梅毒螺旋體RPR試驗前帶現象檢測分析

魏虹娟，唐冬松，李　宇，孫麗梅，劉　意，馮　霞

(首都醫科大學附屬北京佑安醫院，北京 100069)

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梅毒螺旋體RPR試驗前帶現象檢測分析

魏虹娟，唐冬松，李宇，孫麗梅，劉意，馮霞△

(首都醫科大學附屬北京佑安醫院，北京 100069)

目的通過探討梅素螺旋體快速血漿反應素環狀卡片試驗(RPR)前帶現象發生的規律，為減少假陰性提供實驗室依據。方法2015年3月1日至12月31日收集性病實驗室檢出RPR前帶現象的血清標本48例，進行RPR、不同批次試劑RPR、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)及熒光梅毒螺旋體抗體吸附試驗(FTA-ABS)，分析各實驗間相關性及RPR前帶現象凝集反應規律。 結果48例前帶現象標本TPPA及FTA-ABS IgG抗體試驗結果均為陽性，RPR試驗原倍稀釋時無顆粒凝集或凝集顆粒較小，且稀釋反應前3～4孔(1∶8～1∶16)反應弱，凝集顆粒大小幾乎無變化，從第4～5孔(1∶16～1∶32)起凝集反應不斷增強，經稀釋后滴度為1∶1 024～1∶65 536；臨床表現不典型。結論RPR前帶現象可通過與梅毒螺旋體血清學試驗聯合檢測、結合凝集反應特點發現，并通過增加稀釋倍數避免漏檢。

梅毒螺旋體；快速梅毒血清反應素試驗；前帶現象；熒光梅毒螺旋體抗體吸附實驗

梅毒是由蒼白螺旋體引起的慢性、系統性性傳播疾病。近年來，我國梅毒流行形勢日益嚴峻[1-2]，其報告病例數已躍居我國甲乙類傳染病報告中的第3位[3]。因其與艾滋病有著相似的傳播途徑及細胞免疫損害[4]，梅毒的控制工作已被納入艾滋病防治管理機制中。目前，梅毒血清學結果仍是梅毒診斷中的重要指標之一，其準確性至關重要。但前帶現象的存在容易造成實驗室漏檢，從而影響臨床診治活動。前帶現象是在抗原抗體的反應體系中，因抗體過剩所形成的抗原抗體反應受抑制的現象，是抗原抗體反應特有的現象。據報道，快速血漿反應素環狀卡片試驗(RPR)前帶現象發生率0.5%～1.0%[5-6]。如何從眾多的臨床標本中發現前帶現象是防止其漏檢的關鍵。本研究針對這一問題，對所在性病門診出現的前帶現象標本進行分析，希望能從實驗室角度發現前帶現象凝集反應的規律，提出減少前帶現象漏檢的建議，為正確檢出前帶反應提供依據。

1　資料與方法

1.1一般資料收集2015年3月1日至12月31日本院性病實驗室在檢測過程中發現的RPR前帶現象標本48例，其中，男43例、女5例，年齡19～64歲。所有標本及時分離血清，-80 ℃凍存備用其中，因患者具有典型臨床表現，臨床醫生要求復查發現7例；與同時檢測的其他梅毒血清學指標陽性結果不符或與歷史檢測記錄不符發現26例，實驗室人員經驗性發現15例。所有病例均排除結締組織病、腫瘤、慢性肝病及腎病等系統性疾病。

1.2試劑RPR試劑盒來源上海科華生物工程有限公司，批號20150302，有效期20160322；比對試劑批號20150602，有效期20160601。熒光梅毒螺旋體抗體吸附試驗(FTA-ABS)試劑來自德國歐蒙公司，批號F150507DH，有效期20161106。梅毒螺旋體明膠凝集試驗(TPPA)試劑來源于日本富士瑞必歐株式會社，批號VN50212，有效期20160205。

1.3方法RPR試驗通過使用標準的牛心肌脂抗原檢測血液中是否存在非特異性抗梅毒螺旋體抗體反應素；FTA-ABS及TPPA試驗均測定人血清或血漿中特異性梅毒螺旋體抗體，前者利用間接熒光抗體法，后者為間接凝集法。所有試驗均嚴格按照說明書進行操作。其中，RPR試驗用生理鹽水稀釋1∶2、1∶4、1∶8、1∶16……1∶256,做半定量試驗(滴度)，記錄其最高稀釋倍數，且觀察各稀釋度時凝集反應的顆粒變化，比較不同RPR批次試劑之間結果差異、RPR結果與TPPA及與FTA-ABS間的一致性。

2　結　　果

2.1臨床表現42例為Ⅱ期梅毒螺旋體感染，其中16例有明顯臨床表現，以皮疹、淋巴結腫大及發熱等癥狀為主，其余患者臨床表現不明顯；6例為Ⅰ期梅毒，有硬下疳和(或)皮疹表現。

2.2特異性梅毒螺旋體抗體檢測48例患者TPPA、FTA-ABS IgG抗體試驗結果均為陽性，FTA-ABS IgM抗體陽性21例，占43.75%(21/48),其中14例急性期感染者FTA-ABS IgM抗體均為陽性。

2.3RPR試驗結果原倍稀釋時無顆粒凝集或凝集顆粒較小，經稀釋后最終滴度為1∶1 024～1∶65 536，且稀釋反應前3～4孔(1∶8～1∶16)反應弱，凝集顆粒大小幾乎無變化。從第4～5孔(1∶16～1∶32)起凝集反應不斷增強，凝集顆粒增大、成塊，隨后凝集顆粒由大逐漸減小。標本滴度越高，原倍稀釋時越可能出現無凝集現象，前帶現象反應見圖1A。

注：A批號20150302,有效期20160322;B批號20150602,有效期20160601。

2.4不同批次RPR試劑檢測結果不同批次RPR試劑進行檢測，兩個批次試劑檢測均存在前帶現象，不同標本出現1個滴度的差異，但結果無明顯區別，不同批次試劑比對反應見圖1A、B。

3　討　　論

目前國內非梅毒螺旋體血清學試驗主要有RPR和甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST)兩種，均為半定量試驗，實驗技術及質量控制容易掌握，但隨著梅毒螺旋體感染率的不斷增加，前帶現象在工作中出現頻次增加[7]，梅毒實驗室診斷漏檢的風險增加。國外少見梅毒螺旋體前帶現象的報道，可能跟國外梅毒螺旋體感染率較低有關[8]。國內有關于梅毒螺旋體ELISA、TRUSR 以及RPR的前帶現象報道[5-7,9-10]。由于國內非特異性抗體檢測主要采用RPR試驗，類似的報道較多。在林榕[7]對RPR前帶現象的回顧性分析中，全部研究對象均為Ⅱ期梅毒患者，并且出現前帶現象的患者均具有典型的臨床表現。但在本研究中，前帶現象除主要在Ⅱ期梅毒患者(42/48)中發現外，還有部分早期感染的患者，且具有典型的硬下疳表現。多數患者以不典型皮疹和發熱為主，部分患者臨床表現不明顯。兩個研究出現不同的觀察結果，有待更多此類研究加以驗證。

本研究中48例標本經不同批次試劑驗證，均出現低稀釋度反應抑制的現象，提示本研究中前帶現象與試劑批次無關，是由非梅毒螺旋體抗體過量造成。所有病例TPPA及FBS-ABS IgG試驗結果均為陽性，IgM抗體結果陽性占43.75%，且急性期梅毒患者FBS-ABS IgM抗體均為陽性。此結果與其他報道相符[4,9]。

與正常凝集反應比對后發現：前帶現象原倍稀釋時無顆粒凝集或凝集顆粒較小，經稀釋后前3～4孔(1∶8～1∶16)反應較弱或凝集顆粒細小，且大小幾乎變化，從第4～5孔(1∶16～1∶32)起凝集反應不斷增強，出現凝集顆粒增大、成塊現象，隨后出現正常的凝集顆粒由大逐漸減小的過程。標本滴度越高，原倍稀釋時越可能出現無凝集現象。

梅毒螺旋體對治療反應性較好，一般在接受規范足量治療后，大部分患者可在6個月內出現血清學變化，RPR滴度顯著降低或轉陰。但因為梅毒螺旋體感染患者的不確定性，發生復發或再感染的情況較常見。若此時出現RPR前帶現象可能會被漏檢。實驗室梅毒螺旋體檢測需將特異性抗體檢測與非特異性抗體檢測聯合應用，可減少前帶現象漏檢。當出現TPPA抗體陽性，而RPR不反應的情況，對標本進行高倍稀釋，每孔都無凝集反應時才能報告陰性[9]。這種方法在綜合性醫院或梅毒螺旋體陽性率較低的實驗室可行，但對于性病門診等梅毒螺旋體陽性率高的實驗室，因稀釋工作量大，可操作性較差。此時，綜合考慮FBS-ABS IgM抗體、歷史檢測結果以及凝集反應規律是減少前帶現象漏診的重要途徑。FBS-ABS IgM陽性，RPR不反應或反應弱，應高度懷疑前帶現象，可將血清稀釋至1∶16,每孔都無凝集反應時報告陰性。但當TPPA等特異性抗體陽性，FBS-ABS IgM陰性， RPR不反應或呈較弱反應時，應仔細觀察RPR顆粒反應特點，若低稀釋度(1∶1～1∶16/1∶32)，不出現凝集顆粒逐漸減小，而是凝集顆粒大小幾乎無變化或顆粒增大現象時，應高度懷疑前帶現象，需至少稀釋至第6孔(1∶64)，均無凝集現象，可排除前帶現象。

另外，可通過在室間質評中增加前帶現象的考核品，以提高實驗室工作人員對前帶現象的認識和實驗室的檢測能力。

[1]楊重旺．2009-2013年浙江東陽市無償獻血者梅毒血清抗體陽性情況分析[J]．中國艾滋病性病，2015，21(1)：77,79．

[2]王靜，周春，蔣昵真．2009-2013年南京地區自愿無償獻血者梅毒感染的檢測分析[J]．中國輸血雜志，2015，28(2)：174-177．

[3]衛生部關于印發《中國預防與控制梅毒規劃(2010-2020年)》的通知[J].中華人民共和國衛生部公報， 2010(7):29-33.

[4]倫文輝．梅毒與HIV[J]．中國醫學文摘(皮膚科學)，2015，32(4)：430-435．

[5]陳堅，梁尚清，姚其柏，等．284例梅毒回顧性分析[J]．皮膚病與性病，2006，28(2)：50-51．

[6]顏雪芳．聯合檢測TRUST和TPPA在梅毒診斷中的作用[J]．中國實用醫藥，2010，5(1)：65-66．

[7]林榕．梅毒患者前帶現象56例檢測分析[J]．中國社區醫師，2015，31(25)：116,118．

[8]Katherine MH,Mark W,Arlene CS,et al.RPR Titer Variation in the Two Weeks Following Syphilis Therapy[J].Sex Transm Dis,2012,39(8):645-647.

[9]朱曉亮，曾抗，李建華．RPR和TPPA在梅毒血清學試驗中的比較研究[J]．中國現代醫學雜志，2004，14(23)：111-112．

[10]翟海軍，朱晶．ELISA法檢測梅毒螺旋體抗體前帶現象1例分析[J]．現代中西醫結合雜志，2010，19(34)：4471-4472．

，E-mail：xiafeng0304@hotmail.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.16.047

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1673-4130(2016)16-2320-02

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2016-05-11)