其與Premier Hb 9210糖化血紅蛋白儀相關性較好，r2為0.990 26，相對偏倚<5%；攜帶污染率為0.99%。結論Sebia Minicap Flex Piercing全自動毛細管電泳儀檢測HbA1c主要儀器性能達到CLSI指南和廠家說明書的要求，可滿足臨床檢測需求。

全自動毛細管電泳儀；糖化血紅蛋白；性能評價

糖化血紅蛋白(HbA1c)是血紅蛋白與血糖進行不可逆非酶促反應的產物，可以反映近2～3個月血糖的水平，是判斷糖尿病長期控制的良好指標，是世界衛生組織(WHO)、美國糖尿病學會(ADA)及多個國際組織推薦的糖尿病診斷和監測的指標[1-3]。HbA1c的檢測有多種方法，其結果的可靠性與準確性是臨床應用中首要考慮的關鍵。本科室近期新引進一臺法國Sebia Minicap Flex Piercing全自動毛細管電泳儀用于HbA1c的檢測，其分辨率高于傳統的離子交換色譜法和瓊脂糖電泳。目前國內尚缺乏該型號儀器的性能評估報告，因此，本研究參考美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)的相關文件，對該儀器檢測HbA1c的主要性能指標進行驗證和評估。

1　資料與方法

1.1一般資料準確度驗證:收集臨床患者標本40份，標本中分析物濃度覆蓋高、中、低3個水平。參考區間驗證則收集健康人標本20份。標本采用EDTA-K2抗凝管采集，標本均無溶血、黃疸和脂血。

1.2儀器與試劑實驗方法的儀器為法國Sebia Minicap Flex Piercing全自動毛細管電泳儀(法國Sebia公司)，采用Minicap FP HbA1C試劑盒和minicap FP HbA1C質控品。比較方法采用Premier Hb9210糖化血紅蛋白儀(美國Primus公司)及配套的試劑和質控品。

1.3方法

1.3.1精密度驗證應用EP15-A2文件使用高低兩個濃度水平的Minicap FP HbA1C質控品，每天分析1個批次，各測定3次，每次2個通道同時運行，連續測定5 d。根據文件要求對實驗數據進行統計分析，計算出精密度，要求精密度符合廠商聲明(CV≤2%)。

1.3.2準確度驗證參照EP9-A2文件，將Sebia Minicap Flex Piercing全自動毛細管電泳儀檢測系統與Premier Hb9210糖化血紅蛋白儀檢測系統進行可比性試驗，Premier Hb9210糖化血紅蛋白檢測系統為比較系統。每天抽取8份標本，標本濃度覆蓋高、中、低3個水平，每個標本分別在上述兩個檢測系統中進行測定，標本按一定順序排列先測一遍，然后將順序顛倒過來做第2次檢測，取兩次檢測平均值作為最終檢測值。連續測定5 d。根據文件要求計算相關系數(r2) 和回歸方程，并對HbA1c的醫學決定水平進行偏倚評估。

1.3.3攜帶污染率的驗證取本次試驗的較高值14.2%和較低值4.1%標本各1份，首先連續測定高值標本3次(H1、H2、H3)，隨后立即連續測定低值標本3次(L1、L2、L3)，記錄所有數據，按下列公式計算：攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。

1.3.4參考區間的驗證參照CLSI C28-A2文件，采用本系統檢測20份健康人標本，采用“1/3”規則進行離群值檢驗，剔除離群值，并用新的參考個體代替。若20 份標本中不超過2 份標本的檢測值超出參考區間， 則現行的參考區間可以接受。

1.4統計學處理采用SPSS 19.0對數據進行整理和統計分析。

2　結　　果

2.1精密度驗證結果采用高低兩個濃度的HbA1c質控品進行精密度驗證，結果如表1所示。參照CLSI EP15-A2文件的要求，兩個水平質控品精密度均符合要求。

表1　　Sebia Minicap Flex Piercing全自動毛細管電泳儀精密度驗證結果

2.2準確度驗證結果采用實驗室中經過性能驗證的Premier Hb9210糖化血紅蛋白儀作為比對系統進行可比性試驗，排除離群值后，計算回歸方程和r2，結果見圖1。回歸方程：Y=1.012 5X-0.001 85，r2=0.990 26>0.95，說明兩種方法相關性良好，檢測結果具有可比性，能保證臨床結果的準確性和穩定性。將醫學決定水平處的值10%和16%代入回歸方程計算相對偏倚，結果見表2，可見相對偏倚均小于原衛生部臨檢中心允許總誤差(TEa)的1/2，結果可接受。

2.3攜帶污染率按照1.3.3公式計算測得的數據，結果見表3，可見Sebia Minicap Flex Piercing全自動毛細管電泳儀的攜帶污染率為0.99%，在相關文件要求的攜帶污染率范圍內，保證了檢測系統在檢測臨床標本時標本之間攜帶污染小，結果可靠。

圖1　　兩種檢測系統檢測HbA1c的相關分析圖

表2　　兩種檢測系統比對結果

表3　　Sebia Minicap全自動毛細管電泳儀檢測HbA1c的攜帶污染率

2.4參考區間驗證檢測結果表明， HbA1c的檢測結果落在當前使用的參考區間內(3%～6%)，說明該檢測系統符合要求。

3　討　　論

HbA1c不僅是WHO推薦的糖尿病診斷指標，也是糖尿病血糖控制和糖尿病治療方案有效性監測的重要指標[3]，因此，無論是早期篩查還是患病期間的監控，對HbA1c進行檢測都具有重要的意義。

HbA1c的檢測方法有多種，大致可分為以下幾種：第1 種是依據糖化、非糖化血紅蛋白帶電荷的差異；第2種是基于糖化的血紅蛋白基團的結構特點；第3種是抗原抗體反應的原理；第4 種是免疫反應和電化學相結合的傳感器方法；第5種是床邊檢測的方法[4]。本實驗室新引進的Sebia Minicap Flex Piercing全自動毛細管電泳儀是依據糖化和非糖化血紅蛋白所帶的電荷不同進行分離，根據《醫學實驗室——質量和能力認可準則》(ISO15189)的規定，臨床實驗室在建立或引進新的檢驗儀器和檢驗項目時應對檢測系統的性能進行評價，以判斷其能否滿足臨床使用要求[5]。相同檢測項目在不同檢測系統間結果的互認是檢驗醫學一致化和標準化的目標，也是循證檢驗醫學的要求[6]。因此，本研究對該系統的精密度、準確度、攜帶污染率進行驗證和評估。

精密度是用來表示一系列重復測定結果分散程度的量值。美國糖尿病協會于2010年明確提出了HbA1c測定的總不精密度的接受標準，即允許誤差標準≤5%[2]，美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)文件也要求批內CV和批間CV均小于5%。從表1可看出，該檢測系統的批內精密度分別為1.2%和0.74%，均<5%，符合文件要求和廠家聲明的精密度(≤2%)。與李卿等[7]報道的8通道毛細管電泳儀結果基本一致。

準確度是一定條件下多次測定的均值與真值相符合的程度。本實驗準確度驗證是通過方法學的比對試驗來實現的，將應用HPLC原理的Premier Hb9210糖化血紅蛋白儀檢測系統作為比較方法(HPLC法是檢測HbA1c的“金標準”)，計算回歸方程及r2。從圖1可得知，兩種檢測系統的相關性良好，r2>0.95。將醫學決定水平處的值代入回歸方程中(表2)，得知比對項目的相對偏倚均小于原衛生部臨檢中心要求的TEa的1/2，因此可認為該檢測系統與Premier Hb9210糖化血紅蛋白儀檢測系統的檢測數據具有可比性。

攜帶污染率是不同標本間連續測定的影響，主要是高濃度標本對低濃度標本的影響。本實驗中，該檢測系統的攜帶污染率為0.99%，在允許范圍內，表明該檢測系統的攜帶污染率極小，不會對臨床標本的檢測造成影響，與其他糖化檢測系統相當[8-9]。

本文參照C28-A2文件要求對現行使用的參考區間進行驗證。檢測結果表明，90%以上的檢測結果落在當前使用的參考區間內，說明現行使用的參考區間在Sebia Minicap Flex Piercing全自動毛細管電泳儀檢測系統上符合要求。

綜上所述，Sebia Minicap Flex Piercing全自動毛細管電泳儀檢測HbA1c在精密度、準確度和攜帶污染率和參考區間方面均符合CLSI文件要求，且與廠商規定的分析性能基本一致，可滿足臨床檢測的需要。

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， E-mail：chencha906@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.037

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1673-4130(2016)16-2299-02

2016-01-28

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