18例自體DC-CIK治療多發性骨髓瘤的回顧性分析*

易　雪，關　軍，趙　霞，周　英，劉小紅，余　丹，鄒　亮，張　婷

(湖北省武漢市中西醫結合醫院血液科　430022)

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·經驗交流·

18例自體DC-CIK治療多發性骨髓瘤的回顧性分析*

易雪，關軍，趙霞，周英，劉小紅，余丹，鄒亮，張婷

(湖北省武漢市中西醫結合醫院血液科430022)

目的探討以樹突狀細胞誘導的殺傷細胞(DC-CIK)為效應細胞的生物免疫療法治療多發性骨髓瘤的臨床意義。方法回顧性分析18例接受DC-CIK治療的多發性骨髓瘤患者，其中10例為完全緩解(CR)和非常好的部分緩解(VGPR)組(CR/VEPR組)，8例為部分緩解(PR)和疾病進展(PD)組(PR/PD組)。比較DC-CIK對兩組患者的臨床效應。結果DC-CIK治療后CR/VGPR組患者的生存質量和免疫不全麻痹程度較PR/PD組改善明顯(P<0.05)。結論DC-CIK免疫治療多發性骨髓瘤有一定臨床意義。

多發性骨髓瘤；樹突細胞；細胞因子誘導殺傷細胞

以免疫調節劑硼替佐米為基礎的聯合化療在過去11年里被證明能有效延緩初診或復發多發性骨髓瘤總生存期，二次自體造血干細胞移植和異基因造血干細胞移植及自體聯合異基因造血干細胞移植等毒性更強的治療方案被積極用于臨床，并取得較單純化療顯著延長無進展生存期和總生存期的結論。盡管如此，多發性骨髓瘤仍然無法治愈，幾乎所有患者最終會復發。如何有效延長平臺期，提高患者的生存質量，成了多發性骨髓瘤治療的目標。樹突狀細胞誘導的殺傷細胞(DC-CIK)作為一種過繼性免疫療法近年來已成為實體瘤治療的熱點。本院嘗試將自體DC-CIK治療用于多發性骨髓瘤患者，目的在于了解DC-CIK在多發性骨髓瘤中的臨床應用價值。

1　資料與方法

1.1一般資料回顧性分析2013年2月至2014年12月本院血液科收治的給予自體DC-CIK治療的多發性骨髓瘤患者共18例，男14例，女4例；年齡52～78歲，中位年齡65.5歲。18例患者均符合2003年國際骨髓瘤工作組(IMWG)診斷標準[1]。分期參考國際預后分期系統(ISS)。給予DC-CIK治療前評估2組患者療效，采用歐洲血液和骨髓移植協作組(EBMT)標準將患者分為兩組，一組包括完全緩解(CR)和非常好的部分緩解(VGPR)的CR/VEPR組；對照組對為包括部分緩解(PR)和疾病進展(PD)的PR/PD組。所有患者體力狀態(ECOG)評分小于或等于2分，無嚴重并發癥和夾雜病。基本資料見表1。

表1　　治療前患者一般資料

1.2方法[2]

1.2.1DC培養及鑒定無菌抽取患者靜脈血50 mL，通過密度梯度離心法提取外周血單個核細胞(PBMC)，將PBMC重懸于血清培養基中(購自北京寶日醫公司)，置于37 ℃，5%CO2培養箱中孵育，2 h后將非貼壁細胞轉到另一培養瓶用于培養CIK，貼壁細胞的培養瓶中加入細胞因子rhGM-CSF 1 000 U/mL和rhIL-4 500 U/mL刺激細胞向DC分化；在培養的第6小時，加入TNF-α 100 ng/mL刺激DC成熟；18 h后收集并計數貼壁DC細胞。DC活細胞經過臺盼藍染色，應達到80%以上；流式細胞儀檢測確定是否成熟。

1.2.2CIK制備方法和質控非貼壁細胞用無血清培養基培養(購自北京寶日醫公司)，調整濃度為1×106/mL，加入IFN-γ 1 000 U/mL培養24 h后，加入抗CD3單克隆抗體50 μg/mL、rhIL-2 300 U/mL，每培養3～4 d，根據細胞生長狀態補充新鮮培養液和rhIL-2，并調整細胞濃度至2×105/mL。CIK活細胞經過臺盼藍染色，應達到80%以上；流式細胞儀檢測確定CD3+CD56+細胞的比例是否明顯提高。

1.2.3DC-CIK共培養和質控收集DC細胞后與CIK細胞按約1∶10比例共培養14 d，無菌檢測后，收集細胞，其數量達到1×1010個以上。DC-CIK活細胞經過臺盼藍染色，應達到80%以上；流式細胞儀檢測確定CD3+CD56+細胞的比例應該在20%以上。細胞殺傷試驗：以DC-CIK為效應細胞，以腫瘤細胞為靶細胞，將效應細胞與靶細胞按10∶1(數目比)的比例加入96孔U型板中，每孔含靶細胞1×104個，終體積為200 μL，設3個復孔。培養4 h，然后取上清，用乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒檢測效應細胞對靶細胞的殺傷率。

1.2.4DC-CIK回輸細胞質量檢測合格后分3 d經靜脈回輸給患者。回輸前排除細胞污染，離心，加入生理鹽水100 mL，混勻后2 h靜脈滴注。靜脈滴注前肌肉注射鹽酸異丙嗪25 mg。2次周期之間間隔6周。18例患者治療周期均大于或等于2周期。

1.3療效評估(1)兩組患者生存質量(QOL)及免疫不全麻痹恢復情況。QOL參照美國芝加哥Rush-Presbyterian-St.Luke.醫學中心研制出的癌癥患者生命質量測定量表(FACT-G)。免疫不全麻痹標準[3]：至少1個未受累免疫球蛋白指標低于正常下限(IgG<7 g/L，IgA<0.7 g/L或IgM<0.4 g/L)。免疫不全麻痹程度：根據未受累免疫球蛋白定量低于正常下限的水平分為4度：無(正常下限以上，IgG≥7 g/L，IgA≥0.7 g/L或IgM≥0.4 g/L)，輕度(低于正常下限0～25%)，中度(低于正常下限26%～50%)，重度(低于正常下限值大于50%)。免疫不全麻痹改善的標準：治療后定期測定免疫球蛋白的數量，參照以上分度標準，再次分度，與初診時分度比較，分度提升1度為改善1級，以此類推，改善級別分為2級、3級。(2)瘤負荷水平：參考2006年IMWG骨髓瘤療效評價標準[4]分別于治療前和治療后3個月記錄患者骨髓瘤細胞百分數、β2微球蛋白(β2-M)水平、清蛋白、血清異常M蛋白水平、24 h尿液輕鏈、血肌酐(Scr)水平。(3)不良反應：治療期間觀察患者一般生命體征，記錄不良事件。

2　結　　果

2.1治療效果治療后3個月的CR/VGPR組的FACT-G及免疫不全麻痹等指標平均值均優于PR/PD組患者(P<0.05),見表2。兩組患者治療后免疫不全麻痹恢復情況由治療前緩解狀態決定，VGPR/CR組的患者免疫狀態改善較PR/PD組患者顯著。VGPR/CR組治療前及治療后3個月骨髓瘤細胞百分數、β2-M水平、清蛋白、血清異常M蛋白、Scr等指標的平均值較PR/PD組改善差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表2　　兩組患者QOL(FACT-G評分)和免疫 不全麻痹改善情況

表3　　瘤負荷水平評估±s)

a:與CR/VGPR組比較，t=2.07，P=1.89；b:與CR/VGPR組比較，t=1.89，P=0.06；c:與CR/VGPR組比較，t=1.35，P=0.194；d:與CR/VGPR組比較，t=1.92，P=0.072；e:與CR/VGPR組比較，t=1.34,P=0.197。

2.2不良反應治療期間18例患者均無明顯骨髓抑制；18例患者基本無感染發生；4例患者回輸后出現短暫寒戰低熱，給予抗過敏處理后緩解。

3　討　　論

國內外研究表明，CIK與功能最強的專職抗原提呈細胞樹突狀細胞(DC)共培養，產生了更多的CD3+CD8+和CD3+CD56+細胞毒性T淋巴細胞，和較多的NK樣T淋巴細胞[5-6]。CIK的增殖活性顯著增加，高分泌IL-12、IL-2、IFN-γ，細胞毒作用加強，DC表面標記CD86、CD80、CD40的表達明顯增加，抗原提呈能力更強[7]。具有高效殺傷活性的CIK細胞和具有強大腫瘤抗原遞呈能力的DC聯合，兩者協同加強了對腫瘤細胞的殺傷作用[8-10]。

本研究回顧性分析了本院2013年2月至2014年10月間行自體DC-CIK治療的18位多發性骨髓瘤患者,發現治療前疾病狀態是DC-CIK效應的決定因素。回輸前瘤負荷越低，患者從DC-CIK治療中獲益越大，如QOL(主要在情感狀況和社會/家庭狀況方面)、免疫不全麻痹恢復程度(1級或2級為主)均改善明顯，瘤負荷水平變化不顯著。回輸前疾病處于PD的患者，單用DC-CIK者骨髓瘤持續進展，QOL和免疫不全麻痹無改善；聯合化學治療者，雖然瘤負荷水平有所下降，但QOL和免疫不全麻痹無明顯改善。因為本研究例數少，且為單臂分析，聯合化療、單用細胞免疫治療和單用化學治療之間并未充分對比，故是否聯合化學治療更能提高回輸后緩解率還有待進一步研究證實。孫薏等[11]利用DC-CIK聯合沙利度胺治療26例復發難治性骨髓瘤，總體有效率為73.1%。

在安全性方面，本研究顯示，DC-CIK細胞免疫治療并未發現明顯的不良反應。這與其他研究結論一致[6,12-13]。

文獻表明，進一步優化和修飾DC-CIK技術也許能彌補DC-CIK在降低瘤負荷水平方面的不足。例如，采用單倍體DC(來自子女)體外刺激CIK細胞能增強IFN-γ分泌，抑制IL-4分泌，從而加強對腫瘤細胞殺傷作用；透明質酸介導的細胞游走受體(RHAMM)在多種腫瘤中高表達，DC-CIK聯合疫苗回輸靶向性更強，也許能達到體內有效抗腫瘤作用[14-15]；將 DC、CIK 和某些抗原肽共同培養,可以增強對某些缺乏特異性抗原的腫瘤細胞的殺傷能力[16-17]。

或許，免疫治療的目標并不在于提高疾病緩解率，降低各種并發癥如感染的發生率，提高QOL才應該逐漸成為衡量免疫治療療效的指標。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2016.12.034

武漢市臨床醫學科研項目(WX14C01)。作者簡介：易雪(1977-)，副主任醫師，碩士，主要從事骨髓移植及移植物抗宿主病研究。△

，E-mail:hui_ch_eng@yahoo.com.cn。

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1671-8348(2016)12-1687-03

2016-01-23

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