呋喃西林片2015年版微生物限度檢查標(biāo)準(zhǔn)及探索性研究

李 儼 姜 麗

呋喃西林片2015年版微生物限度檢查標(biāo)準(zhǔn)及探索性研究

李 儼 姜 麗

目的 為了適應(yīng)《中國藥典》2015年版的出版，新版藥典中微生物限度檢查法中對部分培養(yǎng)基和試驗(yàn)菌株進(jìn)行了改動(dòng)，需要對呋喃西林片重新建立微生物限度檢查方法。方法 采用薄膜過濾法作為需氧菌總數(shù)測定及霉菌和酵母菌總數(shù)的測定（總沖洗量均為1 000 ml）；薄膜過濾法作為控制菌檢查方法。結(jié)果 需氧菌總數(shù)測定可采用薄膜過濾法，霉菌和酵母菌總數(shù)的測定可采用薄膜過濾法，控制菌檢查金黃色葡萄球菌可采用薄膜過濾法（總沖洗量為1 000 ml）、銅綠假單胞菌可采用培養(yǎng)基稀釋法（總沖洗量為1 000 ml）。結(jié)論 經(jīng)多次試驗(yàn)方法準(zhǔn)確精密度強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于該制劑的微生物限度檢查。

2015年版藥典；薄膜過濾法；呋喃西林片；抑菌；菌液；回收率

呋喃西林片是由呋喃西林、10%淀粉漿、硬脂酸鎂、滑石粉混合制成，具有消毒防腐。用于皮膚、粘膜、腸道的消毒。為了人民群眾的用藥安全和保證藥品質(zhì)量，進(jìn)行微生物限度檢查方法驗(yàn)證試驗(yàn)，采用最適宜的方法，盡可能的檢出不合格產(chǎn)品。

1 儀器、培養(yǎng)基與菌種

1.1 儀器

SPX-150B-Z型生化培養(yǎng)箱；GHB-9162型電熱恒溫培養(yǎng)箱；GZX-9070型電熱干燥箱；LMQ·C型高壓鍋；JA5003型電子天平（d=0.01 g）。

1.2 培養(yǎng)基

胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基、腸道菌增菌液體培養(yǎng)基、麥康凱液體培養(yǎng)基、RV沙門增菌液體培養(yǎng)基、木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基、溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基、甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基、pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、0.9%無菌氯化鈉溶液均符合《中國藥典》2015年版四部的要求［1］。以上培養(yǎng)基均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1.3 菌種

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉均符合《中國藥典》2015年版四部的要求。

1.4 供試品

呋喃西林片，解放軍空軍某醫(yī)院，批號20160202、20160210、20160204

2 方法與結(jié)果

2.1 需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證

2.1.1 供試液制備 取供試品10 g，加入45℃ pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 ml，振蕩混勻，取上清液作為1：10供試液。

2.1.2 計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn) 試驗(yàn)組：

（1）培養(yǎng)基稀釋法（0.1 ml）：取1：10供試液10 ml，加入試驗(yàn)菌0.1 ml，混勻，分別吸取2 ml注入2個(gè)平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，置35℃溫度培養(yǎng)3～5 d逐日觀察結(jié)果，按平皿法測定其菌數(shù)。

（2）薄膜過濾法：取1：10供試液1 ml，濾膜孔徑為0.45 μm，直徑為50 mm，每張濾膜每次沖洗量為100 ml，總沖洗量為700 ml。

（3）薄膜過濾法：取1：10供試液1 ml，濾膜孔徑為0.45 μm，直徑為50 mm，每張濾膜每次沖洗量為100 ml，總沖洗量為1 000 ml。

供試品對照組：取1：10供試液，以稀釋液代替菌液同試驗(yàn)組操作。

菌液對照組：用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液代替供試液，按試驗(yàn)組操作加入試驗(yàn)菌液并進(jìn)行微生物回收試驗(yàn)。

2.1.3 結(jié)果 詳見表1～3。

以上5種菌的回收率薄膜過濾法比值均在0.5～2。

2.2 控制菌檢查方法的驗(yàn)證

2.2.1 取供試品10 ml，加入45℃ pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 ml，振蕩混勻，作為1：10供試液。

2.2.2 金黃色葡萄球菌 陽性對照試驗(yàn)組：

薄膜過濾法：取1：10供試液上清液10 ml，用45℃ pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗，過濾，共10次，在最后一次沖洗液中加入10～100 cfu金黃色葡萄球菌試驗(yàn)菌液1 ml，總沖洗量為1 000 ml，沖洗后取出濾膜接入100 ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，置規(guī)定溫度培養(yǎng)48 h，取上述培養(yǎng)物，劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)72 h，觀察結(jié)果。

陰性對照組：取稀釋液10 ml，用100 ml 45℃ pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗，取出濾膜接入100 ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置規(guī)定溫度培養(yǎng)48 h，取上述培養(yǎng)物，劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)72 h，觀察結(jié)果。

結(jié)果：薄膜過濾法總沖洗量為1 000 ml，檢出。

2.2.3 銅綠假單胞菌 陽性對照試驗(yàn)組：

薄膜過濾法：取1：10供試液上清液10 ml，用45℃ pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗，過濾，共10次，在最后一次沖洗液中加入10～100 cfu金黃色葡萄球菌試驗(yàn)菌液1 ml，總沖洗量為1 000 ml，沖洗后取出濾膜接入100 ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，置規(guī)定溫度培養(yǎng)48 h，取上述培養(yǎng)物，劃線接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng)72 h，觀察結(jié)果。

陰性對照組：取稀釋液10 ml加入100 ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng)24 h后按照薄膜過濾法方法觀察結(jié)果。

結(jié)果：薄膜過濾法總沖洗量為1 000 ml，檢出。

3 結(jié)論

我們按照《中國藥典》2015年版四部微生物限度檢查法計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)中以上5種菌的比值均在0.5～2。符合藥典規(guī)定；MPN法的精確度和準(zhǔn)確度不及平皿計(jì)數(shù)，故沒采用。按照《中國藥典》2015版四部微生物限度檢查法控制菌的方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)，金黃色葡萄球菌可采用培養(yǎng)基稀釋法（取1：10供試液10 ml加入1 000 ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中）、銅綠假單胞菌可采用培養(yǎng)基稀釋法（取1：10供試液10 ml加入1 000 ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中）時(shí)，陽性對照試驗(yàn)組檢出，陰性對照組未檢出，表明該控制菌檢查方法的專屬性好，適用于呋喃西林片的控制菌檢查［3］。

表1 菌液組（菌落計(jì)數(shù)結(jié)果，單位：cfu/ml）

表2 試驗(yàn)組

表3　試驗(yàn)組

［1］ 國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典［M］. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：140-148.

［2］ 中國藥品生物制品檢定所，中國藥品檢驗(yàn)總所. 中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范［M］. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：351.

［3］ 李霞，董衛(wèi)紅，韓曼雪，等. 新清寧片微生物限度檢查方法研究［J］. 中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2010（16）：825-826.

Inspection Standard and Exploratory Research of Microbial Limit in 2015 With Nitrofurazone

LI Yan JIANG Li Antibiotics Office，F(xiàn)ood and Drug Inspection of Jilin City，Jilin Jilin 132001，China

【Abstract】

Objective In order to adapt to the chinese pharmacopoeia 2015 edition of the publication，the new pharmacopoeia in microbial limit test on the part of the culture medium and test strains in the changes，need of nitrofurazone piece to establish microbial limit inspection method. Methods The membrane filtration method is adopted as the determination of the total number of aerobe and determination of the total number of mold and yeast（always flush volumes are 1 000 ml）. Membrane filtration method as the control bacteria checking method. Results Determination of the total number of aerobe membrane filtration method can be used，the total number of mold and yeast can be used for determination of the membrane filtration method，control check bacteria staphylococcus aureus can use membrane filtration method（total capacity of 1 000 ml）flushing、pseudomonas aeruginosa culture medium dilution method can be used（total capacity of 1 000 ml）flushing. Conclusion After repeated strong test method for accurate precision，good repeatability，can be used for the preparation of microbial limit examination.

2015 edition pharmacopoeia，Culture medium dilution method，Nitrofurazone，Bacteriostatic，Bacteria liquid，Recovery rate

R97

A

1674-9316（2016）15-0121-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2016.15.071

吉林市食品藥品檢驗(yàn)所抗生素室，吉林 吉林 132001