飛天蜈蚣七不同提取物的藥效學研究

楊秦雁　李　博

陜西省中醫醫院藥劑科 (西安 710002)

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飛天蜈蚣七不同提取物的藥效學研究

楊秦雁李博

陜西省中醫醫院藥劑科 (西安 710002)

目的：研究比較飛天蜈蚣七不同極性部位提取物的抗炎、鎮痛、抗疲勞和耐缺氧的活性。方法：分別采用二甲苯所致耳廓腫脹實驗、角叉菜膠所致小鼠足腫脹實驗、小鼠扭體法、熱板法、負重游泳實驗和常壓耐缺氧實驗對其抗炎、鎮痛、抗疲勞、和耐缺氧活性進行研究。結果：飛天蜈蚣七提取物乙醇部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位均表現出不同程度的抗炎、鎮痛、抗疲勞作用，尤其以正丁醇部位活性最為顯著，而其各部位的耐缺氧活性均不高。結論：飛天蜈蚣七不同極性部位提取物均具有抗炎、鎮痛、抗疲勞作用，其中正丁醇部位活性最強。

主題詞中藥制劑實驗，動物@飛天蜈蚣

ABSTRACT

Objective: To study the anti-inflammation, analgesia, anti-fatigue and anti-hypoxia activity of the different extracts from Aralia chinensis L.Methods: The pharmacological actions of anti-inflammation and analgesic were observed by xylene-induced ear swelling in mice, carrageenan-induced paw swelling in mice, acetic acid- induced writhing test and the hot-plate test in mice. Meanwhile, the anti-fatigue and anti-hypoxia effects were investigated by the load bearing swimming test and the hypoxia tolerance test respectively. Results: The ethanol extraction, ethyl acetate extraction and n-butanol extraction of Aralia chinensis L. all had anti-inflammation, analgesia and anti-fatigue effects. The n-butanol extraction had the most significant effect.The anti-hypoxia activity of all the different extracts was weak. Conclusion: The different extracts from Aralia chinensis L. all showed the anti-inflammation, analgesia and anti-fatigue effects. And the n-butanol extract had stronger activity.

飛天蜈蚣七為五加科植物楤木的根皮，分布于陜西、河北、山東、浙江、江西等地, 在陜西主要分布于秦嶺、巴山各個山區,主治風濕性關節炎、急慢性肝炎、跌打損傷、癰腫等[1-2]。目前已有文獻報道飛天蜈蚣七具有抗肝纖維化作用，但其它藥理活性有待進一步研究[3-4]。本研究旨在進一步對飛天蜈蚣七不同極性部位提取物進行藥理研究，探討各部位的藥理活性差異，篩選飛天蜈蚣七的主要活性部位，為飛天蜈蚣七藥材的進一步開發利用提供參考。

1材料1.1動物昆明種小鼠，體重20±2g，雌雄兼用，購于第四軍醫大學實驗動物中心，合格證號為陜動準字第01號。

1.2儀器旋轉蒸發儀(上海申勝生物技術有限公司)；AY220 電子分析天平(日本島津分析儀器公司)；HH-4數顯恒溫熱板水浴鍋(國華電器有限公司)；8mm打孔器。

1.3實驗試藥飛天蜈蚣七藥材采自秦巴山區、角叉菜膠、阿司匹林腸溶片、十全大補丸、二甲苯、冰醋酸。

2方法2.1樣品制備取飛天蜈蚣七藥材，粉碎，過3號篩，用75 %乙醇冷浸提取，回收溶劑，得乙醇粗提取物，即乙醇部位；然后依次用石油醚、乙酯乙酯、正丁醇進行索氏提取，將各部分提取液減壓濃縮，回收溶劑，得到飛天蜈蚣七各極性部位提取物，分別為石油醚部位、乙酯乙酯部位、正丁醇部位。臨用前將各提取部位密封置冰箱中冷藏，灌胃前用1%吐溫-80溶液混懸均勻。

2.2抗炎活性考察2.2.1對二甲苯所致小鼠耳郭腫脹的影響[5]：選取昆明種小鼠 140 只，雌雄各半，隨機分成 14組，每組10 只?？瞻讓φ战M給予1%吐溫-80溶液，陽性對照組給予阿司匹林(0.2g/kg)，給藥組分別為乙醇部位組、石油醚部位組、乙酸乙酯部位組、正丁醇部位組，給藥劑量分別設高、中、低劑量組(4、2、1g/kg生藥)。口服灌胃給藥，1次/d，連續給藥7d，末次給藥后，于小鼠右耳涂抹0.5ml/只二甲苯致炎，左耳不涂，1h后頸椎脫臼法處死小鼠，剪下左右兩耳，用直徑8mm打孔器在相同位置打下耳片，稱量，計算不同給藥組的腫脹度及腫脹抑制率。

2.2.2對角叉菜膠所致小鼠足趾腫脹的影響：取昆明種小鼠，分組及給藥同“2.2.1”，連續灌胃給藥7d，末次給藥后1h，于各小鼠右后足皮下注射1%角叉菜膠0.05 ml/只，5h后于同一位置剪下左右兩足，稱量，腫脹度即為右足質量減去左足質量，并計算腫脹抑制率。

2.3鎮痛活性考察2.3.1小鼠熱板鎮痛試驗[6]：取雌性小鼠，水浴溫度調節為(55±0. 5)℃，記錄小鼠足底接觸熱板至出現舔后足反應的時間即為小鼠痛閾值，選取痛閾值在5～30s小鼠140只。分組、給藥方法和劑量同“2.2.1”，連續灌胃給藥7d，分別于給藥前及末次給藥1h后分別測定小鼠痛閾值，痛閾值超過60s者按60s計算，并計算痛閾提高率。

2.3.2醋酸所致小鼠扭體反應的影響：選取小鼠140只，分組及給藥同“2.2.1”，末次給藥1h后，于各小鼠腹腔注射0.6% 醋酸溶液0.2ml/10g，觀察并記錄注射醋酸溶液后20min內小鼠出現扭體(伸展后肢、臀部抬高、腹部內凹、蠕行)的次數，并計算給藥組的扭體抑制率。

2.4抗疲勞能力考察負重游泳實驗選取昆明種小鼠，分組、給藥方法和劑量同“2.2.1”，陽性對照組給予十全大補丸(2g/kg)，末次給藥1h后，開始負重游泳實驗。將小鼠體重的10%鉛塊綁至背部，負重游泳，放入水溫30℃左右的水浴鍋中游泳，當小鼠沉入水中6s不能浮出水面時，即為體力耗竭時間。比較給給藥組的體力耗竭時間，通過計算游泳力竭時間延長率來評估其抗疲勞能力。

2.5耐缺氧能力考察常壓耐缺氧實驗選取昆明種小鼠，分組、給藥方法和劑量同“2.2.1”，陽性對照組給予十全大補丸(2g/kg)。末次給藥1 h后，將小鼠放入密閉瓶內，瓶內裝有10g鈉石灰，加蓋瓶塞。記錄放入小鼠至小鼠因缺氧而死亡的時間，并計算耐缺氧存活時間延長率。

3結果3.1抗炎活性飛天蜈蚣七各極性部位提取物均表現出不同強度的抗炎作用。其中以正丁醇部位作用最為明顯，其高劑量組抑制率達到了68.4%，接近于阿司匹林組水平77.3%，低劑量組抑制率也達到35.6%；乙醇部位和乙酸乙酯部位的抗炎作用也較為明顯；石油醚部位抗炎效果不明顯。與空白對照組比較，正丁醇部位各劑量組對二甲苯所致的耳廓腫脹均有顯著的抑制作用(P<0.01)，且存在一定的量效關系。飛天蜈蚣七各極性部位對角叉菜膠致小鼠足腫脹均有一定的抑制作用，正丁醇部位抑制作用最顯著，而石油醚部位幾乎沒有抗炎作用。其中當給藥劑量為4g/kg時，正丁醇部位的作用最強，達到57.3%，乙醇部位次之，為50.1%，乙酸乙酯部位也有一定抗炎作用(37%)，與空白對照組相比，顯著抑制小鼠足趾腫脹程度(P<0.05)，且呈現量依賴性。見表1。

表1　對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠所致小鼠足趾腫脹的影響(n=10)

3.2鎮痛活性從表2可見，熱板試驗表明飛天蜈蚣七不同極性部位提取物對醋酸所致的小鼠扭體反應均有一定的抑制作用，而正丁醇部位抑制作用最強，高劑量組扭體反應抑制率達到60.1%，阿司匹林組為79.1%；正丁醇部位各劑量組與空白對照組相比，扭體次數顯著減小(P<0.05)，且有一定的量效關系；乙醇部位和乙酸乙酯部位對小鼠扭體也有一定的抑制，但不如正丁醇部位，而石油醚部位作用并不明顯。從表2可見，飛天蜈蚣七正丁醇部位提取物能顯著減少醋酸所致的小鼠扭體次數，有明顯的鎮痛作用。正丁醇部位高劑量組對痛閾的提高率最大，達到62.9%，接近于陽性對照組阿司匹林(66.9%)的鎮痛效果；而且乙醇部位和乙酸乙酯部位的高劑量組對痛閾的提高率分別達到53.5%和44.2%，而石油醚部位對小鼠痛閾沒有明顯影響。

表2　對扭體法和熱板法小鼠疼痛的影響(n=10)

3.3抗疲勞能力由表3可知，正丁醇部位和乙酸乙酯部位高劑量組小鼠游泳時間有一定延長，明顯低于陽性對照組；而其他給藥組均沒有明顯延長小鼠力竭游泳時間。飛天蜈蚣七正丁醇部位具有一定的抗疲勞作用，但抗疲勞能力不強。

3.4耐缺氧能力如表3所示，十全大補丸組能顯著延長小鼠存活時間(P<0.05)，延長率可達到31.7%。而其它給藥組對小鼠常壓耐缺氧能力均沒有顯著影響，正丁醇部位的延長率能達到9.2%，存活時間延長率不高，且規律性不強。表明飛天蜈蚣七不同極性部位提取物不能提高小鼠的耐缺氧能力。

表3　抗疲勞和耐缺氧能力考察結果(n=10)

4結論本研究結果表明，飛天蜈蚣七不同極性部位提取物均有一定的抗炎、鎮痛和抗疲勞的療效，其中正丁醇部位的活性最強，接近于陽性對照組的效能，與空白對照組相比，具有顯著性差異(P<0.05)，且呈現一定的劑量依賴性；而對小鼠常壓耐缺氧能力均沒有顯著影響，存活時間延長率不高，且規律性不強。

飛天蜈蚣七根皮中富含的楤木皂苷A、銀蓮花苷、楤木皂苷D、竹節人參皂苷Ib等，均屬于三萜皂苷類化合物，而三萜皂苷類化合物具有抗炎、鎮痛、抗腫瘤、殺菌、降膽固醇等功效。由于正丁醇部位富含三萜皂苷成分，故推測飛天蜈蚣七正丁醇部位的抗炎、鎮痛和抗疲勞的活性與三萜皂苷成分密切相關。此外，飛天蜈蚣七藥材先經過乙醇提取，其中含有包括三萜皂苷、膽堿、揮發油等在內的大量有機成分，因此也表現出一定的抗炎鎮痛活性，但活性不如正丁醇部位。本研究僅對飛天蜈蚣七不同部位提取物的抗炎、鎮痛和抗疲勞等的活性進行了研究，而對正丁醇部位的化學成分并未進行詳細研究，接下來本課題組也將對飛天蜈蚣七正丁醇部位進行提取分離，從而得到飛天蜈蚣七的三萜皂苷類化學成分，進而確定飛天蜈蚣七生物活性的有效成分。有研究表明，當機體組織發生炎癥后，組織細胞會生成并釋放多種炎癥介質，比如白細胞介素-1，腫瘤壞死因子，前列腺素2、組胺等，從而產生炎癥反應；鎮痛作用包括中樞鎮痛作用和外周鎮痛作用，外周鎮痛作用與炎癥因子密切相關；抗疲勞作用主要通過提高體內抗氧化酶SOD的水平，加強機體清除自由基、抗氧化作用，從而達到抗疲勞效果。本研究結果顯示飛天蜈蚣七正丁醇部位有一定的抗炎、鎮痛和抗疲勞的療效，而關于該部位抗炎、鎮痛及抗疲勞活性的作用機理尚需進一步深入研究。

綜上所述，飛天蜈蚣七不同極性部位提取物均有一定的抗炎、鎮痛和抗疲勞的療效，其中正丁醇部位的活性最強，乙醇部位次之，石油醚部位活性不明顯,而對小鼠常壓耐缺氧能力并沒有顯著影響。說明飛天蜈蚣七正丁醇部位是其活性有效部位，而對正丁醇部位化學成分并未進行詳細研究，本課題組也將進一步對飛天蜈蚣七正丁醇部位進行提取分離，以期確定飛天蜈蚣七生物活性的有效成分，從而深入研究其抗炎、鎮痛和抗疲勞的作用機理，為飛天蜈蚣七藥材質量控制、臨床合理用藥和綜合開發利用提供科學依據。

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[6]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].北京:人民衛生出版社,2002:882.

(收稿2016-04-21；修回2016-05-30)

Comparative studies on pharmacodynamics effects of different extracts from Aralia Chinensis L

Department of Pharmacy, The Shaanxi Province Hospital of Traditional

Chinese Medicine (Xi’an 710002)Yang Qinyan Li Bo

Chinese materia medica preparationAnimal experimentation @ Aralia Chinensis L.

R258.6

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.073