龍生蛭膠囊對高脂大鼠動脈粥樣硬化的影響*

方歡樂　陳衍斌　韓寧娟　馬懷芬　鄧文丹　張小麗

西安培華學院醫(yī)學院(西安 710125)

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·實驗研究·

龍生蛭膠囊對高脂大鼠動脈粥樣硬化的影響*

方歡樂陳衍斌△韓寧娟馬懷芬鄧文丹張小麗▲

西安培華學院醫(yī)學院(西安 710125)

目的：探討龍生蛭膠囊改善動脈粥樣硬化大鼠血脂、血流變及抗氧化的作用。方法：大鼠高脂飼料加腹腔注射維生素D3，復制AS模型，檢測龍生蛭膠囊對大鼠血清血脂、血液流變學、抗氧化指標的影響。結(jié)果：與模型組比較，中、高劑量組藥物能顯著降低AS大鼠血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LHL)水平，升高高密度脂蛋白(HDL)水平。同時也能降低AS大鼠全血黏度(高、中、低切)、血漿黏度和紅細胞壓積。藥物和模型組比較能顯著降低血液中MDA含量，提高SOD活性。結(jié)論：龍生蛭膠囊可以改善AS大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)，降低大鼠血脂、血液流變學指標。

主題詞動脈硬化/中西醫(yī)結(jié)合療法@龍生蛭膠囊實驗，動物

心腦血管疾病是世界上發(fā)病率和病死率較高的疾病之一。動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是導致其發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)。AS的病因比較復雜,發(fā)病機制涉及脂質(zhì)代謝、血栓形成及氧化應(yīng)激等多個方面[1]。現(xiàn)代醫(yī)學能根據(jù)其發(fā)病機制對AS 提出不少的治療方法。中醫(yī)藥在治療動脈硬化的過程中，以辨證論治的原則為依據(jù)，在AS病變的預(yù)防和治療方面有著極大的潛力，藥物在療效性和安全性方面都有很好的表現(xiàn)[2]。龍生蛭膠囊由黃芪、水蛭、川芎、當歸等12味中藥組成，是治療心腦血管疾病的現(xiàn)代中藥制劑，具有補氣活血、逐瘀通絡(luò)的功效，臨床上用于腦梗塞恢復期中醫(yī)辨證為氣虛血瘀型中風中經(jīng)絡(luò)者。有文獻報道表明龍生蛭膠囊在腦血栓防治中療效確切，但藥物是否通過抗氧化、降血脂對抗動脈粥樣硬化改善心腦血管疾病作用不清楚[3-4]。本實驗研究進行了龍生蛭膠囊抗早期動脈粥樣硬化形成實驗研究。為藥物深入的開發(fā)研究提供依據(jù)。

1材料1.1動物雄性SD大鼠，體重180～220g，實驗動物由第四軍醫(yī)大學實驗動物中心提供，生產(chǎn)許可證號:SCXK(軍)2012-0007。

1.2藥物與試劑龍生蛭膠囊(批號：20150914)、維生素D(批號:20100601)、膽酸鈉(批號:110728)、膽固醇(批號:111025)、辛伐他汀片(批號11A141205)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)試劑盒(批號為20150211，20150207)。

1.3儀器實驗包括臺式離心機 H-1600A(江東儀器)；電熱恒溫干燥箱202-2AB型；iMark全自動酶標儀；CKX4 熒光倒置相差顯微鏡；JA10003B大量程電子精密天平；LBY-N6 型血液流變儀。

2方法2.1模型建立及動物分組、給藥取實驗大鼠60組，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機分為空白對照組(給以正常飼料)；模型組(給予高脂飼料)；陽性對照組(辛伐他汀)及龍生蛭低、中、高劑量組。每組大鼠10只。按文獻[5]的方法建立高血脂并動脈粥樣硬化模型，實驗進行高脂飼料(高脂飼料配方如下：3%膽固醇、0.5%膽酸鈉、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%豬油、81.3%基礎(chǔ)飼料)喂養(yǎng)，實驗開始時一次性腹腔注射維生素D3注射液60萬IU/kg。動物持續(xù)高脂喂養(yǎng)8周。高脂喂養(yǎng)4周后，對照組和模型組每天灌胃等體積生理鹽水；辛伐他汀組、龍生蛭低中高劑量組，每天給高脂飼料同時間灌胃給藥1次，給藥量為辛伐他汀組5.5mg/kg；龍生蛭低劑量0.72g/kg、中劑量1.44g/kg、高劑量2.88g/kg。

2.2相關(guān)指標的檢測血脂的檢測末次給藥后，禁食禁水12h。第2日，用20%烏拉坦(0.5ml/100g)溶液麻醉大鼠。打開腹腔，10ml無菌注射器插入腹主動脈抽血。3500 r/min離心10min分離血清，測定TG、TC 、HDL-C 和LDL-C，具體操作按試劑盒說明書完成。抗氧化指標檢測：采用硫代巴比妥酸法測定MDA 含量；黃嘌呤氧化法測定SOD活力。腹主動脈HE染色：打開腹腔，于腹主動脈同一部位取材，放置于15%甲醛溶液中固定，再經(jīng)過石蠟包埋、切片進行HE 染色。血液流變學檢測：用LBY-N6 型血液流變儀，分別測定全血低切、中切、高切黏度及血漿黏度。

3結(jié)果3.1AS模型的判定將大鼠喂養(yǎng)8周后，腹主動脈HE染色顯示，模型組大鼠腹主動脈壁增厚，內(nèi)皮細胞呈連續(xù)性缺失，內(nèi)皮下間隙增寬，可見中膜平滑肌細胞間隙增加堆積，但未見明顯脂質(zhì)斑塊形成，初步判定為動脈粥樣硬化形成早期。結(jié)果見圖1。

3.2各組大鼠體重的影響大鼠在飼養(yǎng)過程中，每周稱重1次，對0、2、4、6、8周各組大鼠體重進行分析，模型組和空白

對照組比較體重增加顯著(P<0.05)，兩組比較無顯著性差異。結(jié)果見表1。

表1　各組大鼠體重變化(g)

3.3對血脂的影響模型組大鼠血液檢測TG、TC、LDL 顯著高于空白對照組；與模型組比較，龍生蛭膠囊中、高劑量組可抑制高脂飲食所致的TG、TC、LDL的升高，同時結(jié)果顯示可以提高抗動脈粥樣硬化的膽固醇HDL的含量，實驗結(jié)果有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，見表2。

表2　各組大鼠血脂檢測結(jié)果(mmol/L)

3.4對血液流變學的影響實驗結(jié)果表明模型組大鼠全血黏度(高、中、低切)、血漿黏度、紅細胞聚集顯著高于空白對照組；與模型組比較，龍生蛭中、高劑量組可降低造模所致的血流變學的改變。實驗結(jié)果和模型組比較有很好的顯著性(P<0.05)，見表3。

3.5SOD、MDA的影響實驗表明，與對照組相比較，模型組大鼠血清SOD活性顯著降低，MDA含量明顯升高，有顯著性差異。與模型組比較，龍生蛭中高劑量組均能顯著升高高脂大鼠SOD活性，降低血清MDA含量，差異有統(tǒng)計學意義，結(jié)果見表4。

表3　各組大鼠血液流變學指標比較

表4　各組大鼠血清SOD活性和MDA含量的影響

4討論動脈粥樣硬化(AS)是目前常見的一種心腦血管病變，在中醫(yī)上屬于“痰瘀”、“血瘀”范疇,中藥在防治AS方面有著獨特的效果，引起世人的關(guān)注[6-7]。龍生蛭膠囊方中黃芪、水蛭為君藥，黃芪補氣以治本、水蛭逐瘀以治標，可收標本同治之功。方中以桃仁、紅花、赤芍、川芎、當歸為臣，此五藥皆為活血祛瘀之品，以助水蛭逐瘀通經(jīng)之力。方中佐以刺五加、桑寄

生取其補肝腎、壯筋骨作用，諸藥合用補氣活血，逐瘀通絡(luò)改善心血管疾病的作用。As公認的危險因素為脂質(zhì)代謝異常，本研究結(jié)果顯示中高劑量的龍生蛭膠囊可調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，降低高脂大鼠血液中TG、TC、LDL含量，升高抗AS的膽固醇HDL水平[8]。同時有研究報道血脂水平的變化與血液流變學指標異常變化密切相關(guān)，而血液流變學指標異常變化也是AS引發(fā)心腦血管疾病的早期表現(xiàn)[9]。本實驗結(jié)果表明龍生蛭膠囊可明顯改善高脂大鼠血液黏度指標，保護血管、對抗AS。

動脈粥樣硬化斑塊形成學說中氧化應(yīng)激也是重要組成部分[10]。多種因素誘發(fā)動脈粥樣硬化發(fā)生，使得機體細胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生與抗氧化之間失衡，從而導致組織的損傷誘發(fā)了脂質(zhì)過氧，使得脂質(zhì)過氧的主要終產(chǎn)物MDA增加，而內(nèi)皮細胞表面的抗氧化物酶SOD活性降低致As主動脈病變的加重。實驗結(jié)果表明龍生蛭膠囊可提高自由基清除酶的活性，維護體內(nèi)自由基穩(wěn)態(tài)與平衡，增加LDL的抗氧化能力，減少脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生，發(fā)揮預(yù)防高脂血癥和抗AS的作用。

[1] 梁柱地，曾憲彪，韋貴寧,等.藤茶雙氫楊梅素對動脈粥樣硬化大鼠血脂代謝及抗氧化作用的影響[J].醫(yī)藥導報,2015,34(6):710-713.

[2] 霍煜，姚天明，梁卓,等.冠心舒通膠囊對動脈粥樣硬化大鼠血脂代謝及血流變學指標的影響[J].遼寧中醫(yī)藥大學學報,2011,13(11):248-250.

[3] 付清偉.步長龍生蛭膠囊聯(lián)合西藥治療缺血性腦卒中隨機平行對照研究[J].實用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2014,28(2):92-94.

[4] 從學,李學軍,張學中.丹紅注射液合并龍生蛭膠囊治療腦梗塞臨床觀察[J].遼寧中醫(yī)雜志,2011,38(12):2398-2399.

[5] 楊鵬遠,芮耀成,焦亞斌.動脈粥樣硬化大鼠實驗?zāi)Ｐ偷慕J].第二軍醫(yī)大學學報,2003，24(7):802-804.

[6] 邢連喜,藺小平,常鋒,等.脂糖泰膠囊副主降血脂功能的實驗研究[J].陜西中醫(yī)，2013，34(1):109-110.

[7] 閆曙光,周永學,惠毅,等.通便玉蓉丸治療非酒精性脂肪肝及高脂血癥的實驗研究[J].陜西中醫(yī)，2012,33(1):111-113.

[8] Barter PJ, Ballantyne CM, Carmena R, etal. ApoB versuscholesterol in estimating cardiovascular risk and in guidingtherapy: report of the thirty-person/ten-country panel [J]. JIntern Med, 2006, 259: 247:258.

[9] 高麗霞.血液流變學檢測在高脂血癥患者治療和預(yù)防中的意義[J].臨床醫(yī)藥實踐, 2012,21(2):125-127.

[10] 李震霄,鄒洪梅.氧化應(yīng)激促進動脈粥樣硬化機制研究進展[J].中國動脈硬化雜志, 2009,17(8):702-709.

(收稿2016-05-15；修回2016-06-12)

*陜西省教育廳科研計劃項目資助(15JK2089)

△陜西步長制藥有限公司科研部(西安 710075)

▲陜西省中醫(yī)藥研究院(西安 710003)

R543.1

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10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.067