參茸健腦膠囊質量標準研究

張　紅　孫婷婷　衛向峰　黨秋萍　劉建峰　霍　花

陜西省中醫藥研究院中藥研究所(西安 700700)

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參茸健腦膠囊質量標準研究

張紅孫婷婷衛向峰△黨秋萍劉建峰□霍花▲

陜西省中醫藥研究院中藥研究所(西安 700700)

目的：采用TLC和HPLC-ELSD建立參茸健腦膠囊的質量控制標準。方法：采用薄層色譜法鑒別參茸健腦膠囊中干姜和人參，采用HPLC-ELSD法對人參有效成分人參皂苷Rb1進行定量分析。結果：在薄層色譜中均能檢出干姜、人參藥材相應的主斑點；人參皂苷Rb1進樣量在0.8780～5.2680μg范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系(r =0.9999)，加樣回收率良好，均值為100.08%，RSD為2.35%。結論：所建立的藥品質量標準可用于參茸健腦膠囊的質量標準控制。

主題詞中藥質量檢測@參茸健腦膠囊

參茸健腦是西安中醫腦病醫院臨床應用較好的醫院制劑，由人參、干姜、黃芪、鹿茸、當歸等12味中藥組成。該方具有健脾益腎，養血補氣，強身健腦的功效，臨床用于腦萎縮、腦發育不全、五軟等。為更專屬、靈敏的控制該制劑的質量，本研究采用薄層色譜法鑒別參茸健腦膠囊中干姜和人參，采用HPLC-ELSD法對人參中人參皂苷Rb1進行含量測定，并在此基礎上制定了該制劑的質量標準[1]，現將結果報道如下。

1儀器與試藥高效液相色譜儀，超聲波提取儀、電子分析天平。人參皂苷Rb1、Re標準品、干姜對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：110704-201223)，甲醇、乙腈為美國Fisher公司產色譜純，其它均為分析純試劑。薄層色譜中所用硅膠板為普通硅膠G板。本研究中所用參茸健腦膠囊由西安中醫腦病醫院藥劑科生產(60粒/瓶)。

2方法與結果2.1定性鑒別2.1.1人參定性鑒別[1]：精密稱取本品內容物3g，加甲醇50ml，采用超聲法提取10min，過濾得提取液，低溫揮去溶劑，加水25ml溶解，用三氯甲烷提取2次(25ml/次)，棄去提取液，水溶液用水飽和正丁醇提取2次(25ml/次)，合并提取液，用10%氨試液洗滌2次(30ml/次)，正丁醇液置水浴低溫揮去溶劑，加甲醇溶解，定容至2ml，即得供試品溶液。另按處方比例取不含人參的陰性對照藥材，同法制成陰性樣品溶液。人參皂甙Re、人參皂甙Rb1標準品溶液：2mg/ml(甲醇)。采用TLC法進行鑒別，點樣量為5μl，薄層板采用硅膠G薄層板，展開劑為：CHCl3-HCOOH-CH3OH-H2O(15∶40∶22∶10)下層液(低于10℃放置)，顯色劑：10%硫酸乙醇溶液溶液，于105℃加熱2min至斑點顯色清晰。在供試品色譜中，檢出人參皂甙Re、人參皂甙Rb1，缺人參陰性樣品無干擾。

2.1.2干姜定性鑒別[2]：精密稱取本品7.5g，加乙醚20ml，采用超聲法提取30min，過濾，濾液低溫揮去溶劑，加乙酸乙酯1ml溶解，即得供試品溶液。另按處方比例取不含干姜的陰性對照藥材，同法制成陰性樣品溶液。再精密稱取干姜標準藥材1g，同供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液。采用TLC法進行鑒別，點樣量為5μl，薄層板采用硅膠G薄層板，展開劑：以石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶1∶1∶0.1)，展開后置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中檢出干姜藥材，缺干姜陰性樣品無干擾。

2.2樣品中人參皂苷Rb1含量測定2.2.1HPLC-ELSD色譜條件：色譜柱：Diamonsil C18；流動相：乙腈-水(31∶69)；ELSD條件(氣體流速：2.8 L/min；檢測器溫度為：105℃)。TPN大于6000(按人參皂苷Rb1色譜峰計算)。

2.2.2樣品溶液制備：對照溶液制備：根據文獻中的方法，精密稱取人參皂苷Rb1對照品適量，加甲醇制成0.3512mg/ml的對照品溶液，備用。供試溶液制備[3-4]：取本品適量，精密稱取約3g，采用索氏提取器，用氯仿提取3h，棄去提取液，再精密加入50ml正丁醇，放置12h后采用超聲法提取30min，濾過，精密量取續濾液25ml，低溫水浴蒸干，甲醇溶解，定容至5ml，即得。空白對照樣品溶液的制備：取除人參以外的處方中其它藥材，按照本制劑制備工藝制備陰性樣品，精密稱量適量陰性樣品，按上述方法制備陰性對照樣品溶液，作為實驗需要。

2.2.3系統適用性實驗:在2.2.1色譜條件下對對照品溶液、供試品溶液以及陰性樣品溶液進行測定，供試品中人參皂苷Rb1色譜峰分離度好，陰性樣品沒有干擾，故確定流動相比例為乙腈-水(19∶81)。

2.2.4線性范圍考察:分別精密吸取0.3512mg/ml的人參皂苷Rb1對照溶液2、4、6、8、10、12μl，測定，繪制標準曲線，得回歸方程y=2.0908x+5.0599，r =0.9999，人參皂苷Rb1在0.8780～5.2680μg范圍內，從結果來看，實驗中的峰面積值與進樣量呈線性關系。

2.2.5精密度實驗:吸取人參皂苷Rb1對照溶液10μL，連續進樣5次，分別測定，RSD為1.3%。

2.2.6穩定性實驗:取樣品適量，制備供試品溶液1份，分別放置0、2、4、6、8、10h測定其峰面積并計算含量，測得RSD為1.64%。表明本樣品溶液在10h內穩定。

2.2.7重復性實驗:取樣品適量，制備供試品溶液5份，精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測RSD為1.95%，表明該方法重現性良好。

2.2.8加樣回收實驗:按照設計方法，精密稱取已知含量(0.7431 mg/g)的樣品共6份，將樣品置于三角瓶中，然后對6份樣品分別精密加入人參皂苷Rb1對照品(0.439g/ml) 2.25、2.25、1.8、1.8、2.7、2.7ml，按照供試品制備方法制成加樣回收供試品溶液，分別測定，實驗結果見表1。從試驗結果可以看出，人參皂苷Rb1回收率在95～100%之間，平均回收率為100.08%；實驗結果顯示RSD為2.35%，加樣回收率良好。

表1　人參皂苷Rb1回收試驗結果(n=6)

2.2.9樣品測定:三批樣品分別精密稱取適量，按“重現性試驗”項下方法制備供試品溶液，測定，結果見表2。

表2　樣品含量測定結果

3討論參茸健腦膠囊是西安中醫腦病醫院根據中醫辨證論治的理論和實踐并經臨床反復驗證總結出的中藥復方制劑[5]。本研結果顯示人參和干姜的主斑點清晰可見，陰性對照無干擾，定性鑒別方法專屬性強。人參為君藥，人參皂苷Rb1為人參中主要有效成分，臨床研究表明其具有提高機體免疫活性、促進學習記憶能力、抗疲勞、抗腫瘤的作用，另外還具有腦缺血損傷、神經損傷保護作用。含量測定色譜結果顯示人參皂苷Rb1能與其他成分良好的分離且保留時間適合，陰性對照無干擾，能夠準確的反映出產品的內在質量。在人參供試品制備過程中對正丁醇超聲提取時間進行了考察，實驗結果表明正丁醇提取40min人參皂苷Rb1基本可提取完全，因此確定提取次數為40min。本研究所建立的方法可作為質量控制標準。

[1]汝秋明，楚云杰. 舒神靈膠囊質量標準研究[J].中國現代中藥，2014，16(2)：145-146.

[2]彭飛城，丁野，鄭金鳳，等. 附子理中丸(濃縮丸)質量標準的建立[J].中國藥師，2013，16(2)：256-257.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)[S].北京: 中國醫藥科技出版社，2010：284.

[4]李瓊，曾銳，楊學森.參芪膠囊質量標準研究[J].時珍國醫國藥，2014，25(1)：100-101.

[5]Liang W, Ge S, Yang L, et al. Ginsenosides Rb1 and Rg1 promote proliferation and expression of neurotrophic factors in primary Schwann cell cultures[J]. Brain Res, 2010, 1357: 20-21.

(收稿2016-02-22；修回2016-04-13)

△西安市中醫腦病醫院(西安 710038)

▲沈陽軍區總醫院北方醫院(沈陽 110034)

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10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.065