人參花醇提物中的皂苷類化學成分△

徐斐，李珂珂*，陳麗榮，弓曉杰*

(1.大連大學 醫學院，遼寧 大連 116622；2.大連大學 環境與化學工程學院，遼寧 大連 116622)

人參花醇提物中的皂苷類化學成分△

徐斐1，李珂珂1*，陳麗榮2，弓曉杰1*

(1.大連大學 醫學院，遼寧 大連116622；2.大連大學 環境與化學工程學院，遼寧 大連116622)

目的：研究人參PanaxginsengC.A.Meyer(Araliaceae)花中的皂苷類成分。方法：采用多種色譜技術對人參花的醇提物進行分離純化，并根據理化性質和波譜學數據對化合物進行結構鑒定。結果：從人參花70%乙醇水溶液提取物中分離得到11個化合物，分別鑒定為人參皂苷Re(1)、20(R)-人參皂苷Rg1(2)、20(S)-人參皂苷Rh1(3)、20(R)-人參皂苷Rh1(4)、人參皂苷Rd(5)、人參皂苷F1(6)、人參皂苷F5(7)、人參皂苷F3(8)、20(S)-原人參三醇(9)、達瑪-20(21)，24-二烯-3β，6α，12β-三醇(10)和達瑪-(E)-20(22)，24-二烯-3β，6α，12β-三醇(11)。結論：化合物3、9～11為首次從人參花中分離得到。

人參花；化學成分；達瑪-20(21)，24-二烯-3β，6α，12β-三醇；達瑪-(E)-20(22)，24-二烯-3β，6α，12β-三醇

人參花為五加科(Araliaceae)人參屬(Panax)植物人參PanaxginsengC.A.Meyer的干燥花蕾，每年7至8月份采收，屬人參之精華，素有“綠色黃金”之稱。《本草綱目》記載：人參花性溫和，味甘、微苦。現代藥學研究表明，人參花與人參根一樣都含有人參皂苷，是其主要生物活性成分，并且人參花中含5%～7%的總皂苷，是根中的5～6倍[1]。近年來，從人參花中分離得到了多個具有生物活性的新穎結構人參皂苷[2-4]。為系統研究人參花中的皂苷類成分，本實驗從人參花的乙醇提取物中分離鑒定了11個化合物，包括8個皂苷和3個皂苷元，本文報道其分離鑒定過程。

1 儀器與材料

1.1儀器

BrukerAVANCEDRX-500型(Bruke公司，1H，500MHz；13C，125MHz，TMS內標)核磁共振儀；制備型高效液相色譜儀[LC3000，C18色譜柱(250mm×10mm，5μm)]；LC-MS-2010EV電噴霧離子肼質譜儀(日本Shimadzu)。

1.2材料

柱色譜硅膠(200～300目，青島海洋化工廠)；SBCMCIgel反相色譜填料(F型75-150μm，成都科譜生物有限公司)；顯色劑為10%硫酸-乙醇溶液。

甲醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、環己烷(分析純，中國化工集團)，甲醇、乙腈(色譜純，美國TEDIA)，水為超純水。

本研究所用材料為人參的干燥花。人參花藥材于2014年7月采自吉林省通化縣，經大連大學弓曉杰教授鑒定為人參花。標本(No.2014003)存放于大連大學醫學院中藥學實驗室。

2 提取與分離

取干燥的人參花4kg，70%乙醇水溶液回流提取3次，每次2h，合并提取液，減壓濃縮，回收乙醇，得浸膏。水混懸后分別用環己烷和乙酸乙酯進行萃取，減壓回收溶劑后得環己烷部位204g、乙酸乙酯部位35g、水部位645g。

取水部位200g，采用大孔樹脂色譜分離，依次以0%、20%、40%、50%、60%、80%甲醇水溶液和甲醇洗脫，每500mL為一個流分，薄層色譜檢識，顯色劑為10%硫酸乙醇溶液，合并斑點相近的流分，濃縮回收溶劑得到10個部分(Fr.1～Fr.10)。Fr.3經MCI硅膠柱色譜，以甲醇-水(40%→100%)梯度洗脫，再經硅膠柱色譜，以三氯甲烷-甲醇-水(10∶3∶0.4)洗脫，最后經高效液相制備色譜(48%甲醇水溶液)純化，得化合物1(205.3mg)和2(116.2mg)。Fr.4經MCI硅膠柱色譜，以甲醇-水(30%→100%)洗脫，然后以三氯甲烷-甲醇-水(12∶3∶0.4)為洗脫劑經反復硅膠柱色譜分離，再經高效液相制備色譜(60%甲醇水溶液)純化，得化合物3(18.2mg)和4(15.6mg)。Fr.5經MCI硅膠柱色譜，以甲醇-水(40%→100%)梯度洗脫，再以硅膠柱色譜分離純化，三氯甲烷-甲醇-水(10∶3∶0.4)洗脫，得到化合物5(123.3mg)。

取乙酸乙酯部位30g，采用硅膠柱色譜分離，以三氯甲烷-乙醇-水(100∶10∶1→10∶10∶1)梯度洗脫，每500mL為1個流分，薄層色譜檢識，顯色劑為10%硫酸乙醇溶液，合并斑點相近流分，濃縮回收溶劑得到12個流分(Fr.1～Fr.12)。Fr.8經MCI硅膠柱色譜，以甲醇-水(50%→100%)梯度洗脫，得到化合物6(220mg)。Fr.9經高效液相制備色譜(55%甲醇水溶液)純化，得到化合物7(11.4mg)。Fr.10經MCI硅膠柱色譜，以甲醇-水(40%→100%)梯度洗脫，再經過高效液相制備色譜(55%甲醇水溶液)純化，得到化合物8(16.7mg)。Fr.3經MCI硅膠柱色譜，以甲醇-水(60%→100%)梯度洗脫，經高效液相制備色譜70%甲醇水溶液純化，得到化合物9(11.2mg)。Fr.2經MCI硅膠柱色譜，以甲醇-水(60%→100%)梯度洗脫，經高效液相制備色譜70%甲醇水溶液純化，得到化合物10(8.6mg)和11(9.7mg)。

3 結構鑒定

化合物1：白色粉末，10%硫酸乙醇試劑顯紫色斑點。分子式為C48H82O18。ESI-MSm/z969.7[M+Na]+。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：6.47(1H，br s，H-rha-1″)，5.34(1H，t，J=7.4 Hz，H-24)，5.24(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)，5.16(1H，d，J=7.8 Hz，H-glc-1?)，2.11(3H，s，H-28)，1.67(3H，s，H-26)，1.66(3H，s，H-27)，1.61(3H，s，H-21)，1.38(3H，s，H-29)，1.19(3H，s，H-18)，0.98(3H，s，H-19)，0.96(3H，s，H-30)；13C-NMR(125 MHz，C5D5N)數據見表1、2。參考文獻報道[5]，鑒定化合物1為人參皂苷Re。

化合物2：白色粉末，10%硫酸乙醇試劑顯紫色斑點。分子式為C42H72O14。ESI-MSm/z823.6[M+Na]+。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.28(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.17(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)，5.03(1H，d，J=7.8 Hz，H-glc-1″)，2.07(3H，s，H-28)，1.63(3H，s，H-26)，1.62(3H，s，H-27)，1.60(3H，s，H-21)，1.41(3H，s，H-29)，1.18(3H，s，H-18)，1.05(3H，s，H-19)，0.84(3H，s，H-30)；13C-NMR(125 MHz，C5D5N)數據見表1、2。參考文獻報道[6]，鑒定化合物2為20(R)-人參皂苷Rg1。

化合物3：白色粉末，10%硫酸乙醇試劑顯紫色斑點。分子式為C36H62O9。ESI-MSm/z661.5[M+Na]+。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.36(1H，t，J=7.5 Hz，H-24)，5.05(1H，d，J=7.5 Hz，H-1′)，2.10(3H，s，H-28)，1.80(3H，s，H-26)，1.66(3H，s，H-27)，1.62(3H，s，H-21)，1.42(3H，s，H-29)，1.22(3H，s，H-18)，1.06(3H，s，H-19)，0.86(3H，s，H-30)；13C-NMR(125 MHz，C5D5N)數據見表1、2。參考文獻報道[7]，鑒定化合物3為20(S)-人參皂苷Rh1，為首次從人參花中分離得到。

化合物4：白色粉末，10%硫酸乙醇試劑顯紫色斑點。分子式為C36H62O9。ESI-MSm/z661.5[M+Na]+。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.33(1H，t，J=7.9 Hz，H-24)，5.07(1H，d，J=8.0 Hz，H-1′)，2.10(3H，s，H-28)，1.72(3H，s，H-26)，1.67(3H，s，H-27)，1.64(3H，s，H-21)，1.42(3H，s，H-29)，1.28(3H，s，H-18)，1.10(3H，s，H-19)，0.91(3H，s，H-30)；13C-NMR(125 MHz，C5D5N)數據見表1、2。參考文獻報道[7]，鑒定化合物4為20(R)-人參皂苷Rh1。

化合物5：白色粉末，10%硫酸乙醇試劑顯紫色斑點。分子式為C48H82O18。ESI-MSm/z969.6[M+Na]+。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.57(1H，br s，H-24)，5.38(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1″)，5.21(1H，d，J=7.6 Hz，H-glc-1?)，4.91(1H，d，J=7.5 Hz，H-glc-1′)，1.65(3H，s，H-28)，1.62(3H，s，H-26)，1.50(3H，s，H-27)，1.31(3H，s，H-21)，1.13(3H，s，H-29)，0.98(3H，s，H-18)，0.84(3H，s，H-19)，0.79(3H，s，H-30)；13C-NMR(125 MHz，C5D5N)數據見表1、2。參考文獻報道[5]，鑒定化合物5為人參皂苷Rd。

化合物6：白色粉末，10%硫酸乙醇試劑顯紫色斑點。分子式為C36H62O9。ESI-MSm/z661.4[M+Na]+。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.27(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.20(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)，2.00(3H，s，H-28)，1.64(3H，s，H-26)，1.62(3H，s，H-27)，1.61(3H，s，H-21)，1.47(3H，s，H-29)，1.12(3H，s，H-18)，1.04(3H，s，H-19)，1.00(3H，s，H-30)；13C-NMR(125 MHz，C5D5N)數據見表1、2。參考文獻報道[8]，鑒定化合物6為人參皂苷F1。

化合物7：白色粉末，10%硫酸乙醇試劑顯紫色斑點。分子式為C41H70O13。ESI-MSm/z793.4[M+Na]+。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.34(1H，t，J=7.0 Hz，H-24)，5.17(1H，br s，H-ara-1′)，5.13(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)，1.99(3H，s，H-28)，1.65(3H，s，H-26)，1.62(3H，s，H-27)，1.60(3H，s，H-21)，1.46(3H，s，H-29)，1.12(3H，s，H-18)，1.02(3H，s，H-19)，0.98(3H，s，H-30)；13C-NMR(125 MHz，C5D5N)數據見表1、2。參考文獻報道[9]，鑒定化合物7為人參皂苷F5。

化合物8：白色粉末，10%硫酸乙醇試劑顯紫色斑點。分子式為C41H70O13。ESI-MSm/z793.4[M+Na]+。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.35(1H，br s，H-24)，5.11(1H，d，J=8.0 Hz，H-glc-1′)，4.97(1H，br s，H-ara-1′)，1.98(3H，s，H-28)，1.69(3H，s，H-26)，1.65(3H，s，H-27)，1.63(3H，s，H-21)，1.45(3H，s，H-29)，1.11(3H，s，H-18)，1.02(3H，s，H-19)，0.99(3H，s，H-30)；13C-NMR(125 MHz，C5D5N)數據見表1、2。參考文獻報道[10]，鑒定化合物8為人參皂苷F3。

化合物9：白色粉末，10%硫酸乙醇試劑顯紫色斑點。分子式為C30H52O4。ESI-MS m/z 499.5[M+Na]+。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.33(1H，t，J=7.5 Hz，H-24)，2.01(3H，s，H-28)，1.68(3H，s，H-26)，1.64(3H，s，H-27)，1.46(3H，s，H-21)，1.43(3H，s，H-29)，1.13(3H，s，H-18)，1.03(3H，s，H-19)，0.99(3H，s，H-30)；13C-NMR(125 MHz，C5D5N)數據見表1。參考文獻報道[11]，鑒定化合物9為20(S)-原人參三醇，為首次從人參花中分離得到。

化合物10：白色粉末，10%硫酸乙醇試劑顯紫色斑點。分子式為C30H50O3。ESI-MS m/z 481.5[M+Na]+。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.31(1H，m，H-24)，5.17(1H，br s，H-21a)，4.94(1H，br s，H-21b)，2.02(3H，s，H-28)，1.69(3H，s，H-26)，1.63(3H，s，H-27)，1.48(3H，s，H-29)，1.19(3H，s，H-18)，1.05(3H，s，H-19)，1.01(3H，s，H-30)；13C-NMR(125 MHz，C5D5N)數據見表1。參考文獻報道[12]，鑒定化合物10為達瑪-20(21)，24-二烯-3β，6α，12β-三醇，為首次從人參花中分離得到。

化合物11：白色粉末，10%硫酸乙醇試劑顯紫色斑點。分子式為C30H50O3。ESI-MSm/z481.5[M+Na]+。1H-NMR(500 MHz，C5D5N)δ：5.52(1H，t，J=6.0 Hz，H-22)，5.24(1H，m，H-24)，2.04(3H，s，H-28)，1.86(3H，s，H-21)，1.66(3H，s，H-27)，1.61(3H，s，H-26)，1.49(3H，s，H-29)，1.19(3H，s，H-19)，1.04(3H，s，H-18)，1.00(3H，s，H-30)；13C-NMR(125 MHz，C5D5N)數據見表1。參考文獻報道[13]，鑒定化合物11為達瑪-(E)-20(22)，24-二烯-3β，6α，12β-三醇，為首次從人參花中分離得到。

表1 化合物1～11苷元部分的13C-NMR數據(125 MHz，C5D5N)

表2 化合物1～8糖鏈部分的13C-NMR 數據(125 MHz，C5D5 N)

4 結論

本文報道從新鮮的人參花70%乙醇水提取物中分離得到的11個化合物，其中化合物3、9、10和11為首次從人參花中分離得到。

[1] Sung KK，Ok SC，Hye MB，et al.Quantitative analysis of ginsenosides composition in flower buds of various ginseng plants[J].J Korean Soc Appl Biol Chem，2011，54(1)：154-157.

[2] Yoshikawa M，Sugimoto S，Nakamura S，et al.Medicinal flowers.XVI.New dammarane-type triterpene tetraglycosides and gastroprotective principles from flower buds ofPanaxginseng[J].Chem Pharm Bull，2007，55(7)：1034-1038.

[3] Tung NH，Song GY，Nhiem NX，et al.Dammarane-type saponins from the flower buds ofPanaxginsengand their intracellular radical scavenging capacity[J].J Agric Food Chem，2010，58(2)：868-874.

[4] Nguyen HT，Song GY，Kim JA，et al.Dammarane-type saponins from the flower buds ofPanaxginsengand their effects on human leukemia cells[J].Bioorg Med Chem Lett，2010，20(1)：309-314.

[5] 曾江，崔秀，周家明，等.三七根莖的化學成分研究[J].中藥材，2007，30(11)：1388-1391.

[6] 時圣明，李巍，曹家慶，等.三七果化學成分的研究[J].中草藥，2010，41(8)：1249-1251.

[7] 賈繼明，王宗權.西洋參總皂苷乙酸水解產物的化學成分研究(I)[J].中草藥，2009，40(8)：1204-1207.

[8] Ko SR，Choi KJ，Suzuki K，et al.Enzymatic preparation of ginsenosides Rg2，Rh1，and F1[J].Chem Pharm Bull，2003，51(4)：404-408.

[9] 竇德強，陳英杰，馬忠澤，等.人參葉中微量新成分的研究[J].中國藥學，1996，5(1)：48-52.

[10] 竇德強，文曄，裴玉萍，等.人參葉中微量成分的研究[J].中國中藥雜志，1997，22(1)：35-37.

[11] 馬雙剛，姜永濤，宋少江，等.西洋參莖葉總皂苷堿降解成分[J].藥學學報，2005，40(10)：924-930.

[12] 李珂珂，楊秀偉.人參莖葉中1 個新三萜類天然產物[J].中草藥，2015，46(2)：169-173.

[13] Wu LJ，Wang LB，Gao HY，et al.A new compound from the leaves ofPanaxginseng[J].Fitoterapia，2007，78(7-8)：556-560.

SaponinsChemicalConstituentsfromAlcoholExtractofFlowerBudsofPanaxginseng

XUFei1，LIKeke1，CHENLirong2，GONGXiaojie1

(1.CollegeofMedical，DalianUniversity，Dalian116622，China；(2.CollegeofEnvironmentalandChemicalEngineering，DalianUniversity，Dalian116622，China)

Objective：To study the chemical constituents of the flower buds ofPanaxginsengC.A.Meyer.Methods：The chemical constituents were isolated and purified by various column chromatographies and the structures were identified by combination of spectroscopic methods (MS，1H，13C-NMR) as well as comparisons with the literature data.Results：Chemical investigation of the flower buds ofP.ginsengled to the isolation of eleven compounds，including ginsenoside Re (1)，20(R)-ginsenoside Rg1(2)，20(S)-ginsenoside Rh1(3)，20(R)-ginsenoside Rh1(4)，ginsenoside Rd (5)，ginsenoside F1(6)，ginsenoside F5(7)，ginsenoside F3(8)，20(S)-protopanaxatriol (9)，dammar-20(21)，24-diene-3β，6α，12β-triol (10) and dammar-(E)-20(22)，24-diene-3β，6α，12β-triol (11).Conclusion：Compounds3，9-11were firstly isolated from the flower buds ofP.ginseng.

Flower buds ofPanaxginseng；chemical constituent；dammar-20(21)，24-diene-3β，6α，12β-triol；dammar-(E)-20(22)，24-diene-3β，6α，12β-triol

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.1.007

2015-11-07)

國家自然科學基金(81172949)；遼寧省教育廳科學技術研究一般研究項目(L2012439)；遼寧省優秀人才支持計劃(LR2013058)；遼寧省自然科學基金計劃(2015020657)；遼寧省科技廳科學技術計劃項目(2014204007)；大連市科技局科技計劃項目(2014E12SF071)

*

李珂珂，博士，研究方向：活性天然產物分離與活性篩選，E-mail：like905219@163.com；弓曉杰，教授，碩士生導師，研究方向：中藥新藥開發，E-mail：gxjclr@163.com