HS-SPEM-GC-MS分析丹蔞片中的揮發性化學成分*

張　娜，李　琳，高　杉，朱　彥，王家明，張　鵬，于春泉

（1.天津中醫藥大學，天津市現代中藥重點實驗室，天津　300193；2.天津國際生物醫藥聯合研究院，中藥新藥研發中心，天津　300457；3.天津科技大學，生物工程學院，天津 300457）

·中藥研究·

HS-SPEM-GC-MS分析丹蔞片中的揮發性化學成分*

張娜1，2，李琳1，高杉1，朱彥1，王家明3，張鵬1，于春泉1

（1.天津中醫藥大學，天津市現代中藥重點實驗室，天津300193；2.天津國際生物醫藥聯合研究院，中藥新藥研發中心，天津300457；3.天津科技大學，生物工程學院，天津 300457）

［目的］用氣相色譜-質譜聯用（GC-MS）技術鑒定丹蔞片揮發性化學成分。［方法］采用頂空固相微萃取法（HS-SPEM）提取丹蔞片中的揮發性成分，利用GC-MS結合保留指數法（KI）對其主要揮發性成分進行分析鑒定。［結果］從丹蔞片揮發性成分中鑒定出44個組分，占總揮發性組分的72.46%。其中相對含量超過5%的成分有蒿本內酯（17.49%），β-欖香烯（11.07%），（-）斯巴醇（8.95%），3-丁烯基-1（3H）-異苯并呋喃酮（5.50%）等6個化合物。［結論］丹蔞片中的揮發性成分得到全面分析，根據其相對含量，丹蔞片中的揮發性成分主要來源于川芎、郁金、澤瀉，為丹蔞片的質量控制和進一步藥效研究提供一定的參考。

丹蔞片；揮發油；GC-MS分析

丹蔞片是臨床治療冠心病、心絞痛的常用復方制劑，由川芎、丹參、赤芍、澤瀉、郁金等10味中藥組成，主要用于治療痰瘀互結所致的胸痹心痛，癥見胸悶胸痛、憋氣、舌質紫暗、苔白膩，冠心病心絞痛見上述證候者；具有寬胸通陽，化痰散結，活血化瘀之功效［1-2］。丹蔞片復方藥味眾多，成分復雜，董娟等［3］已用液相色譜-質譜聯用（UPLC-MS）技術分析丹蔞片中的非揮發性成分，但對丹蔞片中的揮發性成分尚未有研究報道。丹蔞片中的郁金［4］、川芎［5］、澤瀉［6］等中藥的揮發性成分主要包括酚酸、酮類、萜類和酯類等，其中的某些揮發性成分對心、腦血管疾病具有一定的預防和治療作用［7-9］，因此對丹蔞片中揮發性成分值得研究。

氣相色譜質譜技術（GC-MS）對揮發性成分的定性分析與鑒定常用的是NIST譜庫檢索的方法、保留指數法、譜庫檢索和保留指數法相結合的方法［10］，其中保留指數（KI）是被國際公認的氣相色譜定性指標的一種參數，可以有效地區分結構上細微差別的同分異構體，將質譜檢索和保留指數相結合分析可顯著提高鑒定的準確性［11］。頂空固相微萃取技術（HS-SPEM）是固相微萃取技術的一種較常用的萃取模式，克服了水蒸氣蒸餾法、超臨界二氧化碳（CO2）萃取法等傳統方法中操作復雜，費用高等缺點［12-14］。對于中藥、生物樣本，該方法能夠很好的避免萃取固定相受到樣品中的大分子物質和難揮發性物質的污染與干擾［15］，并且在處理一些不穩定的化學成分時，還可以防止它們出現加熱分解與轉化的現象［16］。該方法已經廣泛應用于食品、藥品、環境以及生物樣品的分析。本文采用HS-SPEM提取丹蔞片中的揮發性成分，利用GC-MS結合KI［17］對其主要成分進行分析鑒定。以期為丹蔞片藥效物質基礎的研究提供實驗基礎。

1　材料和方法

1.1材料、試劑與儀器Agilent7890A-5975CGCMS氣質聯用質譜儀（美國Agilent科技公司），色譜數據處理系統（MSD ChemStation E.02.01，美國Agilent科技公司），NIST08.L譜庫；HJ-3磁力攪拌加熱器（金壇市醫療儀器廠），100μm聚二甲基硅氧烷涂層固相萃取頭（PDMS，Supelco，Bellefonte，Pa），HP-5MS毛細管柱（美國Agilent科技公司），超純水機（天津市奧佳科技有限公司）。

正構烷烴對照品溶液C8-C20（美國FLUKA公司），氯化鈉為分析純（天津市化學試劑一廠）。

丹蔞片（吉林康乃爾藥業有限公司生產，批號20140602）。

1.2方法

1.2.1HS-SPEM法提取揮發油取5片丹蔞片粉碎，將粉碎過的樣品0.6584 g、飽和氯化鈉3.6g及12mL水放入頂空瓶中，在65℃磁力攪拌下萃取40min，取出，立即插入氣相色譜儀進樣口，解吸5min。進樣口溫度250℃，進樣模式為不分流進樣。

1.2.2色譜條件色譜柱：HP-5MS（60m×320μm× 0.25μm）；載氣He，流量1mL/min；汽化溫度：250℃；接口溫度：280℃；色譜柱初始溫度60℃（保持1min），以4℃/min升溫速率升至150℃（保持5 min），以4℃/min升溫速率升至240℃（保持3min）；溶劑延遲：0min。

1.2.3質譜條件電離方式：EI源，能量70 eV；離子源溫度:230℃；四極桿溫度:150℃；質量范圍：（35～800）AMU；電子倍增器電壓:1 400 V。譜圖檢索：采用NIST08.L譜庫進行檢索。

1.2.4KI值測定取正構烷烴混合對照品，按1.2.2項下條件分析，記錄各正構烷烴保留時間，根據化合物的保留時間找到相鄰的兩個正構烷烴后按下式計算待測化合物的KI值：KI=100Z+100［TR（x）-TR（z）］/［TR（z+1）-TR（z）］

式中：TR（x），TR（z），TR（z+1）分別代表待測化合物及碳數為Z，Z+1正構烷的保留時間。且TR（z）＜TR（x）＜TR（z+1）［18］。

2　結果

取1.1項下的丹蔞片供試品，按1.2.1項下條件提取供試品中的揮發性成分，按1.2.2項下條件對丹蔞片中的揮發性化學成分進行GC-MS分析，見圖1。

圖1丹蔞片在GC-MS中的TIC圖

采用峰面積歸一化法計算各組分相對含量，對總離子流圖中各色譜峰計算其KI值，利用各色譜峰對應的質譜圖進行NIST標準譜庫檢索，選取質譜匹配度高的10個可能物質，并檢索其理論保留指數（KI*）值，以質譜圖和KI值匹配度都高的化學結構為最佳鑒定結果，見表1。

3　討論

通過GC-MS分析丹蔞片中揮發性成分，經NIST08質譜庫檢索與保留指數雙重定性的方法鑒定出44種主要成分，其相對含量總和占總揮發性組分的72.46%。由總離子流圖和揮發性成分鑒定結果可知，丹蔞片揮發性成分十分復雜，種類較多，且相對含量差別較大。其中相對含量高于5%的成分有蒿本內酯、β-欖香烯等6個成分，相對含量1%～5%的成分有環氧香橙烯、吉馬酮等4個成分。

丹蔞片揮發性成分中含量最高的化合物通過NIST標準譜庫比對的匹配度只有69%，低于一般標準匹配度80%（匹配度高于一般標準的化合物，可直接定性）。為了確證該化合物的結構，根據其保留時間，選取了C8-C20正構烷烴，測定了其KI值，采用NIST匹配與保留指數法相結合方法鑒定該化合物，該化合物的實際KI值與反式蒿本內酯KI*值比較，標準偏差閾值小于10%［19］，可確定該化合物為反式蒿本內酯，對于保留時間在C8-C20正構烷烴范圍內的揮發性成分，本文同時計算了其KI值，對其進行了雙重定性。

反式蒿本內酯是本復方制劑中川芎的主要活性成分之一，具有改善微循環［20］、舒張血管［21］、抑制血管平滑肌細胞增殖［22］等作用。同時其他揮發性成分如β-欖香烯［23］等，也具有抗凝血、溶血栓、抗動脈粥樣硬化等的功效。由此推測，丹蔞片復方制劑中的揮發性成分也是其發揮抑制心肌缺血、抗動脈粥樣硬化、降脂等功效的活性成分，本實驗結果為后期進一步研究其藥效物質基礎提供了實驗依據。

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HS-SPEM-GC-MSanalysisof the volatile componentsof Dan-lou tablets

ZHANGNa1，2，LILin1，GAOShan1，ZHUYan1，WANG Jia-ming3，ZHANGPeng1，YUChun-quan1
（1.Tianjin University of TraditionalChineseMedicine，Tianjin State Key Laboratory ofModern Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Tianjin International JointAcademy of Biomedicine，Research and DevelopmentCenter of Traditional Chinese Drug，Tianjin 300457，China；3.Tianjin University ofScienceand Technology，Engineering CollegeofBiology，Tianjin 300457，China）

［Objective］Using gas chromatography-mass spectrometry technology（GC-MS）to identify the chemical composition of volatile oil of Dan-lou tablets.［Method］In this paper，volatile components of Dan-lou tabletswere extracted by headspace solid phasemicroextraction（HS-SPEM）.Their structureswere identified based GC-MS database combined with Retention Index（KI）calculated.［Results］Fourty-four kinds of volatile oil compoundswere identified from Dan-lou tablet，which accounted 72.46%of the total volatile oil components.The ingredients which have content more than 5%were Ligustilide（17.49%），β-Elemenone（11.07%），（-）-Spathulenol（8.95%），3-butenyl-1（3H）-isobenzofuranone（5.502%）et al.［Conclusion］Volatile components of Dan-lou tablet are fully analyzed.The identifiedcompounds havemultiple activities according the prevent reports. Thisarticle providesa scientific basis forquality controland furtherpharmacological research ofDan-lou tablets.

Dan-lou tablet；volatile oil；GC-MS；analysis

R284

A

1673-9043（2016）04-0258-04

10.11656/j.issn.1673-9043.2016.04.10

國家自然科學基金青年項目（81303183，81403198）；國家重點基礎研究發展計劃（“973”計劃）項目（2014CB542902）。作者簡介：張 娜（1990-）女，碩士研究生，主要從事藥物化學研究。

張鵬，E-mail:zhp8270@sina.com.cn；于春泉，E-mail:ycq-4@163.com。

2016-04-02）