缺血性中風病痰熱證病人生物學指標NDKA、UFDP的臨床意義

韓秀秀，馬　斌，姜　如，王亞云

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缺血性中風病痰熱證病人生物學指標NDKA、UFDP的臨床意義

韓秀秀，馬斌，姜如，王亞云

目的探討缺血性中風病痰熱證病人發病72 h內生物學指標NDKA、UFDP對中風病痰熱證的診斷意義及對預后的評估價值。方法研究納入50例符合標準的中風病痰熱證病人，檢測發病72 h內生物學指標NDKA、UFDP的血清水平，采集發病14 d的美國國立衛生研究院卒中量表(NIHSS)評分、痰熱證評分及發病90 d的Barthel指數(BI)評分。同時納入30名正常人作為對照組。結果中風病發病72 h內，病例組生物學指標UFDP與正常對照組比較有統計學意義(P=0.004)，采用ROC曲線分析發現UFDP的AUC曲線下面積為0.608；生物學指標NDKA與NIHSS評分呈明顯正相關(r=0.360，P=0.010)，與痰熱證評分相關性無統計學意義(r=0.200，P=0.163)，與BI指數呈明顯負相關(r=-0.297，P=0.045)。結論生物學指標UFDP對發病72 h內中風病痰熱證具有一定的診斷價值，生物學指標NDKA對中風病痰熱證病人的近期神經功能缺損程度及遠期功能殘疾水平均具有一定的評估價值。

缺血性中風；痰熱證；生物學指標；NDKA；UFDP

近年來，中醫學術界在“病證結合”研究模式的影響下積極尋找與中風病疾病、證候相關的生物學指標，企圖尋找中風病辨證治療的微觀依據，并在生物學指標與證候的相關性研究上取得豐碩成果。基于目前的研究基礎，本研究選擇生物學指標NDKA(nucleoside diphosphate kinase A)、UFDP(ubiquitin fusion degradation protein)進一步深入探討其在中風病中的證候診斷意義及預后評估價值。

1　資料與方法

1.1臨床資料病例來源于全國9家醫院2011年5月—2013年12月神經內科住院病例。共納入中風病急性期痰熱證病人50例，均符合納入標準及排除標準。納入標準：①符合2010年中華醫學會神經病學分會頒布的《2010中國急性缺血性腦卒中診治指南》腦梗死的疾病診斷標準；②證候診斷采用國家重點基礎研究發展計劃(973計劃)課題組制定的《缺血性中風證候要素診斷量表》，“痰證”和“熱證”診斷同時成立(痰證≥10分，熱證≥10分)；③起病72 h以內；④美國國立衛生研究院卒中量表(National Institute of Health Stroke Scale，NIHSS)分值≥5分且≤22分；⑤年齡≥35歲且≤75歲者；⑥意識清醒，能夠配合臨床四診信息采集者。排除標準：短暫性腦缺血發作(TIA)；腦出血或蛛網膜下腔出血；經檢查證實由腦腫瘤、腦外傷、血液病等引起的卒中病人；合并有肝、腎、造血系統、內分泌系統等嚴重疾病及骨關節病；精神障礙或嚴重癡呆；存在意識障礙者；有卒中病史且遺留后遺癥者。選擇同期門診體檢健康者30名作為正常對照組。

1.2臨床評價按照課題組的科研設計方案，制定統一的標準，對受試者的臨床評價資料由各研究中心經課題組培訓的神經內科醫師負責采集。收集每位健康對照者的年齡、性別等基本資料，并一次性采集空腹血樣標本。每例病人采集如下臨床資料，一般資料：入組當天采集人口學資料、病史、生活習慣、血液檢查信息(血常規、血生化、血凝等)、影像學資料(頭顱CT或頭顱MRI)。②生物學指標：采集病人發病72 h內空腹5 h以上肘靜脈血，采用酶聯免疫吸附試驗檢測生物學指標NDKA、UFDP的血清水平。③近期預后：分別評價病人發病14 d疾病、證候的預后情況。疾病：使用美國國立衛生研究院卒中量表評估神經功能缺損程度。證候：使用《缺血性中風證候評價量表》評價證候輕重程度(痰熱證評分=痰濕證評分+內火證評分)。 ④遠期預后：采用Barthel指數(Barthel index，BI)評價病人發病90 d的功能殘疾水平作為遠期預后。

2　結　果

2.1一般資料正常對照組采集年齡、性別等基本信息，病例組除此之外采集患病情況如高血壓、冠心病、糖尿病、高脂血癥。詳見表1。

表1　兩組基本資料比較

2.2生物學指標NDKA、UFDP對中風病痰熱證的診斷價值對病例組與正常對照組的生物學指標血清水平進行組間差異比較和ROC曲線分析。結果顯示：正常對照組生物學指標NDKA血清水平為(26.69±2.06)ng/mL，病例組血清水平為(27.68±1.92)ng/mL，兩組比較無統計學意義(P=0.727)。正常對照組生物學指標UFDP血清水平為(33.83±1.49)ng/mL，病例組血清水平為(57.05±6.04)ng/mL，兩組比較有統計學意義(P=0.004)。兩組NDKA、UFDP血清水平均值比較發現：正常對照組<病例組(見圖1)。進一步采用ROC曲線分析發現：生物學指標NDKA的AUC曲線下面積(area under the curve，AUC)0.503，提示生物學指標NDKA在中風病發病72 h內對痰熱證幾乎沒有診斷價值(cutoff值：44.07 ng/mL)；生物學指標UFDP的AUC曲線下面積0.608，提示生物學指標UFDP在中風病發病72 h內對痰熱證具有較低的診斷價值(cutoff值：44.90 ng/mL，敏感性：46.0%，特異性：99.7%)。詳見圖2。

注：與正常對照組比較，P<0.05。

2.3生物學指標NDKA、UFDP血清水平與預后的相關性研究選擇線性回歸方法分析中風病痰熱證病人發病72 h內生物學指標NDKA、UFDP與預后的相關性。近期預后評價包括發病第14天疾病、證候兩方面評價：疾病評價選用NIHSS評分評價其神經功能缺損程度，證候評價選用《缺血性中風證候評價量表》進行痰熱證輕重程度的評價；遠期預后選擇發病90 d BI指數評價其功能殘疾水平。結果發現：生物學指標NDKA與NIHSS評分呈明顯正相關(r=0.360，P=0.010)，與痰熱證評分無相關性(r=0.200，P=0.163)，與BI指數呈明顯負相關(r= -0.297，P=0.045)；生物學指標UFDP與NIHSS評分無明顯相關性(r=0.015，P=0.915)，與痰熱證評分無明顯相關性(r=0.014，P=0.922)，與BI指數無明顯相關性(r= -0.060，P=0.693)。詳見表2。

表2　生物學指標NDKA、UFDP與預后的相關性

3　討　論

近年來，中風病研究者們嘗試從多角度、多學科進行挖掘探索生物學指標與中風病的關系，并在證候和生物學指標的相關性方面取得豐碩成果[1-2]。如研究者發現急性缺血性中風始發狀態火熱證組病人的火熱證評分與白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)含量呈正相關，故認為IL-6、TNF-α升高水平可作為判定火熱證與非火熱證的微觀指標等[3-4]。臨床實用的生物學指標，應具有快速、低廉、敏感、特異的特點，如B型利鈉肽(BNP)在充血性心力衰竭中的快速診斷作用[5]。但是，目前在臨床實踐中仍然缺乏與中風病證候相關的特異性指標[6]，因此仍然需要進一步探索方便臨床中風病證候診斷的特異、敏感、實驗室檢測的生物學指標。本研究選擇的生物學指標NDKA、UFDP為近年來發現的與中風病急性期相關的相對新穎性指標。NDKA是在神經元中表達，用于催化ATP終端磷酸核苷酸轉移三磷酸的酶，目前研究認為其參與腦卒中后的缺血瀑布中[7-8]，并發現NDKA血清水平在中風發病后3 h濃度增加[9]。UFDP是細胞內蛋白質選擇性降解主要途徑泛素化-蛋白酶體系統(UPS)的重要組成成分，研究發現人死后及其他大腦損傷模型中UFDP腦脊液水平均顯著升高，同時發現腦梗死急性發病3 h內UFDP的血清水平上升[10]。因此目前研究認為生物學指標NDKA對缺血性中風病急性期診斷具有一定的價值，可作為缺血性中風病的輔助檢查指標。

本研究選用ROC曲線分析中風病痰熱證病人發病72 h內生物學指標NDKA、UFDP對中風病痰熱證的診斷價值，并發現生物學指標UFDP對中風病痰熱證具有一定的診斷價值，這符合目前的研究結果，并在時間維度上增加了UFDP對中風病的診斷價值，但是將其作為中風病痰熱證的診斷性生物學指標仍需要進一步研究證實。研究未能發現生物學指標NDKA對中風病痰熱證的診斷價值，①可能與腦組織急性缺血后側支循環建立改善腦組織供血有關；②可能與本研究樣本量較少影響了研究質量有關。研究采用線性回歸分析中風病痰熱證病人發病72 h內生物學指標NDKA、UFDP對其近期預后及遠期預后的評估價值，研究分別選擇具有較高信度、效度、反應度的神經功能缺損評價量表NIHSS量表[11]采集其NIHSS評分、選擇《缺血性中風證候評價量表》采集痰熱證評分作為近期預后的疾病、證候評價性指標，選擇BI指數分析其功能殘疾水平作為遠期預后的評價指標。結果發現生物學指標NDKA與發病14 d NIHSS評分、發病90 d BI指數均具有統計學意義，提示其對中風病痰熱證病人的近期神經功能缺損程度及遠期功能殘疾水平均具有一定的評估價值。

本研究雖未能獲得中風病急性期證候診斷的敏感特異性指標，但是對中風病急性期相關生物學指標做了進一步篩選。研究發現生物學指標UFDP在發病72 h內對中風病痰熱證具有一定診斷價值，生物學指標NDKA對中風病痰熱證病人的近期預后、遠期預后均具有一定的評估價值，提示可將其作為中風病輔助檢查性生物學指標。但是本研究樣本量小，尚需臨床大樣本和基礎研究來支持和驗證生物學指標NDKA、UFDP的作用。

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(本文編輯郭懷印)

Clinical Significance of Serum NDKA and UFDP in Acute Ischemic Stroke Patients with Phlegm-heat Syndrome

Han Xiuxiu，Ma Bin，Jiang Ru，Wang Yayun

Dongzhimen Hospital of Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100700，China

Ma Bin

ObjectiveTo identify the value of the two biological makers nucleoside diphosphate kinase A(NDKA)，ubiquitin fusion degradation protein(UFDP) for the the diagnosis and evaluation prognosis in acute ischemic stroke patients with phlegm-heat syndrome.MethodsFifty patients with phlegm-heat syndrome and 30 age and gender matched healthy subjects were included in the study. The serum NDKA，UFDP levels were measured by ELISA kits at within 3 days of onset，and NIHSS scores，phlegm-heat syndrome scores were measured at day 14，BI scores were measured at day 90 after the onset.ResultsThere was a significant difference in serum UFDP(P=0.004) between acute stroke patients within 3 days of onset and healthy controls.The ROC curve of UFDP for the diagnosis of phlegm-heat syndrome of traditional Chinese medicine(TCM) in acute ischemic stroke was 0.608. There was a significantly positive correlation between the serum NDKA levels and NIHSS scores(r=0.360，P=0.010)，a significantly negative correlation between it and BI scores (r= -0.297，P=0.045)，but a significant correlation was not found between the NDKA levels and phlegm-heat syndrome scores.ConclusionThe serum UFDP concentration exhibit diagnostic value for the phlegm-heat syndrome of TCM in patients with acute ischemic stroke，and the serum NDKA concentration within 3 days of onset exhibit evaluation value for recent nerve function defect degree and long-term function disability levels in acute ischemic stroke patients with phlegm-heat syndrome.

ischemic stroke；phlegm-heat syndrome；biomarkers；nucleoside diphosphate kinase A；ubiquitin fusion degradation protein

國家自然科學基金項目(No.81173230)；國家科技重大專項資助項目(No.2009ZX09502-028)

北京中醫藥大學東直門醫院(北京 100700)

馬斌，E-mail：mabin010@yahoo.com.cn

R743R255.2

A

10．3969/j．issn．1672-1349．2016．16．004

1672-1349(2016)16-1841-03

2015-12-09)