轉化生長因子β1及轉化生長因子β受體基因多態性與腦動靜脈畸形患者腦出血的關系研究

魏健強，李 健，薛婷婷，馬 劍

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轉化生長因子β1及轉化生長因子β受體基因多態性與腦動靜脈畸形患者腦出血的關系研究

魏健強，李 健，薛婷婷，馬 劍

目的探討轉化生長因子β1(TGFβ1)及轉化生長因子β受體(TGFβR2)基因多態性與腦動靜脈畸形患者腦出血的關系。方法選取2012年4月—2015年4月延安大學附屬醫院收治的腦動靜脈畸形患者106例，根據腦出血發生情況分為腦出血組46例與非腦出血組60例。采用聚合酶鏈反應限制性片段長度多態性技術(PCR-RFLP)檢測TGFβ1、TGFβR2基因多態性，腦動靜脈畸形患者腦出血發生風險的分析采用多因素logistic回歸分析。結果兩組患者TGFβ1基因型及等位基因頻率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。兩組患者TGFβR2基因型比較，差異無統計學意義(P>0.05)；腦出血組患者TGFβR2基因G等位基因頻率高于非腦出血組(P<0.05)。多因素logistic回歸分析結果顯示，攜帶TGFβR2基因G等位基因的腦動靜脈畸形患者腦出血發生風險是非攜帶者的3.312倍〔RR=3.312，95%CI(1.476，7.624)，P<0.05〕。結論攜帶TGFβR2基因G等位基因的腦動靜脈畸形患者腦出血發生風險增高，但不受TGFβ1基因多態性的影響

顱內動靜脈畸形；轉化生長因子β1；受體，轉化生長因子β；多態性，單核苷酸；腦出血

魏健強，李健，薛婷婷，等.轉化生長因子β1及轉化生長因子β受體基因多態性與腦動靜脈畸形患者腦出血的關系研究[J].實用心腦肺血管病雜志，2016，24(8)：39-41.[www.syxnf.net]

WEI J Q，LI J，XUE T T，et al.Relationship between gene polymorphism of TGFβ1，TGFβR2 and cerebral hemorrhage in patients with intracranial arteriovenous malformations[J].Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease，2016，24(8)：39-41.

目前，臨床通常采用病灶切除術治療腦動靜脈畸形，但患者術后腦出血發生率較高，有學者認為腦動靜脈畸形病灶中過度的血管重建是導致腦出血的重要原因[1]，準確評估腦動靜脈畸形患者預后及腦出血發生風險具有重要的臨床意義[2]。轉化生長因子β1(TGFβ1)是一種促血管生成因子，近年研究表明，TGFβ1及轉化生長因子β受體(TGFβR2)基因多態性是多種遺傳性腦血管疾病及出血性疾病的危險因素[3]，但目前其對腦動靜脈畸形患者腦出血的影響尚不明確。本研究旨在探討TGFβ1及TGFβR2基因多態性與腦動靜脈畸形患者腦出血的關系，以期從遺傳學角度為腦動靜脈畸形患者腦出血的防治提供參考，現報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2012年4月—2015年4月延安大學附屬醫院收治的腦動靜脈畸形患者106例，均依據臨床表現、顱腦CT或MRI檢查確診，并對本研究知情同意；排除有腦出血家族史、肝腎疾病、心血管疾病病史患者等。根據腦出血發生情況將所有患者分為腦出血組46例與非腦出血組60例。兩組患者性別、年齡、吸煙率及Spetzler-Martin分級比較，差異無統計學意義(P>0.05，見表1)，具有可比性。

表1　兩組患者一般資料比較

注：a為t值

1.2方法

1.2.1標本采集方法采集兩組患者空腹外周靜脈血2 ml，采用二水乙二胺四乙酸抗凝并置于-80 ℃環境中備用、待測。

1.2.2引物合成方法采用德國Qiagen公司生產的全血DNA試劑盒提取DNA，采用美國ABI公司生產的7300PCR儀進行擴增，以β-actin為內參照(基因庫序列號：AY128650)。采用Primer 5.0軟件進行引物設計，通過http：//www.ncbi.nlm.nih.gov GeneBank檢索發現TGFβ1基因、TGFβR2基因多態性位點分別為rs1800469、rs3087465，分別位于上游509 bp、875 bp處。采用上海生工生物工程技術服務有限公司合成的正向引物作為測序引物，采用聚合酶鏈反應限制性片段長度多態性技術(PCR-RFLP)檢測TGFβ1、TGFβR2基因多態性，TGFβ1、TGFβR2基因上下游引物及擴增片段見表2。

1.2.3聚合酶鏈式反應(PCR)采用25 μl反應體系，包含1 U/μl Tag酶1 μl和200 ng DNA模板。PCR反應條件：95 ℃預變性5 min，95 ℃變性30 s，TGFβ1、TGFβR2分別在60 ℃、58 ℃退火45 s，72 ℃延伸60 s，共進行38個循環，最后72 ℃延伸10 min；提取PCR擴增產物6 μl，160 V電壓下在2.0%瓊脂糖凝膠上電泳10 min；采用限制性內切酶Bsu361酶切TGFβ1的PCR產物，采用限制性內切酶Rsal酶切TGFβR2的PCR產物；提取PCR酶切產物10 μl，150V電壓下在3.0%瓊脂糖凝膠上電泳20 min；采用凝膠成像系統拍攝存圖后觀察電泳條帶位置及數目。TGFβ1、TGFβR2擴增產物分別有3個片段，前者分別為150 bp、89 bp、61 bp，后者分別為124 bp，99 bp、25 bp(見圖1)；前者基因型分別為TT、TC、CC，后者基因型分別為GG、GA、AA；前者堿基包括T和C，后者堿基包括G和A。

表2　TGFβ1、TGFβR2上下游引物及擴增片段

注：TGFβ1=轉化生長因子β1，TGFβR2=轉化生長因子β受體

注：A為TGFβ1，B為TGFβR2；TGFβ1=轉化生長因子β1，TGFβR2=轉化生長因子β受體

圖1TGFβ1、TGFβR2 PCR擴增及電泳結果

Figure 1PCR amplification and electrophoretic results of TGFβ1and TGFβR2

2　結果

2.1TGFβ1基因型及等位基因頻率兩組患者TGFβ1基因型及等位基因頻率比較，差異無統計學意義(P>0.05，見表3)。

2.2TGFβR2基因型及等位基因分布兩組患者TGFβR2基因型比較，差異無統計學意義(P>0.05)；腦出血組患者TGFβR2基因G等位基因頻率高于非腦出血組，差異有統計學意義(P<0.05，見表4)。多因素logistic回歸分析結果顯示，攜帶TGFβR2基因G等位基因的腦動靜脈畸形患者腦出血發生風險是非攜帶者的3.312倍〔RR=3.312，95%CI(1.476，7.624)，P<0.05〕。

表3兩組患者TGFβ1基因型及等位基因頻率比較(%)

Table3ComparisonofgenotypeandallelefrequencyofTGFβ1betweenthetwogroups

組別例數基因型TT TC CC等位基因T C腦出血組4686862613050非腦出血組6088104814060χ2值2.714.61P值>0.05>0.05

表4兩組患者TGFβR2基因型及等位基因頻率比較(%)

Table 4Comparison of genotype and allele frequency of TGFβR2 between the two groups

組別例數基因型AA GA GG等位基因A G腦出血組4662616620180非腦出血組60261815634166χ2值5.3511.14P值>0.05<0.05

3　討論

TGFβ1是轉化生長因子β(TGFβ)的異構體，位于染色體19q13.1.2上，全長23.56 kbp，包含6個內含子和7個外顯子。TGFβ1包含多個基因多態性位點，而位于啟動子區上游的TGFβ1位點基因多態性可影響TGFβ1的表達，進而參與腦出血的發生、發展及轉歸。但目前TGFβ1基因多態性導致腦出血的作用機制尚不明確，尤其是在腦動靜脈畸形患者中[4-6]。TGFβR2是TGFβ的主要受體，位于啟動子區上游的TGFβR2位點基因多態性可提高其轉錄活性，進而影響TGFβR2的表達，而TGFβR2表達水平可影響TGFβ1功能[7-12]。本研究從遺傳學角度探討TGFβ1及TGFβR2基因多態性與腦動靜脈畸形患者腦出血的關系，旨在為腦動靜脈畸形患者腦出血的有效防治提供參考。

本研究結果顯示，兩組患者TGFβ1基因型及等位基因頻率間、TGFβR2基因型間無明顯差異，而腦出血組患者TGFβR2基因G等位頻率高于非腦出血組；多因素logistic回歸分析結果，攜帶TGFβR2基因G等位基因的腦動靜脈畸形患者腦出血發生風險是非攜帶者的3.312倍，提示攜帶TGFβR2基因G等位基因的腦動靜脈畸形患者腦出血發生風險增高，但不受TGFβ1基因多態性影響。但目前有關TGFβ1及TGFβR2基因多態性與腦動靜脈畸形患者腦出血關系的研究報道較為少見，本研究納入的樣本量及觀察指標有限，限于臨床條件未進行相關因素的校正，仍需在今后的研究中進一步完善。

綜上所述，本研究從遺傳學角度探討了TGFβ1及TGFβR2基因多態性與腦動靜脈畸形患者腦出血的關系，發現攜帶TGFβR2基因G等位基因的腦動靜脈畸形患者腦出血發生風險增高，但不受TGFβ1基因多態性影響，應引起臨床重視。但考慮到基因多態性的種群、地區差異及腦出血危險因素的多樣性，本研究所得結果及結論仍需進一步驗證，而TGFβ1及TGFβR2基因多態性導致腦動靜脈畸形患者腦出血的具體作用機制也需深入探討。

作者貢獻：魏健強進行實驗設計與實施、資料收集整理、撰寫論文、成文并對文章負責；李健、薛婷婷進行實驗實施、評估、資料收集；馬劍進行質量控制及審校。

本文無利益沖突。

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(本文編輯：鹿飛飛)

Relationship between Gene Polymorphism of TGFβ1，TGFβR2 and Cerebral Hemorrhage in Patients with Intracranial Arteriovenous Malformations

WEIJian-qiang，LIJian，XUETing-ting，MAJian.

DepartmentofCardiac-cerebralVascularDisease，theAffiliatedHospitalofYan′anUniversity，Yan′an716000，China

LIJian，DepartmentofCardiac-cerebralVascularDisease，theAffiliatedHospitalofYan′anUniversity，Yan′an716000，China；E-mail：2059025965@qq.com

ObjectiveTo investigate the relationship between gene polymorphism of TGFβ1，TGFβR2 and cerebral hemorrhage in patients with intracranial arteriovenous malformations.MethodsA total of 106 patients with intracranial arteriovenous malformations were selected in the Affiliated Hospital of Yan′an University from April 2012 to April 2015，and they were divided into A group(complicated with cerebral hemorrhage，n=46)and B group(did not complicate with cerebral hemorrhage，n=60)according to the incidence of cerebral hemorrhage.PCR-RFLP was used to detect the gene polymorphism of TGFβ1and TGFβR2，and mutivariate logistic regression analysis was used to analyze the risk of cerebral hemorrhage in patients with intracranial arteriovenous malformations.ResultsNo statistically significant differences of genotype or allele frequency of TGFβ1was found between the two groups，nor was genotype of TGFβR2(P>0.05)；while G allele frequency of TGFβR2 of A group was statistically significantly higher than that of B group(P<0.05).Mutivariate logistic regression analysis showed that，occurrence risk of cerebral hemorrhage of intracranial arteriovenous malformations patients with G allele of TGFβR2 was 3.312 times of patients without G allele of TGFβR2 〔RR=3.312，95%CI(1.476，7.624)，P<0.05〕.ConclusionG allele of TGFβR2 can increase the occurrence risk of intracranial arteriovenous malformations，while it is not affected by gene polymorphism of TGFβ1.

Intracranial arteriovenous malformations；Transforming growth factor beta1；Receptors，transforming growth factor beta；Polymorphism，single nucleotide；Cerebral hemorrhage

國家自然科學基金(81341112)

716000陜西省延安市，延安大學附屬醫院心腦血管專科病區

李健，716000陜西省延安市，延安大學附屬醫院心腦血管專科病區；E-mail：2059025965@qq.com

R 743.4

A

10.3969/j.issn.1008-5971.2016.08.010

2016-04-05；

2016-07-20)