莪黃湯保留灌腸對人結腸癌SW480移植瘤生長及VEGF表達的影響*

侯俊明　任占良　侯杰軍　楊得振　董　明　魏　輝　賈　奇　任小朋　賈　勇

陜西中醫藥大學(咸陽 712000)

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莪黃湯保留灌腸對人結腸癌SW480移植瘤生長及VEGF表達的影響*

侯俊明任占良▲侯杰軍△◇楊得振△董明△魏輝△賈奇△任小朋△賈勇△

陜西中醫藥大學(咸陽 712000)

目的：研究莪黃湯對人結腸癌SW480移植瘤生長及VEGF的影響。方法：選健康SPF級BALB/c小鼠2只，雌性，年齡4～6周，體重18～22g；健康SD大鼠40只，體重200±15g。造模后，40只SD大鼠隨機分為模型組、對照組、陽性對照組、莪黃湯高劑量組、莪黃湯低劑量組，每組10只,接種后1周開始給藥治療。四組均給予飼料、自由飲用水，分別用相應藥物干預處理2周。觀察莪黃湯對人結腸癌SW480移植瘤生長及抑瘤作用的影響，運用S-P免疫組化法分析移植瘤內血管內皮生長因子的表達。結果：莪黃湯對SW480移植瘤大鼠瘤體生長有抑制作用，但弱于5-FU；該藥等促進大鼠胸腺、脾臟的生長，提升了機體的免疫力及抗腫瘤能力；陽性對照組與藥物組對SW480移植瘤大鼠VEGF表達的影響相近；可抑制腫瘤細胞的生長，促進腫瘤細胞的凋亡。結論：莪黃湯對SW480移植瘤細胞的生長有明顯抑制作用，減少SW480移植瘤表達VEGF，促進腫瘤細胞凋亡。

主題詞結腸腫瘤灌腸@莪黃湯動物，實驗

中醫藥抗腫瘤治療既能扶正、增強機體免疫功能，又能殺滅腫瘤細胞，還能活血并改善高黏高凝狀態，在腫瘤治療過程中發揮著重要的作用[1]。本次實驗通過對SW480荷瘤大鼠免疫功能影響的研究，探討了莪黃湯對人結腸癌移植瘤的抑瘤作用及對VEGF表達的影響。

1材料1.1實驗材料健康SPF級BALB/c雌性小鼠2只，鼠齡4～6周，體重20±2g；健康SD大鼠40只，體重200±15g；以上動物均購自第四軍醫大學實驗動物中心，其中健康SPF級BALB/c小鼠代養在第四軍醫大學動物實驗中心SPF條件下的超凈層流籠中；人結腸癌SW480細胞株購自第四軍醫大學實驗動物中心。莪黃湯組方：莪術、大黃、昆布、薏苡仁。陽性對照藥物：5-FU購自陜西中醫學院附屬醫院。(批準文號：國藥準字H31020593，規格0.25g/支)。實驗試劑盒：鼠抗人VEGF免疫組化試劑(產品貨號：A003-3)。

2實驗方法2.1造模及分組灌腸將莪黃湯生藥80g，煎湯濃縮為生藥含量為4g/ml冷藏備用(陜西中醫學院藥理實驗中心制備)，用前稀釋至所需濃度。選健康SPF級BALB/c小鼠2只，雌性，年齡4～6周，體重18～22g；健康SD大鼠40只，體重200±15g。在健康SPF級BALB/c小鼠背部種植人結腸癌SW480細胞，制成實體瘤模，觀察兩周后成瘤率100%[2]。成瘤后即處死瘤鼠，消毒皮膚，切下瘤塊，選用合適部位于生理鹽水中剪成直徑2mm的瘤塊備用。40只SD大鼠經適應性喂養3d后進行瘤體種植手術；術前禁食12 h，以10%水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉，常規安爾碘消毒腹部皮膚，選擇下腹正中切口，打開腹腔，將制備好的瘤塊植入距回盲部約5cm處腸系膜側的漿膜面凹龕中[3]。術后所有大鼠暫時分籠飼養至完全清醒后給予正常飲食。以《藥理學實驗》給藥方法，莪黃湯組結腸給藥，按低劑量組4g/kg/d，高劑量組40g/(kg·d)[4]。5-FU結合臨床用藥原則，按公式計算，每只大鼠腹腔注射50mg/kg，隔日。

所有SD大鼠全部蘇醒，按根據隨機數字表分組的方法分為4組，模型對照組[用蒸餾水按10ml∕(kg·d)體重灌腸]；陽性對照組(腹腔注射5-FU，給藥劑量為50mg/kg,隔日)；莪黃湯高劑量組[2ml(8g)/(d·只)]；莪黃湯低劑量組[2ml(0.8g)/(d·只)]，每組10只。接種后1周開始給藥治療，均給予飼料、自由飲用水，分別用相應藥物干預處理2周。觀察SD大鼠一般情況；各組SD大鼠體重的變化；SW480移植瘤的生長狀況。計算抑瘤率抑瘤率(%)=[(模型組平均瘤重-用藥組平均瘤重)/模型組平均瘤重×100%]及脾臟(胸腺)指數脾臟(胸腺)指數=[脾臟(胸腺)重量(mg)/大鼠體重(g)]。S-P免疫組化分析法測定各組VEGF的表達。

2.2統計學方法實驗數據以均值±標準差表示，數據采用SPSS17.0統計軟件進行數據分析，P<0.05為有統計學意義。

3結果3.1SD大鼠生活狀況觀察造模前所有大鼠生活狀況良好。接種后1周內，未見異常，各組大鼠均成瘤成功，成瘤率為100%。給藥2周以后，體重變化情況模型組較其它組均有減輕，進食及飲水量明顯減少，體毛雜亂暗淡無光。陽性對照組明顯出現脫毛、體毛雜亂、無光澤，較模型組體重明顯減輕。莪黃湯各組大鼠體重明顯增長，日進食、水量增加，活動好。模型組1只大鼠因全身衰竭死亡。

3.2給藥前后對各組大鼠體重的影響SD大鼠接種第7天與用藥后第15天體重比較，用藥后體重與模型組比較陽性對照組降低，差異具有統計學差異(P<0.01)，與模型組比較莪黃湯組均升高，升高程度統計學差異顯著(P<0.01)；莪黃湯組體重均高于陽性對照組，差異具有統計學意義(P<0.01)，見表1。

表1　給藥前后SD大鼠體重變化比較(g)

3.3藥物對大鼠瘤體重量及抑瘤率的影響對實驗大鼠進行藥物灌腸，灌腸后2周，嚴格稱取SD大鼠體重，瘤體重量及抑瘤率分析結果見表2。從結果來看，實驗鼠的體重兩組存在顯著差異，與陽性對照組的大鼠體重比較比較，莪黃湯組的大鼠體重均較高(P<0.05)。

表2　藥物對SW480移植瘤大鼠瘤體重量及抑瘤率的影響

3.4藥物對SW480移植瘤大鼠免疫器官指數的影響與模型組比較，陽性對照組指數均降低(P<0.05)，與陽性對照組比較，莪黃湯組均較高(P<0.05)，見表3。

表3　藥物對SW480移植瘤大鼠脾臟、胸腺指數的影響(mg/g)

3.5藥物對SW480移植瘤大鼠瘤組織中VEGF的影響與模型對照組比較，陽性對照組、莪黃湯高劑量組表達VEGF明顯下降，莪黃湯低劑量組VEGF表達有所下降；莪黃湯高劑量組與陽性對照組比較無明顯差異，說明莪黃湯與5-FU對SW480移植瘤大鼠VEGF的表達影響相近，見表4。

表4　藥物對SW480移植瘤大鼠瘤組織中VEGF的影響

4討論運用莪黃湯保留灌腸，在改善結直腸癌術后患者排便功能、圍放療期患者的臨床表現，改善腫瘤周圍組織手術條件，增強新輔助治療效果，縮短了新輔助治療的時間，提高患者的生活質量方面取得了一定的療效[5]。莪黃湯聯合化療能在一定程度上下調患者結直腸癌組織中VEGF的表達，上調E-Cadherin的表達，抑制腫瘤新生血管生成，從而抑制腫瘤的復發及轉移[6]。

以往的研究中發現益氣活血類中藥可通過影響SDF-1/CXCR4通路等,調節血管生成,從而治療血管生成異常的疾病；而從莪術中提取莪術醇和β—欖香烯的抗腫瘤作用尤其突出[7]。李傳偉等[8]探討了莪術油對小鼠結腸癌抑制作用及機制。馮剛等[9]通過實驗證明莪術油對腫瘤血管形成有明顯抑制作用。大黃素抗腫瘤、抗炎癥等多種生物學作用已經有報道[10]。 王庭欣等[11]認為昆布多糖是通過細胞免疫和非特異性免疫而實現對小鼠的抑瘤作用。馮剛等[12]發現薏苡仁具有明顯抑制S180肉瘤生長的功效。

本實驗提示莪黃湯對SW480移植瘤大鼠瘤體的生長有抑制，但弱于5-FU。與模型對照組比較，莪黃湯各劑量組可增強SD大鼠免疫力，具有顯著性差異；與陽性對照組比較，莪黃湯各劑量組SD大鼠胸腺指數、脾臟指數顯著升高；與模型組相比，5-FU組SD大鼠免疫力明顯降低，顯示了5-FU對大鼠的脾臟和胸腺較強的損傷作用。莪黃湯各劑量組與陽性對照組相比較，莪黃湯能夠促使大鼠的胸腺、脾臟生長，能改善機體的免疫功能，增強抗腫瘤的能力。

目前眾多研究證實，當腫瘤體積大于2mm3時，就需要新生血管來為腫瘤細胞的生長提供養分。大腸癌的復發和轉移同樣依賴新生血管的形成。宋寄春等[13]發現半枝蓮阻滯了腫瘤細胞由S期向GZ/M期的轉變過程，從而引起腫瘤細胞凋亡。崔映宇等[14]發現馬尾松樹皮提取物抑制人結直腸癌細胞的生長，誘導其凋亡是通過上調P53、P21，下調Bel-2來表達。呂盈盈等[15]發現大黃素通過抑制VEGFR酪氨酸激酶活性來抑制結腸癌細胞的生長。

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[14]崔映宇，王宏斌，謝衡，等.馬尾松樹皮提取物體外抑制人大腸癌細胞生長機理初探[J].中國農業大學學報，2007,12(4):7-14.

[15]呂盈盈，錢家鳴，邱輝忠，等.大黃素對結腸癌血管內皮生長因子受體的影響及對結腸癌抑制作用的研究[J].中國中西醫結合消化雜志，2005,13(5):310-313.

(收稿2016-05-07；修回2016-06-20)

*陜西省社會發展科技攻關項目(2012SF2-11-3)

▲陜西戶縣森工醫院(戶縣710300)

△陜西中醫藥大學附屬醫院(咸陽 712000)

R574.62

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.074