Ki-67、Bmi-1蛋白在結腸癌患者中的表達及預后分析

劉　志　趙春清　李　威　張　彬　高立學　閆　威　劉　松　張　濤河北省保定市第二醫院普外科，河北保定　071000

Ki-67、Bmi-1蛋白在結腸癌患者中的表達及預后分析

劉志趙春清李威張彬高立學閆威劉松張濤
河北省保定市第二醫院普外科，河北保定071000

目的 探討Ki-67、Bmi-1在結腸癌及癌旁正常組織中的表達意義、相互關系及評估預后的價值。方法 選取2009年1月～2012年12月保定市第二醫院收治的結腸癌患者60例為觀察組，同時選擇其癌旁正常組織20例為對照組。采用免疫組織化學法檢測兩組結腸癌組織中Ki-67、Bmi-1的表達情況，并分析其與結腸癌臨床病理特點、預后的關系。結果 免疫組織化學檢測結果顯示，觀察組Ki-67、Bmi-1表達明顯高于對照組（P＜0.05），觀察組Ki-67和Bmi-1的表達均與淋巴結轉移、組織分化程度、TNM分期相關（P＜0.05），而與年齡、性別、腫瘤大小無關（P＞0.05），觀察組患者結腸癌組織中Ki-67、Bmi-1表達呈正相關（r=0.572，P＜0.05），Ki-67、Bmi-1表達陽性者3年生存率與表達陰性者比較，差異無統計學意義 （P＞0.05）。結論 Ki-67、Bmi-1表達與結腸癌發生、發展相關，目前還不能確定是否與與結腸癌不良預后有關。

Ki-67；Bmi-1；結腸癌；免疫組化

［Abstract］Objective To investigate the expression，relationship and the prognostic value of Ki-67 and Bmi-1 in colon cancer and adjacent normal tissues.Methods Sixty patients with colon cancer from January 2009 to December 2012 in the Second Hospital of Baoding City were selected as observation group，at the same time 20 cases of the adjacent normal tissues were collected as the control group.Expression of Ki-67 and Bmi-1 in colon tissues of two groups were detected by immunohistochemical staining，and the relationship between the expression of Ki-67，Bmi-1 and clinical pathological characteristics，prognosis were analyzed.Results Immunohistochemical detection showed that，expressions of Ki-67 and Bmi-1 in the observation group were significantly higher than those of the control group（P＜0.05），expressions of Ki-67 and Bmi-1 in the observation group were related with lymphnode metastasis，diferentiation，and TNM staging（P＜0.05），while the expression of the two genes had nothing to do with age，the gender，size（P＞0.05）.The expression of Ki-67 was positively correlated with Bmi-1 in the colon cancer tissues of the observation group（r=0.572，P＜0.05）.3 years survival rate between patients with Ki-67 and Bmi-1 positive expression and negative expression had no statistically significant difference（P＞0.05）.Conclusion The expression of Bmi-1 and Ki-67 is related to the occurrence and development of colon cancer，but can not sure that is related to the poor prognosis of colon cancer.

［Key words］Ki-67；Bmi-1；Colon cancer；Immunohistochemisty

Ki-67是應用最為廣泛的增生細胞標志物之一，反映細胞分裂和增殖活性，其在腫瘤組織中的表達高低與腫瘤的增殖密切相關［1-2］。Bmi-1是多梳基因家族（Polycomb group genes，PcG）的重要成員之一，參與調節細胞增殖、分化與衰老，并且維持多種正常干細胞和腫瘤干細胞的自我更新和增殖［3］。本研究通過免疫組化技術檢測Ki-67、Bmi-1在結腸癌組織中的表達，研究兩者的相關性及其與結腸癌發生、發展的關系，以期為結腸癌的臨床診療與預后判斷提供有價值的參考指標。

1　資料與方法

1.1一般資料

選取2009年1月～2012年12月保定市第二醫院收治并經病理證實的結腸癌患者60例，均為腺癌，同時選擇其癌旁正常組織20例（距癌灶＞10 cm）。所有患者術前均未行放療、化療及生物靶向治療等，全部患者術后標本均經病理證實。其中男36例，女24例；年齡25～78歲，中位年齡59歲；淋巴結轉移陽性29例，陰性31例；高中分化32例，低分化28例；腫瘤直徑≥5 cm 28例，＜5 cm 32例；按美國癌癥聯合會（AJCC）制訂的TNM病理分期標準：Ⅰ～Ⅱ期30例，Ⅲ～Ⅳ期30例。所有病例均進行電話隨訪，死亡時間以月為計量單位，隨訪至2015年12月31日，隨訪時間1～36個月，無失訪病例。

1.2試劑

Bmi-1兔抗人單克隆抗體購自美國AB-GENT公司，Ki-67兔抗人單克隆抗體，即用型S-P免疫組化染色試劑盒均為Santa cruz公司產品（北京中杉金橋生物技術有限公司），用已知陽性標本作為陽性對照，以PBS代替一抗為陰性對照。

1.3方法

所有標本均經10%中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，連續制成4 μm厚切片若干張，均進行SP法免疫組化染色，實驗步驟按試劑盒說明書進行。

1.4免疫結果的判定

Ki-67定位于細胞核，呈棕黃色顆粒沉著，每張切片觀察5個高倍鏡視野，每個視野計數100個腫瘤細胞，共計500個細胞，陽性細胞所占比例≥10%為陽性，＜10%為陰性。Bmi-1陽性染色為棕黃褐色顆粒，定位于細胞質內。采用雙評分法判定結果：①5個高倍鏡視野（400倍），按陽性細胞百分率（A值）評分：＜25%為1分，25%～50%為2分，＞50%為3分；②按染色強度（B值）評分：不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。結果判定：A+ B＞2分為陽性，≤2分為陰性。

1.5統計學方法

采用SPSS 13.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，相關性檢驗采用Spearman檢驗，生存率計算采用Kaplan-Meier法，檢驗采用Log-Rank法；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1Ki-67、Bmi-1在結腸癌及癌旁組織中的表達

Ki-67的表達主要定位于細胞核，呈棕黃色顆粒，見圖1。Ki-67在結腸癌組織中的表達率高于癌旁正常組織，差異有統計學意義（P＜0.05），Bmi-1的表達主要定位于細胞質，呈棕黃色顆粒，見圖2。Bmi-1在結腸癌組織中的表達率高于癌旁正常組織，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1　Ki-67、Bmi-1在結腸癌和癌旁正常組織中的表達［n（%）］

圖1　Ki-67在結腸癌組織中的表達（SP，400×）

圖2　Bmi-1在結腸癌組織中的表達（SP，400×）

2.2Ki-67、Bmi-1表達與結腸癌臨床病理特征的關系

Ki-67、Bmi-1在結腸癌組織中的表達均與年齡、性別、腫瘤大小無關，差異無統計學意義（P＞0.05），而與淋巴結轉移、組織分化程度、TNM分期相關，且隨著淋巴結轉移，組織分化程度減低，TNM分期增加，Ki-67、和Bmi-1的表達逐漸增加，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2　Ki-67、Bmi-1蛋白表達與結腸癌臨床病理特征的關系［n（%）］

2.3ki-67、Bmi-1的表達在結腸癌中的相關性

本研究發現，Ki-67與Bmi-1均陽性表達者37例，均陰性表達者12例，Spearman相關分析顯示，上述兩者呈正相關（r=0.572，P＜0.01）。見表3。

表3　結腸癌組織中VEGF的蛋白表達與Bmi-1的相關性

2.4Ki-67、Bmi-1表達與患者預后的關系

本組研究中60例結腸癌患者3年生存率為65.00%（39例），Ki-67表達陽性者（生存率為62.22%）與陰性者（生存率為73.33%）之間3年生存率經Log-Rank法檢驗差異無統計學意義（P＞0.05），Log-Rank法檢驗比較Bmi-1表達陽性者（生存率為60.00%）與陰性者（生存率為75.00%）的3年生存率，差異無統計學意義（P＞0.05）。見圖3～4。

圖3　Ki-67陽性者與陰性者生存率

圖4　Bmi-1陽性者與陰性者生存率

3　討論

Ki-67是一種核蛋白，可作為細胞增殖的標志物，在細胞增殖的各期（G1、S、G2和M期）中均有表達，但在細胞靜止G0期不表達，大量的研究表明Ki-67的表達與腫瘤臨床病理分級、淋巴結轉移密切相關，對于判斷腫瘤的性質及侵襲力及評估腫瘤預后也十分重要［4-7］。本研究發現Ki-67在結腸癌組織中表達明顯升高，有淋巴結轉移、組織分化程度低、TNM分期晚者其表達明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.05），這與既往研究結果一致［8］。在前列腺癌及乳腺癌中，Ki-67被認為是一個獨立的預后因子［2，9-10］，而在結直腸癌中Ki-67的預后價值仍存在爭議，Allegra等［11］研究認為在結直腸癌中Ki-67表達與良好的預后相關，但Chen等［12］研究認為在結直腸癌中Ki-67高表達的患者預后較差。本研究隨訪3年發現Ki-67陽性組生存率與Ki-67陰性組生存率比較，差異無統計學意義（P＞0.05），由此認為Ki-67目前還不能作為預測結直腸癌預后的參考因子。

Bmi-1可能通過多種機制介導腫瘤的發生、發展，部分學者研究發現Bmi-1可增強鼻咽癌細胞的運動和侵襲力，乳腺癌中Bmi-1的表達和病理分型、臨床分期及不良預后密切相關，胃癌中Bmi-1的表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移和預后相關［13-17］。本研究發現Bmi-1的表達在結腸癌組織中明顯升高，且隨著淋巴結轉移，組織分化程度減低，TNM分期增加，Bmi-1的表達逐漸增加，差異有統計學意義（P＜0.05），由此可以推測Bmi-1在結腸癌發生、發展、轉移、惡化中具有重要作用，研究研究發現，高表達Bmi-1的大腸癌、鼻咽癌患者預后較差，并認為Bmi-1是判斷不良預后的參考指標［18-20］，但本研究發現 Bmi-1陽性組患者3年生存率與Bmi-1陰性組患者3年生存率無明顯差異（P＞0.05），不支持上述觀點，由此不能認為Bmi-1表達陽性組患者預后更差。

惡性腫瘤的發生、發展是一個復雜的過程，涉及到細胞的增殖、凋亡、侵襲和轉移［21］，是多種因素共同作用的結果，本研究結果經Spearman相關分析顯示Ki-67表達水平與Bmi-1的表達水平呈顯著正相關（r=0.572，P＜0.01），提示在結腸癌發生、發展、惡化的過程中二者可能具有協同作用，但本研究僅是蛋白水平進行分析，Ki-67及Bmi-1基因學及分子水平相互影響機制尚需進一步研究。

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Expression and prognosis analysis of Ki-67 and Bmi-1 in colon cancer

LIU ZhiZHAO ChunqingLI WeiZHANG BinGAO LixueYAN WeiLIU SongZHANG Tao
Department of General Surgery，the Second Hospital of Baoding City，Hebei Province，Baoding071000，China

R735.3

A

1673-7210（2016）08（b）-0122-04

2016-05-10本文編輯：任念）