利肺片中五味子醇甲和五味子甲素含量測定方法研究

胡東梅　張　瑞（馬鞍山市食品藥品檢驗(yàn)中心　馬鞍山　243000）

利肺片中五味子醇甲和五味子甲素含量測定方法研究

胡東梅張瑞（馬鞍山市食品藥品檢驗(yàn)中心馬鞍山243000）

目的：建立同時(shí)測定利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的反相高效液相色譜（RP-HPLC）方法。方法：樣品用甲醇超聲提取，過濾，取續(xù)濾液，用RP-HPLC直接測定，十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱，流動(dòng)相為甲醇∶水（梯度洗脫），檢測波長254nm。結(jié)果：五味子醇甲和五味子甲素分別為1.636～16.36μg（r=1.000）和1.636～16.36μg（r=0.9990）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。平均加樣回收率（n=6）分別為97.6%～101.8%、98.9%～101.5%，RSD分別為1.6%、1.0%。結(jié)論：該方法快速簡便，可以用于利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的含量測定。

HPLC五味子醇甲 五味子甲素 利肺片

利肺片收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十一冊(cè)（WS3-B-2152-96），由百部、百合、五味子、枇杷葉、白及、牡蠣、甘草、冬蟲夏草和蛤蚧粉組成，具有驅(qū)癆補(bǔ)肺、鎮(zhèn)咳祛痰的作用，用于治療咳嗽咯痰、咯血哮喘、慢性氣管炎等癥。該標(biāo)準(zhǔn)中只有性狀和片劑通則檢查其質(zhì)量，沒有含量測定方法，某些含五味子的中成藥中五味子醇甲和五味子甲素的含量測定方法已有報(bào)道，利肺片中有效成分含量測定方法未見報(bào)道，《中國藥典》2015年版一部中收載的五味子的藥材及飲片中，含量測定項(xiàng)下僅測五味子醇甲，文獻(xiàn)報(bào)道五味子有效成分主要含有聯(lián)苯環(huán)辛烯類物質(zhì)，有五味子甲素、乙素、丙素，醇甲等，本文建立了HPLC法測定利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的含量方法。

1　儀器和試藥

高效液相色譜儀（德國戴安）配DAD檢測器；AL-104電子天平（梅特勒-托利多上海公司）；BP211D電子天平（德國賽多利斯公司）。五味子醇甲（批號(hào)：110857-201513）五味子甲素對(duì)照品（批號(hào)：110764-201513）購自中國食品藥品檢定研究院。利肺片為市售品（批號(hào)：20140801、20150201、20150302）。所用試劑均為分析純，水為純化水，液相用水為去離子水，甲醇為色譜純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件：色譜柱:德國戴安公司，十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱AcciaimTM120（150mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇-水（梯度洗脫程序見表1）。流速：1mL/min，檢測波長：254nm，進(jìn)樣量：20μL，柱溫：35℃。

表1　梯度洗脫程序

2.2樣品溶液的制備：取利肺片約10g，研細(xì)，混勻。精密稱取每種批號(hào)的供試品各1g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理（功率250w，頻率20kHz）30min，放冷，稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻。過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3對(duì)照品溶液的制備：精密稱取五味子醇甲對(duì)照品16.36mg和五味子甲素對(duì)照品17.52mg，分別置于50mL容量瓶中用甲醇稀釋并定容至刻度，分別取5mL置50mL容量瓶中用甲醇定容至刻度作為對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別取兩種溶液各2mL置10mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度即得混合對(duì)照品溶液。

2.4陰性樣品溶液的制備：根據(jù)利肺片的處方制備不含五味子藥材的陰性樣品，照供試品溶液的制備項(xiàng)下同法操作，即得。

3　結(jié)　果

3.1系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，自動(dòng)進(jìn)樣20μL，記錄色譜圖，可見對(duì)照品溶液兩個(gè)峰能夠完全分離，陰性樣品溶液在該處無吸收峰見圖1。

3.2精密度及穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取混合對(duì)照品溶液20μL連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，五味子醇甲、五味子甲素的峰面積相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為0.1%、0.3%。

精密吸取混合對(duì)照品溶液在0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣，五味子醇甲、五味子甲素的峰面積RSD分別為0.2%、0.4%。

3.3線性范圍與檢出限：取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密吸取0.5、1、1.5、2、3、5mL分別置于10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取20μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，以色譜圖峰面積（Y）對(duì)相應(yīng)對(duì)照品的含量（x）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果顯示，五味子醇甲在1.636～16.36μg，五味子甲素在1.752～17.52μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，五味子醇甲的回歸方程為Y=0.637x+ 0.010，r=1.000，檢出限為0.02μg；五味子甲素的回歸方程為Y= 0.488x-0.066，r=0.9990，檢出限為0.01μg。3.4回收率試驗(yàn)：準(zhǔn)確稱取已知含量的樣品粉末6份，每份約0.5g，分別加入五味子醇甲和五味子甲素對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL，置10mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度。過濾，精密吸取20μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，加標(biāo)回收率結(jié)果見表2。

表2　五味子醇甲和五味子甲素加標(biāo)回收率（n=6）

3.5樣品測定：精密稱取不同廠家的三批樣品，照“2.2”項(xiàng)下制備樣品溶液，精密吸取20μL進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果見表3。

表3　不同廠家的三批樣品含量測定結(jié)果

4　試驗(yàn)條件的選擇

4.1測定波長的選擇：經(jīng)高效液相DAD光譜掃描，五味子醇甲、五味子甲素的最大吸收波長分別為254nm和220nm，220nm波長處溶劑吸收強(qiáng)，干擾大，故選擇254nm作為測定波長。

4.2提取溶劑及條件的選擇：分別對(duì)提取溶劑（甲醇、乙醇）和提取方式（超聲和回流）及溶劑比例（100%甲醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇）進(jìn)行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)100%甲醇提取效率最高，以甲醇超聲30min和回流提取30min，結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者無較大差異，故選擇100%甲醇超聲30min，簡便快速。

4.3流動(dòng)相的選擇：首先采用流動(dòng)相為甲醇-水（65∶35）等度洗脫，發(fā)現(xiàn)五味子甲素出峰時(shí)間太長（約30min），采用流動(dòng)相為甲醇-水（75∶25），發(fā)現(xiàn)五味子醇甲出峰時(shí)間太短（約3min），5min之前的雜質(zhì)峰太大，干擾大，選擇梯度洗脫，五味子醇甲的保留時(shí)間為6min，五味子甲素的保留時(shí)間為17min，無干擾，分離度良好，故選擇梯度洗脫。

5　討論

作者采用高效液相色譜法建立了同時(shí)測定利肺片中五味子醇甲和五味子甲素的方法。經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，建立的定量分析方法簡便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，為全面評(píng)價(jià)利肺片的質(zhì)量提供了依據(jù)。由于3種批號(hào)的樣品來自3個(gè)廠家，2種活性成分含量存在較大的差異，標(biāo)準(zhǔn)的處方中五味子用70%乙醇提取，提取效率低，沒有完全將活性成分提出，導(dǎo)致制劑中含量低。建議優(yōu)化處方工藝，提高提取效率。

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1672-8351（2016）02-0020-02