針刺“陽陵泉”穴對豚鼠oddi括約肌肌電、膽囊壓力及膽汁流量的影響

趙敬軍　榮培晶　羅　曼　張金鈴　李　亮　梁繁榮

(1 中國中醫科學院針灸研究所，北京，100700； 2 成都中醫藥大學針灸推拿學院，成都，610075)

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針刺“陽陵泉”穴對豚鼠oddi括約肌肌電、膽囊壓力及膽汁流量的影響

趙敬軍1榮培晶1羅曼1張金鈴1李亮1梁繁榮2

(1 中國中醫科學院針灸研究所，北京，100700； 2 成都中醫藥大學針灸推拿學院，成都，610075)

目的：通過觀察針刺“天樞”“期門”“陽陵泉”對豚鼠膽囊壓力、oddi括約肌肌電及膽汁流量的影響，探討針刺“陽陵泉”穴調節肝外膽道系統運動功能的效應是否優于其他穴位及其可能的作用機制。方法：選用成年豚鼠15只，雌雄不限，分成“天樞”“期門”“陽陵泉”組，實驗采用oddi括約肌雙鉤金屬電極埋植測肌電場電位與膽囊內置小型人工球囊技術測壓，對麻醉豚鼠行在體記錄oddi括約肌肌電活動及膽囊內壓力變化，并記錄干預前后膽汁流量情況，針刺激頻率為60r/min，刺激穴位為：單側“期門”“天樞”“陽陵泉”，每次刺激1 min，選取連續刺激5次的數據用來分析。結果：針刺“天樞”“期門”穴，oddi括約肌肌電頻率與幅值與針刺前相比均明顯增多(均P<0.05)，膽囊壓力幅值無明顯變化(P>0.05)；針刺“陽陵泉”，oddi括約肌肌電頻率和幅值與針刺前相比明顯下降(P<0.01)，膽囊壓力幅值明顯上升(P<0.01)；針刺“陽陵泉”1 min，膽汁流量有顯著性升高(P<0.001)，針刺“天樞”或“期門”1 min，膽汁流量略有升高但是無統計學意義(P>0.05)。結論：1)針刺豚鼠“期門”“天樞”能明顯抑制膽囊的運動、促進oddi括約肌的肌電發放，減少進入十二指腸的膽汁流量，而針刺“陽陵泉”能顯著促進膽囊的收縮運動、抑制oddi括約肌的肌電發放，促進豚鼠膽汁流量的增加;2)“陽陵泉”的效果要明顯于其他穴位，由于“陽陵泉”為本經穴位，因此在本研究中存在明顯的循經特異性。

膽囊壓力；針刺；肌電；運動功能；oddi括約??；豚鼠

肝外膽道運動功能障礙類疾病屬于中醫脅痛范疇，長期的臨床實踐證實[1-3]，針刺“陽陵泉”“肩井”“膽俞”“期門”等對膽道系統疾病具有良好療效，隨著醫療技術的進步和基礎研究的深入，越來越多的證據指出肝外膽道系統的運動功能障礙可能是導致各類膽道系統疾病的重要因素[4-7]。肝外膽道系統的主要觀察對象是膽囊和oddi括約肌。正常情況下，膽囊和oddi括約肌的活動相互協調，而在病理情況下，膽囊的功能障礙與oddi括約肌的功能狀態息息相關[8]。

本研究在豚鼠生理狀態下，采用膽囊內放置人工小型氣囊的技術和用金屬雙鉤電極穿過oddi括約肌導出肌電的方法，觀察針刺“期門”“天樞”“陽陵泉”對豚鼠膽囊壓力和oddi括約肌及膽汁流量的影響，以進一步探討針刺“期門”“天樞”“陽陵泉”調整肝外膽道系統運動功能的效應及影響因素，為針灸臨床提供生理學的實驗依據。

1　材料與方法

1.1實驗動物成年豚鼠15只，雌雄不限，體重在450～600 g，由北京西山動物養殖場提供，生產許可證號為：SCXF-(京)-2011-0010。動物自購置后先進行適應性飼養，時間為1周，使用標準草料喂養，由于豚鼠體內無法合成充足維生素，故而每周在標準草料之外加入胡蘿卜與青菜喂養，標準為其體重的一半/d，動物可自由飲水與攝食，室溫為23～25 ℃。動物實驗得到中國中醫科學院針灸研究所動物實驗倫理委員會許可，實驗過程中對動物的處置嚴格遵循2006年中華人民共和國科技部頒發的《關于善待實驗動物的指導性意見》。

1.2實驗方法穴位定位及操作：穴位定位主要參照“常用實驗動物的針灸穴位”之方法[9]、結合采用模擬人體經穴進行豚鼠穴位定位。豚鼠“天樞”穴位于臍中旁開5 mm，操作為直刺進針2～3 mm；豚鼠“期門”穴位于第6肋間隙處，操作為平刺進2～3 mm；豚鼠“陽陵泉”穴位于后三里(膝關節后外側，在腓骨小頭下約3 mm處取穴)上外側4 mm，操作為直刺進針2～3 mm。以上諸穴采用捻轉刺激，頻率60次/min，針刺1 min。

實驗步驟：10%烏拉坦溶液(4.5 mL/kg)腹腔緩慢推注麻醉，劍突下沿腹正中線做長約8 mm的切口，充分的暴露膽囊，十二指腸和膽總管。膽囊插管：在膽囊底部剪2 mm的小口，將裝有生理鹽水的測壓小囊放入膽囊內，荷葉邊結扎切口，手術結固定。由一軟橡膠管將小囊與壓力換能器(MLT1199)相聯，壓力換能器的插頭插入生物信號放大器；oddi括約肌放置雙鉤電極，電極連線與十二指腸縱軸平行，電極的另一端通過生物信號放大器，2種信號均輸入到PowerLab S/4數據采集系統。術后待動物的狀態平穩以后，能記錄到穩定的肌電和壓力曲線再行針刺操作。Chart5.0記錄系統采樣頻率為200Hz；在線oddi括約肌肌電記錄濾波參數為低通10Hz，線下數字濾波低通1 Hz；膽囊壓力記錄參數為低通2 Hz，線下數字濾波低通1 Hz。

1.3針刺操作針刺方法：豚鼠“天樞”穴位于臍中旁開5 mm，“期門”穴位于第6肋間隙處，“陽陵泉”穴位于后三里(膝關節后外側，在腓骨小頭下約3 mm處取穴)上外側4 mm，采用捻轉行針，頻率60次/min，行針1 min。

2　結果

2.1針刺陽陵泉穴對豚鼠oddi括約肌肌電的影響正常豚鼠的oddi括約肌肌電由每隔3～5 s產生的包含1～8個峰電位放電所組成,在安靜狀態下，括約肌放電較為稀少，但始終是有規則的節律性發放。

針刺干預前，豚鼠的oddi括約肌肌電表現為單發或簇發，頻率3～7次/min，平均頻率：3.71±1.56(times/min)；最大幅值：16.7 mV，平均幅值：(13.72±2.71)mv；針刺陽陵泉前平均頻率為：4.75±0.50(times/min)，平均幅值為：(10.60±0.55)mV,針刺1 min oddi括約肌肌電平均頻率3.4±0.55(times/min)(P<0.01)，平均幅值(9.40±0.55)mV(P<0.01)；針刺期門前平均頻率為：3.60±0.55(times/min)，平均幅值為：(10.40±0.55)mV,手針刺激1 min，oddi括約肌肌電平均頻率4.60±0.55(times/min)(P<0.05)，平均幅值(11.40±0.55)mV(P<0.05)；針刺天樞前平均頻率為：4±0.71(times/min)，平均幅值為：(10.40±0.55)mV,手針刺激1 min，oddi括約肌肌電平均頻率5.2±0.84(times/min)(P<0.05)，平均幅值(11.20±0.45)mv(P<0.05)。

2.2針刺陽陵泉穴對豚鼠膽囊壓力的影響膽囊的壓力比較平穩，每分鐘有2～5次收縮，呼吸波與膽囊收縮波復合出現。針刺陽陵泉穴干預前，豚鼠膽囊壓力平均幅值為(3.2±0.45)mmHg，針刺陽陵泉1 min，觀察發現豚鼠膽囊壓力幅值上升為4.8±0.84(P<0.01)；針刺期門前，豚鼠膽囊壓力平均幅值(3.4±1.14)mmHg，針刺期門1 min，觀察發現豚鼠膽囊壓力幅值下降為2.8±0.45(P>0.05)；針刺天樞前，豚鼠膽囊壓力平均幅值為(3.8±0.84)mmHg，針刺天樞1 min，觀察發現豚鼠膽囊壓力幅值下降為3.2±0.45(P>0.05)。

圖1　針刺前和針刺過程中oddi括約肌肌電的 頻率變化情況(n=5)

注：△P<0.01；*P<0.05；針刺激“陽陵泉”穴1 min，oddi括約肌肌電頻率和針刺前相比顯著減少(P<0.01)；手針刺激“期門”或“天樞”穴1 min，oddi括約肌肌電頻率和針刺前相比顯著增加(P<0.05)。

圖2　針刺前和針刺過程中oddi括約肌肌電的 幅度變化情況(n=5)

注：△P<0.01；*P<0.05；針刺激“陽陵泉”穴1 min，oddi括約肌肌電幅度和針刺前相比顯著降低(P<0.01)；手針刺激“期門”或“天樞”穴1 min，oddi括約肌肌電頻率和針刺前相比顯著升高(P<0.05)。

2.3針刺陽陵泉穴對豚鼠膽汁流量的影響針刺陽陵泉穴干預前，豚鼠膽囊壓力平均幅值為10.8±0.84(g/min)，針刺陽陵泉1 min，觀察發現豚鼠膽囊壓力幅值上升為14.6±0.55(P<0.001)；針刺期門前，豚鼠膽囊壓力平均幅值10.2±1.09(g/min)，針刺期門1 min，觀察發現豚鼠膽囊壓力幅值下降為11±0.71(g/min)(P>0.05)；針刺天樞前，豚鼠膽囊壓力平均幅值為10.2±0.84(g/min)，針刺天樞1 min，觀察發現豚鼠膽囊壓力幅值下降為10±1(g/min)(P>0.05)。

圖3　針刺前和針刺過程中膽囊壓力的變化情況(n=5)

注：△P<0.01；針刺激“陽陵泉”穴1 min，豚鼠膽囊壓力幅度和針刺前相比顯著升高(P<0.01)；針刺激“期門”或“天樞”穴1 min，豚鼠膽囊壓力幅度和針刺前相比無顯著性變化(P>0.05)。

圖4　針刺前和針刺過程中膽汁流量的變化情況(n=5)

注：△△P<0.001；針刺激“陽陵泉”穴1 min，豚鼠膽汁流量和針刺前相比顯著升高(P<0.001)；針刺激“期門”或“天樞”穴1 min，豚鼠膽汁流量和針刺前相比無顯著性變化(P>0.05)。

3　討論

針刺對急慢性膽道系統疾病及其常見癥狀具有良好療效，現代大量臨床觀察[1-3，10]顯示，針刺足少陽膽經“陽陵泉”、足厥陰肝經穴“期門”等對膽道系統疾病具有良好的治療效果，然而目前依然缺乏相關的效應機制研究。

在本實驗中，“陽陵泉”為足少陽膽經上合穴，為本經五輸穴，刺之有疏肝利膽之功，早在《黃帝內經》中就已經有關于“陽陵泉”治療膽病的記載，《靈樞·邪氣藏府病形篇》曰：“膽病者，善太息，口苦，嘔宿汁，……，亦視其脈三陷下者炙之，其寒熱者，取陽陵泉”；“期門”穴是足厥陰肝經之募穴，且為足太陰、厥陰、陰維之會穴，功能健脾理氣，疏肝活血，對膽結石癥，肝炎、膽囊炎等肝膽病的康復保健具有良好療效；“天樞”穴為足陽明胃經穴位，位于臍旁兩寸，亦為手陽明大腸經之募穴，功善理氣行滯。從實驗結果而言，針刺膽經上合穴“陽陵泉”穴能有效促進膽汁流量的生成，能抑制oddi括約肌的活動增加膽囊的壓力，其針刺產生的效應最為明顯，遠優于“天樞”和“期門”2個穴位產生的效應；在循經特異性效應的層面來說，本經的穴位其效果要優于相表里的肝經穴位“期門”穴和近端的“天樞”穴，因此，針刺本經的“陽陵泉”穴對膽道系統疾病具有特異性效應，這為肝外膽道系統疾病的治療提供了有意義的臨床參考。

現代醫學研究證實，針刺“期門”穴、“天樞”穴、“陽陵泉”穴對oddi括約肌肌電、膽囊壓力和膽汁流量的調節主要經由交感和迷走神經協調完成，在消化間期迷走神經參與了oddi括約肌與膽囊協調運動的調控[11]；從神經分布的節段性支配情況來看，支配膽囊運動的交感神經元主要分布在T4-T10脊髓側角，支配oddi括約肌的交感神經元主要分布在T6-T12脊髓側角，“天樞”區域的軀體傳入信號主要投射到T9-T11，“期門”區域的軀體傳入信號主要投射到T3-T6，“陽陵泉”區域的軀體傳入信號主要投射到L4-L5，因此，針刺“期門”“天樞”的軀體傳入信息與膽囊、oddi括約肌的交感神經支配基本上處在脊髓的同節段或者重疊節段，因此,針刺“期門”“天樞”能有效抑制膽囊活動促進oddi括約肌舒縮。因而可以認為，膽道系統運動可以由針刺刺激引發抑制或者易化，而且抑制和易化都在很大程度上依賴于刺激部位的節段，“天樞”和“期門”的刺激通過Aδ類纖維或者C類纖維傳入，在脊髓水平通過激活交感神經反射性抑制膽道系統運動，而來自陽陵泉的針刺沖動，可能通過無髓傳入纖維經由脊髓上中樞的整合反射性經由副交感迷走神經傳出纖維發揮促進膽道運動和膽汁分泌的作用。

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(2016-06-16收稿責任編輯：洪志強)

Effects on Guinea Pig′s Oddi Sphincter, Pressure of Gallbladder, Bile flow When Acupuncturing at GB34

Zhao Jingjun1，Rong Peijing1，Luo Man1，Zhang Jinling1，Li Liang1，Liang Fanrong2

(1InstituteofAcupunctureandMoxibustion,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100700,China;2SchoolofAcupuncture-MoxibustionandTuina,ChengduUniversityofTCM,Chengdu610075,China)

Objective: To observe the effects of acupuncturing at “Qimen” (LR14)、“Tianshu” (ST25), “Yanglingquan” (GB34) on pressure of gallbladder, bile flow and motor function of oddi sphincter on guinea pig, so as to explore the efficacy and mechanism of acupuncture on regulating extra-hepatic biliary system movement and its advantages compared with the other different acpoints. Methods: Total 15 adult guinea pigs, no matter male or female, were were divided into LR14 group, ST25 group and GB34 group. The technology of implanted electrodes with double hooks was adopted for electrical detection of oddi sphincter, changes of gallbladder pressure, as well as bile flow. The frequency of acupuncture is 60r/min, acpoints were ST25、LR 14、GB34 for the single side, 1 min every time. And the results were obtained from the continues five time′s statistic. Results: Stimulation at ST25 or LR14 significantly increased the frequency and amplitude of oddi sphincter(P<0.05); but there was no significant decrease in the gallbladder pressure(P>0.05); On the contrary, stimulation at GB34 significantly decreased oddi sphincter and increased the gallbladder pressure(P<0.01). Bile current capacity of gallbladder had no significant change following one minute′s stimulation at the ST25 or LR14, but had significant change following one minute′s stimulation at the GB34(P<0.01). Conclusion: 1)Acupuncture at ST25 and LR14 could obviously inhibit the movement of gallbladder and promote the myoelectricity release of oddi sphincter. Acupuncturing at GB34 can apparently promote the shrinking movement of gallbladder and inhibit the myoelectricity release of oddi sphincter. 2)The effects of acupuncture at GB34 in this study had most significant changes than the ST25 or LR14.

Gall bladder pressure；Acupuncture；Myoelectricity；Motor function；Oddi sphincter; Guinea pig

科技部“973”課題(編號：2012CB518503)——“經穴效應循經特異性靶器官響應的生物學基礎研究”，負責人：榮培晶

趙敬軍，碩士研究生，研究方向：針灸效應機制，E-mail:tongchengzjj@163.com

榮培晶，研究員，博士研究生導師，研究方向：針灸效應機制，E-mail:drrongpj@163.com

R245

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10.3969/j.issn.1673-7202.2016.08.049