高精度腹腔灌注化療患者血清中miR-409-3p表達水平與胃癌預后的關系

楊素冰，張相良廣州醫科大學附屬腫瘤醫院檢驗科，腹部綜合科，廣東 廣州 50095

臨床研究

高精度腹腔灌注化療患者血清中miR-409-3p表達水平與胃癌預后的關系

楊素冰1，張相良2
廣州醫科大學附屬腫瘤醫院1檢驗科，2腹部綜合科，廣東 廣州 510095

目的 探討高精度腹腔灌注化療（HIPEC）治療后血清miR-409-3P表達水平與胃癌預后的關系。方法 采用實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測高精度腹腔灌注化療后血清miR-409-3p表達水平，并分析其胃癌預后的關系。結果 高精度腹腔灌注化療后血清miR-409-3p低表達量組中位生存期低于高表達量組中位生存期，差異認為有統計學意義。結論 血清miR-409-3p可能成為評估預后的生物標志物。

miR-409-3p；胃癌；預后

胃癌是我國常見的惡性腫瘤之一［1］，腹膜轉移是胃癌最常見的轉移方式［2］，高精度腹腔灌注化療（HIPEC）在胃癌［3］、結直腸癌［4］治療中提高患者的近期生存率。但病人仍會發生腫瘤復發，甚至遠處轉移，最重要的原因是因為胃癌細胞對化療藥物產生了多藥耐藥［5］。新近研究表明微小RNA（miRNA）在腫瘤發生中發揮癌基因或抑癌基因的重要作用，是調節多藥耐藥性的關鍵上游分子之一［6］。在前期研究中通過篩選HIPEC治療前后血清miRNA表達譜發現有169個miRNA表達較化療前上調，其中miR-409-3P上調最為明顯。本次研究為了探討HIPEC治療后miR-409-3P表達水平與胃癌預后的關系。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集我院2010年12月～2014年12月收治的胃癌患者行HIPEC治療98例，其中男性52例，女性46例，男女比例1.13。年齡44～71歲，中位年齡55歲。對每位患者化療后采用未添加抗凝劑的干燥管分別進行外周靜脈血采血5 mL，于室溫下保存，凝血后進行血清分離。

通過電話隨訪、門診隨訪、查閱病歷等方式獲得隨訪數據，最終隨訪時間為2015年12月，隨訪12～60個月，中位隨訪時間為28個月。其中4例失訪，隨訪率為95.9%。

1.2RNA提取及miR-409-3p的實時熒光定量聚合酶鏈反應

應用RNA提取試劑盒提取血清中的RNA。通過PrimeScriptRT試劑盒（Takara）合成首條cDNA鏈，miR-409-3p定量采用實時熒光定量RT-PCR法，以U6 miRNA作為內參。擴增的特異性采用溶解曲線和PCR產物的瓊脂糖電泳進行分析。miR-409-3p在血清中的表達水平采用相對于內參U6的2-△Ct公式進行計算，△Ct=△CtmiR-409-3p-△CtRNU6。

1.3統計學方法

HIPEC后miR-409-3p表達水平以平均值為界分為兩組，小于平均值為低表達組，大于平均值為高表達組。miR-409-3p表達水平高低與病理因素的關系比較采用χ2檢驗。高、低表達組與臨床病理因素的風險比和95%CI采用Logistic二項回歸分析，Kaplan-Meier最小乘積法評價總生存率，miR-409-3p高表達組與低表達組生存率的差異采用Log-rank檢驗。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2　結果

2.1miR-409-3p表達與臨床病理特征的關系

98例胃癌患者接受HIPEC治療后血清中miR-409-3p相對表達量均值為6.76，標準差為0.15。根據血清中miR-409-3p表達水平以平均值為界分為兩組，小于平均值為低表達組，大于平均值為高表達組。

血清miR-409-3p表達與臨床病理特征關系，血清miR-409-3p表達量與性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、有無遠處轉移、手術性質以及TNM分期均無關（P＞0.05）。但在淋巴有無轉移的表達量分布不一致，差異有統計學意義（P＜0.05，表1）。

表1　血清miR-409-3p表達與臨床病理特征關系

2.2單因素Logistic回歸分析血清miR-409-3p表達與臨床病理特征關系

單因素Logistic回歸分析血清miR-409-3p低表達量和高表達量與臨床病理特征關系如表2所示，淋巴轉移可能影響HIPEC治療后血清中miR-409-3p表達。

表2　單因素Logistic回歸分析血清miR-409-3p表達與臨床病理特征關系

2.3血清miR-409-3p低表達與高表達組胃癌患者Kaplan-Meier生存期

HIPEC治療后血清miR-409-3p低表達量組中位生存期為 26個月，95%CI：24.020～27.980；血清miR-409-3p高表達量組中位生存期為30個月，95%CI= 25.972～34.028，兩組比較log-rank值為8.673，P=0.003。

3　討論

miRNA是一類長度在19～23 nt的內源性非編碼單鏈小RNA，因其片段較小，且耐RNA酶降解，因此能在血清樣本中穩定存在［7］，是一類理想的腫瘤分子標志，這為檢測血清中miRNA應用于評估腫瘤的預后提供了可能。miRNA的靶向作用于大約30%的人類基因，越來越多的證據表明miRNA的在基因表達中的重要性［8］。多藥耐藥性常造成胃癌化療失敗，影響患者的預后。熱療能夠有效逆轉惡性腫瘤多藥耐藥性［9］，但具體機制并未清楚。同時研究［10］發現某些miRNA在胃癌多藥耐藥性中發揮作用，并有報道［11-14］顯示miR-409-3p與腫瘤的增殖、侵襲以及細胞凋亡有關，提示miR-409-3p可能與胃癌多藥耐藥性有關。

體外研究中表明胃癌細胞 SGC-7901中miR-409-3p的表達顯著抑制細胞的增殖以及誘導細胞的凋亡［15］。Ma等［13］發現乳腺癌組織中miR-409-3p的表達水平相比于癌旁組織明顯下調，并與乳腺癌的不良預后顯著相關，可能的作用機制是miR-409-3p的表達降低了ZEB1蛋白質的水平。ZEB1蛋白質與腫瘤細胞的侵襲力、分化程度有密切關系［8］。研究發現與比鄰非腫瘤組相比，骨肉瘤細胞中miR-409-3p表達呈下降，表達水平與骨肉瘤的遷移相關［16］。在肺癌組織中亦發現相同的表達下調［11］，相比miR-409-3p高表達，低miR-409-3p表達患者腫瘤分化程度低，淋巴結轉移的發生率較高，可能的機制是通過靶向c-Met抑制Akt的信號通路減少肺癌細胞遷移和侵襲。

本次研究結果表明患者有淋巴結轉移，HPEC治療后血清中miR-409-3p更傾向于低表達。有研究證實血清中miRNA可作為胃癌診斷的生物標志物［17］。本研究結果表明miR-409-3p在HIPEC治療后高表達有更長的中位生存時間，且與低表達組相比有統計學意義。那么HIPEC治療后血清中miR-409-3p有可能成為評估胃癌預后的生物標志物。

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Relationship between expression levelsofserum miR-409-3p afterhyperthemic Intraperitoneal chemotherapy and the prognosis of gastric cancer

YANG Subing1，ZHANG Xiangliang2
1Department of laboratory medcine，2Abdominal general department Cancer Center of Guangzhou Medical University，Guangzhou 510095，China

Objective To investigate the relationship between expression levels of serum miR-409-3P after Hyperthemic Intraperitoneal Chemotherapy（HIPEC）and prognosis of gastric cancer.Methods The serum expression levels of miR-409-3p after HIPEC was examined using real-time reverse transcription polymerase chain reaction and analyze the relationship between levels and prognosis of gastric cancer.Results The high expression group tended to have longer median survival time，compared with the low expression group，P=0.003.Conclusion The expression levels of serum miR-409-3P after HIPEC may become biomarkers of evaluate prognostic of gastric cancer.

miR-409-3p；gastric cancer；prognostic

2016-05-06

廣東省醫學科學技術研究基金（B2014196）

楊素冰，主管技師，E-mail:yangsubing8@163.com