3種南瓜的多糖提取及旋光檢測

陳 萍，賈曉梅，苗曉燕

（保定學(xué)院生化系 河北保定 071001）

南瓜，屬葫蘆科草本植物，性溫味甘，具有潤肺、補中益氣、消炎止痛、解毒殺蟲等功效[1]，并且南瓜多糖具有復(fù)雜的生物活性，可作為廣譜免疫促進劑，具有免疫調(diào)節(jié)功能[2-3]，能抗感染、抗放射[4]、降脂、降糖[5]、防癌[6]。南瓜多糖的保健功能和藥用價值備受人們關(guān)注，開發(fā)利用前景廣闊。

目前，國內(nèi)外關(guān)于南瓜多糖的報道主要集中在研究南瓜多糖的藥理性質(zhì)[7-8]和多糖的提取及純化方面[9-11]。而關(guān)于南瓜多糖測定的方法主要有直接滴定法[12-13]和紫外分光光度法[14]，而操作性更強、更簡便的旋光法還未見報道。本試驗以市售南瓜為研究對象，進行不同南瓜中多糖超聲輔助醇沉提取條件和旋光法測定條件的研究，以期建立快速準確、操作簡單的南瓜多糖測定方法，確定多糖含量高的南瓜品種，為南瓜的開發(fā)和深加工提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

選用北方市場常見的有代表性的3種不同南瓜，即金瓜、長南瓜和圓南瓜。

1.2 試驗設(shè)計

1.2.1 南瓜多糖提取的方法

1.2.1.1 濕法超聲醇沉 選取成熟的、肉質(zhì)硬且厚的南瓜洗凈，去皮、瓤和籽，切塊，用FW80高速萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司生產(chǎn)）將其破碎成漿狀，稱質(zhì)量，以60℃熱水為提取溶劑，按料液比1∶5加入蒸餾水，10 min預(yù)浸后，用B3200S-T超聲波清洗器（上海必能信超聲有限公司生產(chǎn)）提取南瓜多糖，超聲作用時間90 min。過濾提取液，收集濾液，Sevag法除蛋白[15]，加入95%乙醇靜置2 h，沉淀多糖。將提取液于離心機中以4 000 r·min-1離心30 min，棄去上清液，將沉淀相繼用丙酮、乙醚洗滌，真空干燥，得到南瓜多糖樣品，計算提取率。

1.2.1.2 干法超聲醇沉 南瓜洗凈，去皮、瓤和籽，切成薄片，稱質(zhì)量后于烘箱45℃烘干，避免溫度過高而焦糊。用萬能粉碎機粉碎，過200目篩，制成南瓜粉，稱質(zhì)量。按料液比1∶20將南瓜粉放入60℃恒溫槽，分別在與濕法超聲醇沉相同的預(yù)浸時間、超聲時間下進行提取。對提取液進行同上處理，得到南瓜多糖樣品，計算提取率。

1.2.2 南瓜多糖含量的測定

1.2.2.1 葡萄糖標準溶液的制備 準確配制葡萄糖標準溶液,質(zhì)量濃度依次為 0.001、0.002、0.003、0.004、0.005 g·mL-1,用 2 dm 旋光管測定旋光度,記錄數(shù)據(jù)。

1.2.2.2 旋光法測定南瓜多糖的含量 稱取多糖樣品0.5 g，放入250 mL三角瓶中，加水100 mL，加鹽酸 50 mL，將回流裝置于沸水浴中水解 2 h，取出，冷卻至室溫。將溶液于離心機中離心30 min（4 000 r·min-1），上清液即多糖溶液。準確吸取 5、10、15、20、25 mL 多糖溶液于 25 mL 容量瓶中，加蒸餾水定容,混合均勻后，用WZZ-2SS數(shù)字式自動旋光糖量計（上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)）測旋光度。根據(jù)葡萄糖標準曲線回歸方程計算相應(yīng)提取液中葡萄糖的濃度，計算樣品中多糖含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 南瓜多糖提取條件的選擇

由表1可知，不同南瓜的多糖含量明顯不同，采用濕法超聲浸提法，圓南瓜、長南瓜和金瓜的多糖提取率分別為0.69%、1.21%和1.31%，由表2可知，采用干法超聲浸提法，3種南瓜多糖的提取率分別為1.44%、1.98%和3.00%，明顯優(yōu)于濕法，3個品種的南瓜多糖平均提取率高于濕法1.07%。而且2種方法測得的多糖提取率均為金瓜＞長南瓜＞圓南瓜。

表1 南瓜多糖濕法提取效果

表2 南瓜多糖干法提取效果

2.2 旋光法測定南瓜多糖的含量

2.2.1 葡萄糖標準曲線的繪制 以旋光度與質(zhì)量濃度進行線性回歸，得線性回歸方程為y=50.75x-0.009，相關(guān)系數(shù) r=0.997 99（圖 1）。

圖1 旋光法測定葡萄糖標準曲線

2.2.2 南瓜多糖含量的測定 由表3、4和5可知,圓南瓜多糖提取線性回歸方程為y=38.403 61x-0.003，相關(guān)系數(shù)r=0.999 69；長南瓜線性回歸方程為y=40.098 55x-0.001 66，相關(guān)系數(shù)r=0.999 34；金瓜線性回歸方程為 y=50.401 26x-0.003，相關(guān)系數(shù) r=0.999 49。均說明葡萄糖在 0～0.007 g·mL-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好，多糖水解完全。根據(jù)葡萄糖標準曲線計算樣品中多糖含量，金瓜最高，為0.33%，長南瓜居中，為0.16%，而圓南瓜最低，僅為0.12%。

表3 圓南瓜多糖測定

表4 長南瓜多糖測定

表5 金瓜多糖測定

3 討論與結(jié)論

筆者選取北方市場有代表性的常見的3種不同南瓜為研究對象，進行多糖超聲輔助醇沉提取干、濕南瓜的多糖和旋光法測定條件研究，結(jié)果顯示，干法超聲醇沉法的南瓜多糖提取率要明顯高于濕法提取率，3種南瓜的多糖提取率干法提取率分別高于濕法提取率0.75%、0.77%、1.69%，因此選取干法提取適于實際應(yīng)用。這與孫俊、趙二勞等人的進行多糖提取方法所取得的結(jié)果一致[9-10]，但與鐘俊楨等人[11]的結(jié)果有區(qū)別，推測其原因可能與所選試材的差異性有關(guān)。目前對于南瓜多糖含量的測定主要是直接滴定法[12-13]和紫外分光光度法[14]，其中直接滴定法靈敏度不高、效率較低，重現(xiàn)性受條件影響較明顯；紫外分光光度法需要精密儀器才能進行，而用旋光法測定多糖含量只需采用一種試劑（鹽酸）處理后即可直接進行，操作簡單,耗時少，不需要昂貴的儀器，具有穩(wěn)定、簡便、快速等優(yōu)點。試驗中3種不同的南瓜多糖含量差異較大，以金瓜為最高，可達0.33%，長南瓜居中（0.16%），圓南瓜最低（0.12%）。通過不同南瓜中多糖超聲輔助醇沉提取條件和旋光法測定條件的研究，為南瓜種質(zhì)資源的篩選與評價、選取值得開發(fā)的理想降糖保健食品提供科學(xué)參考，為建立快速準確、操作簡單的南瓜多糖測定方法提供新的途徑，可應(yīng)用于南瓜多糖產(chǎn)品的質(zhì)量檢測。